双益方剂及其有效成分对胰岛素抵抗小鼠胰岛β细胞株胰岛素分泌、增殖、凋亡的影响

目的观察双益方及其有效成分对胰岛素抵抗的小鼠胰岛β细胞株Min6胰岛素分泌水平和细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法培养Min6细胞并分为正常组、IR模型组、二甲双胍组、双益方组、双益方组方单味中药组(山茱萸、黄芪、黄连、葛根、桑白皮、佩兰)及双益方有效成分组(1-脱氧野尻霉素、小檗碱、黄芪甲苷、熊果酸、马钱苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、葛根素)。正常组加入无酚红培养液正常培养;其余各组加入葡萄糖和棕榈酸制作胰岛素抵抗的Min6细胞模型。二甲双胍组加入100μg/L的二甲双胍。双益方组、山茱萸组、黄芪组、黄连组、葛根组、桑白皮组、佩兰组、葛根素组、1-脱氧野尻霉素组、小檗碱组、黄芪甲苷组、马钱苷组、熊果酸组、毛蕊异黄酮葡萄糖苷组分别加入50、100、200μg/L的相应药物。各组于给药24 h后进行胰岛素分泌实验,检测胰岛素分泌水平。各组分别于给药24、48 h采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖能力。于给药24 h后采用双染法检测正常组、IR模型组、二甲双胍组、双益方组的凋亡细胞,计算细胞凋亡率;采用Western blotting法检测细胞中的ERK1/2、p-ERK1/2、MEK1/2蛋白。结果 IR模型组细胞高糖、低糖刺激下胰岛素分泌水平均低于正常组(P均<0.05)。二甲双胍组、黄芪组、葛根组、双益方组、黄芪甲苷组、山茱萸组、1-脱氧野尻霉素组、葛根素组、小檗碱组胰岛素分泌水平高于IR模型组(P均<0.05)。IR模型组细胞增殖能力低于正常组(P均<0.05);二甲双胍组、双益方组、黄芪组、黄芪甲苷组、1-脱氧野尻霉素组、山茱萸组细胞增殖能力高于IR模型组(P均<0.05)。IR模型组细胞凋亡率高于正常组,双益方各组细胞凋亡率均低于IR模型组(P均<0.05)。IR模型组细胞中MEK1/2、ERK1/2、pERK1/2蛋白相对表达量低于正常组(P均<0.05);二甲双胍组及双益方组细胞中MEK1/2、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白相对表达量高于IR模型组(P均<0.05)。结论双益方及其黄芪、葛根、黄芪甲苷、山茱萸、1-脱氧野尻霉素、葛根素、小檗碱等成分可有效提高胰岛素抵抗的Min6细胞的胰岛素分泌水平,促进细胞增殖并抑制其凋亡,作用机制可能与ERK1/2、p-ERK1/2、MEK1/2蛋白表达上调有关。

糖尿病眼肌麻痹患者胰岛素抵抗及β细胞功能分析

目的通过口服葡萄糖-胰岛素释放实验(OGIRT),分析2型糖尿病眼肌麻痹患者胰岛β细胞功能、胰岛素敏感性及胰岛素抵抗与神经病变的关系。方法对32例2型糖尿病眼肌麻痹患者(T2DM+OMP)、32例2型单纯糖尿病患者(T2DM)及32例健康对照者(NC)测定隔夜空腹12 h血糖(FBG)、胰岛素(FINS)、糖化血红蛋白(HbA1c);根据口服葡萄糖耐量试验(OGTT)及胰岛素释放试验(IRT),用稳态模型方法计算各组人群空腹胰岛素抵抗指数(HOMAIR)、胰岛素敏感指数(ISI)及胰岛β细胞功能(HOMA-β),评价基础胰岛素分泌功能和胰岛素抵抗;用△I30/△G30、胰岛素曲线下面积(INSAUC)评价胰岛素分泌功能。结果 T2DM+OMP组FBG、HOMA-IR、HbA1c均显著高于T2DM组及NC组(均P<0.01);FINS低于T2DM组高于NC组(P<0.05);ISI、HOMA-β、△I30/△G30、INSAUC显著低于T2DM组及NC组(均P<0.01)。T2DM组FBG、HOMA-IR、HbA1c高于NC组(均P<0.01),ISI、HOMA-β、△I30/△G30低于NC组(均P<0.01)。结论 2型糖尿病患者同时存在胰岛素分泌缺陷和胰岛素抵抗,糖尿病眼肌麻痹胰岛β细胞功能渐进性减退和胰岛素抵抗渐进性增高,促进了糖尿病微血管及神经病变的发生和发展。通过OGIRT对胰岛素分泌模式及分泌量评价有利于深入理解糖尿病发病机制及合理指导临床工作。

年龄对非糖尿病捐献者胰岛制备过程和功能的影响

目的分析不同年龄捐献者胰腺胰岛制备产量和功能的特点。方法选取2015年6月~2019年12月天津市第一中心医院105例胰腺,均来自非糖尿病器官捐献者,按照<40岁,≥40岁进行分组,其中<40岁组38例,≥40岁组67例。胰岛制备在优良生产规范实验室(good manufacturing practice,GMP)中进行,经过修整,灌注胶原酶,Ricordi消化罐消化,利用连续密度梯度法纯化获得胰岛,检测胰岛产率、活性和葡糖糖刺激的胰岛素分泌能力,评估分离胰岛的数量和质量。结果胰岛纯化前,<40岁组胰岛当量(islet equivalent,IEQ)、IEQ/g较≥40岁组高,差异具有统计学意义(P<0.05),胰岛纯化后<40岁组胰岛个数(islet particle number,IPN)、IPN/g较≥40岁组高,差异具有统计学意义(P<0.01),两组胰岛素分泌差异无统计学意义。结论年轻捐献者可以提高胰岛制备的成功率,非糖尿病年长供者可以获得优质的胰岛。

ANXA1拮抗IL-1β导致的胰岛β细胞功能损伤的机制

目的探究ANXA1拮抗IL-1β引起的胰岛β细胞功能缺陷的作用及机制.方法将ANXA1基因插入pCMV-HA载体中,构建ANXA1过表达质粒,将其转染入小鼠胰岛β细胞系βtc-6细胞后,用IL-1β处理上述细胞,借助于MTT、葡萄糖刺激的胰岛素分泌实验(GSIS)等方法研究ANXA1对胰岛β细胞的保护作用.结果IL-1β导致胰岛β细胞ANXA1表达降低,同时出现胰岛β细胞存活率下降以及胰岛素合成和分泌量减少;而过表达ANXA1可拮抗上述现象的发生.结论ANXA1保护胰岛β细胞免受IL-1β造成的细胞凋亡增加与功能下降.