多囊卵巢综合征大鼠骨骼肌细胞胰岛素受体底物1及其丝氨酸307位点磷酸化的表达

背景:胰岛素受体底物1的丝氨酸307位点磷酸化程度的增加参与了骨骼肌胰岛素抵抗的发生。目的:观察多囊卵巢综合征大鼠骨骼肌细胞胰岛素受体底物1的含量及其丝氨酸307位点磷酸化程度的变化。方法:将大鼠随机分为模型组和对照组,模型组给予人绒毛膜促性腺激素联合胰岛素皮下注射,并配以高脂饮食,构建大鼠多囊卵巢综合征模型;对照组皮下注射生理盐水,正常饲料喂养。结果与结论:干预6周后,Western blot检测结果显示,与对照组相比,模型组大鼠骨骼肌细胞胰岛素受体底物1表达量显著下降(P<0.05),而其丝氨酸307位点磷酸化蛋白表达明显升高(P<0.05)。结果提示,多囊卵巢综合征大鼠骨骼肌细胞中胰岛素受体底物1蛋白表达下调及其丝氨酸307位点磷酸化蛋白表达上调与多囊卵巢综合征大鼠骨骼肌胰岛素抵抗的发生密切相关。

西罗莫司对大鼠烧伤后IRS-1 Ser^(307)磷酸化和胰岛素抵抗的作用

目的 :探讨西罗莫司对大鼠烧伤后胰岛素受体底物 1丝氨酸 30 7(IRS- 1Ser30 7)磷酸化和胰岛素抵抗的作用。方法 :6周龄 SD大鼠 (体质量 16 0～ 170 g)随机分为假烫伤组 (n=8)、烫伤组 (n=8)和烫伤 +西罗莫司组 (n=8)。烫伤组和烫伤 +西罗莫司组大鼠制成烫伤面积为 30 %的 度烫伤模型 ,伤后第 4天禁食 5 h后的大鼠腹腔注射西罗莫司 (0 .4 mg/ kg) 2 h后 ,进行正常血糖高胰岛素葡萄糖钳夹技术实验 ,实验后颈动脉放血处死 ,立即采集肌肉和脂肪标本 ,采用免疫沉淀和免疫印迹方法分析 IRS- 1及其磷酸化丝氨酸 30 7和酪氨酸活性的变化 ,通过免疫组化观察各组肌肉组织中磷酸化哺乳类西罗莫司靶点激酶(m TOR)表达的差异。结果 :正常血糖高胰岛素葡萄糖钳夹技术实验中假烫伤组、烫伤组和烫伤 +西罗莫司组 10 %葡萄糖输注率分别为 (12 .33± 0 .4 2 )、(6 .6 1± 0 .2 7)和 (10 .35± 0 .6 3) m g/ (kg· m in) ,烫伤组和其他 2组比较差异具有统计学意义(P<0 .0 1)。烫伤大鼠肌肉和脂肪组织中 IRS- 1Ser30 7活性较假烫伤组明显升高 (P<0 .0 5 ) ,而 IRS- 1磷酸化酪氨酸活性较假烫伤组明显降低 (P<0 .0 5 )。西罗莫司明显降低烫伤大鼠 IRS- 1Ser30 7活性而明显增加 IRS- 1磷酸化酪氨酸活性 (P<0 .0 5 )。免疫组化?

胰岛素受体底物1在烧伤后胰岛素抵抗中的作用

目的 :观察烧伤后胰岛素受体底物 1(IRS- 1)及其丝氨酸 30 7和酪氨酸磷酸化的变化 ,探讨烧伤后胰岛素抵抗的分子机制。方法 :6周龄 SD大鼠 (体质量 16 0～ 170 g)随机分为假烫伤组 (n=8)和烫伤组 (n=8) ,烫伤组大鼠制成烧伤面积为 30 %的 度烫伤模型 ,伤后第 4天 ,禁食 5 h后的大鼠 ,进行正常血糖高胰岛素钳夹技术实验 ,实验后颈动脉放血处死 ,立即采集肌肉和脂肪标本 ,采用免疫沉淀和免疫印迹方法分析 IRS- 1及其丝氨酸 30 7和酪氨酸磷酸化的变化情况。 结果 :烫伤后肌肉和脂肪组织中 IRS- 1上丝氨酸 30 7磷酸化水平显著升高 [假烫伤组光密度值设定为 1,进行对照比较 ;骨骼肌 :(3.78± 1.5 8) vs(1.0 0± 0 .16 ) ,P<0 .0 1;脂肪组织 :(2 .0 9± 0 .4 4 ) vs(1.0 0± 0 .18) ,P<0 .0 5 ],而 IRS- 1上酪氨酸磷酸化水平显著降低 [骨骼肌 :(0 .6 6± 0 .32 ) vs(1.0 0± 0 .34) ,P<0 .0 5 ;脂肪组织 :(0 .6 2± 0 .2 7) vs(1.0 0± 0 .2 4 ) ,P<0 .0 5 ]。烫伤后 IRS- 1含量无显著性改变 [肌肉组织 :(0 .87± 0 .0 5 ) vs(1.0 0± 0 .17) ,P>0 .0 5 ;脂肪组织 :(0 .93± 0 .0 1) vs(1.0 0± 0 .16 ) ,P>0 .0 5 ]。结论 :烧伤后 IRS- 1丝氨酸 30

细胞因子信号转导抑制因子3对糖尿病大鼠胰岛素受体底物1及其丝氨酸磷酸化水平的影响

目的观察糖尿病大鼠肝脏和骨骼肌中细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS-3)、胰岛素受体底物1(IRS-1)及丝氨酸磷酸化胰岛素受体底物1(PIRS-1^(Ser307))水平,探讨其在胰岛素抵抗发生中的机制。方法将40只雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组(20只)和糖尿病组(20只)。对照组大鼠予以普通饲料喂养,糖尿病组大鼠予以高糖高脂饲料喂养4周后腹腔注射链脲霉素,其中16只大鼠制成2型糖尿病模型。采用实时荧光定量PCR法检测大鼠肝脏和骨骼肌中SOCS-3、IRS-1 mRNA水平,Western blot法检测大鼠肝脏和骨骼肌中SOCS-3、IRS-1、PIRS-1^(Ser307)蛋白水平。应用t检验及Pearson直线相关进行数据分析。结果 1与对照组相比,糖尿病组大鼠肝脏和骨骼肌SOCS-3 mRNA显著升高(P<0.05),IRS-1 mRNA显著降低(P<0.05);糖尿病组大鼠肝脏和骨骼肌SOCS-3和PIRS-1^(Ser307)蛋白显著升高(P<0.05),IRS-1蛋白显著降低(P<0.05);2糖尿病组大鼠肝脏和骨骼肌SOCS-3蛋白与IRS-1蛋白呈负相关(r=-0.865、-0.756,P<0.05),与PIRS-1^(Ser307)蛋白呈正相关(r=0.678、0.663,P<0.05)。结论糖尿病大鼠可能通过上调SOCS-3基因,增加IRS-1丝氨酸磷酸化水平和降低IRS-1表达,诱发胰岛素抵抗。

补肾通脉方对伴胰岛素抵抗的多囊卵巢综合征大鼠IRS-1 Ser307磷酸化表达的影响

目的:观察补肾通脉方对多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)的胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)大鼠的靶器官中胰岛素受体底物-1丝氨酸307(insulin receptor substrate-1 Ser307,IRS-1 Ser307)磷酸化表达的影响,探讨补肾通脉方改善PCOS的IR的机制。方法:建立IR的PCOS大鼠模型,成模大鼠随机分为模型组和中药组,另设13只正常对照组。中药组大鼠以补肾通脉方干预。各组动情后期大鼠于门静脉推注胰岛素前后各处死一半。免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠肝脏、脂肪IRS-1 Ser307磷酸化蛋白表达,免疫组化法检测卵巢IRS-1 Ser307磷酸化蛋白表达。结果:模型组IRS-1 Ser307磷酸化在肝脏、脂肪和卵巢中表达均明显高于正常组(P<0.05,P<0.01),中药组均显著低于模型组(P<0.05,P<0.01)。各组肝脏、脂肪和卵巢中IRS-1 Ser307磷酸化表达在胰岛素刺激后均较刺激前明显增多(P<0.05)。结论:补肾通脉方可下调胰岛素靶组织IRS-1 Ser307磷酸化水平、改善胰岛素信号转导,这可能是其改善PCOS的IR的机制之一。

妊娠期糖尿病胎盘组织中SOCS3与IRS1、IRS1^(ser307)水平的相关性研究

目的:探索妊娠期糖尿病(GDM)胎盘组织中SOCS3与IRS1、IRS1^(ser307)水平的相关性。方法:收集GDM组及正常孕妇组胎盘组织。HE染色观察GDM胎盘组织的病理变化。QRT-PCR、免疫组化检测SOCS3、IRS1在胎盘组织中的表达及分布情况。Western blot检测SOCS3、IRS1、IRS1^(ser307)三种蛋白的表达量。Spearman秩和相关性分析胎盘组织中SOCS3与IRS1、IRS1^(ser307)蛋白表达的相关性。结果:(1)GDM胎盘组织胎盘血管分布紊乱,管壁增厚且管腔狭窄,血细胞减少。(2)SOCS3和IRS1主要特异性表达于细胞质中,SOCS3在GDM组中表达升高,呈黄色,为阳性表达;IRS1在GDM组中表达降低,几乎不表达。(3)QRT-PCR发现,与对照组相比,在GDM组胎盘中SOCS3表达上调(P<0.01);IRS1表达下调(P<0.01)。(4)Western Blot发现,与对照组相比,在GDM组胎盘中SOCS3表达上调(P<0.01);IRS1表达下调(P<0.01);IRS1^(ser307)表达上调(P<0.01)。(5)经分析发现SOCS3与IRS1之间的相关性(r=-0.635 4,P<0.000 1);SOCS3与IRS1^(ser307)之间的相关性(r=0.902 8,P<0.000 1)均呈强相关。结论:SOCS3和IRS1^(ser307)在GDM胎盘组织中表达上调,IRS1表达下调。SOCS3与IRS1呈负相关,与IRS1^(ser307)呈正相关。

黄芪多糖对肥胖大鼠骨骼肌胰岛素信号转导的影响

目的探讨黄芪多糖(APS)对肥胖大鼠骨骼肌胰岛素信号转导的影响。方法将48只雄性Sprague Dawley大鼠随机分为对照组、模型组、APS组和吡格列酮组,每组12只;对照组大鼠给予常规饲料喂养6周,模型组、APS组、吡格列酮组大鼠给予高脂饲料喂养6周制备肥胖模型;造模后,APS组、吡格列酮组大鼠分别给予APS 400 mg·kg^-1·d^-1及吡格列酮10 mg·kg^-1·d^-1,连续灌胃4周;对照组和模型组大鼠均给予生理盐水2 mL·kg^-1·d^-1,连续灌胃4周;药物干预第4周末采集各组大鼠血液标本、脂肪及腓肠肌组织标本,采用全自动生物化学分析仪测空腹血糖(FBG)、三酰甘油(TG)、胆固醇(TC)水平,酶联免疫吸附试验测空腹胰岛素(FINS),并计算胰岛素敏感指数(ISI)及内脏脂肪垫相对质量,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测腓肠肌组织中胰岛素受体底物1(IRS-1)mRNA水平,Western blot法检测腓肠肌组织中IRS-1及其丝氨酸307(IRS-1 Ser307)蛋白表达水平,计算IRS-1 Ser307/IRS-1比值。结果药物干预4周后,对照组、模型组、APS组及吡格列酮组大鼠FBG水平两两比较差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,模型组大鼠血清TG、TC、FINS水平及内脏脂肪垫相对质量升高,ISI下降(P<0.05);与模型组比较,APS组及吡格列酮组大鼠TG、FINS水平降低,ISI水平升高(P<0.05);APS组、吡格列酮组大鼠TC水平及内脏脂肪垫相对质量与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)。APS组大鼠血清TG、TC、FINS水平及ISI、内脏脂肪垫相对质量与吡格列酮组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,模型组大鼠腓肠肌组织中IRS-1 mRNA和蛋白表达量降低,IRS-1 Ser307蛋白表达量和IRS-1 Ser307/IRS-1比值升高(P<0.05)。与模型组比较,吡格列酮组、APS组大鼠腓肠肌组织中IRS-1mRNA和蛋白表达量升高,IRS-1 Ser307蛋白表达量及IRS-1 Ser307/IRS-1比值降低(P<0.05)。APS组大鼠腓肠肌组织中IRS-1 mRNA和蛋白表达量、IRS-1 Ser307蛋白表达量及IRS-1 Ser307/IRS-1比值与吡格列酮组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论APS能有效调节肥胖大鼠血脂水平并改善胰岛素抵抗;APS改善胰岛素抵抗的作用机制可能是通过增加大鼠腓肠肌组织中IRS-1水平、降低IRS-1 Ser307水平实现的。

乳腺浸润性导管癌组织IRS1、PRSS3蛋白表达与磷酸化蛋白激酶B表达和预后的关系研究

目的:探讨乳腺浸润性导管癌(BIDC)组织胰岛素受体底物1(IRS1)蛋白、丝氨酸蛋白酶3(PRSS3)蛋白表达与磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)表达以及预后的关系。方法:选择2017年1月至2018年12月我院收治的363例BIDC患者,采用免疫组化法检测经手术切除的BIDC癌组织和癌旁组织中IRS1蛋白、PRSS3蛋白以及p-AKT表达,比较BIDC不同病理特征IRS1蛋白、PRSS3蛋白表达差异。Spearman秩相关分析IRS1蛋白、PRSS3蛋白表达与p-AKT表达的相关性。术后定期随访,采用Kaplan-Meier生存分析、Cox风险比例回归分析IRS1蛋白、PRSS3蛋白表达与BIDC患者预后的关系。结果:BIDC组织中IRS1蛋白、PRSS3蛋白、p-AKT阳性表达率分别为68.87%、58.13%、68.04%,均高于对照组的46.56%、40.50%、41.60%(P<0.05)。IRS1蛋白表达、PRSS3蛋白表达与p-AKT表达均呈正相关(rs=0.805、0.796,P<0.05)。肿瘤直径>2 cm、低中度分化、AJCC分期为Ⅱ期的患者IRS1蛋白阳性表达率高于肿瘤直径≤2cm、高度分化、AJCC分期为Ⅰ期的患者(P<0.05),AJCC分期为Ⅱ期、HER-2阳性表达、Ki-67阳性表达的患者PRSS3蛋白阳性表达率高于AJCC分期为Ⅰ期、HER-2阴性表达、Ki-67阴性表达的患者(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示IRS1蛋白、PRSS3蛋白阳性表达者PFS生存率、OS生存率低于IRS1蛋白、PRSS3蛋白阴性表达者(P<0.05)。多因素COX风险比例回归结果显示AJCC分期Ⅲ期、IRS1蛋白阳性表达、PRSS3蛋白阳性表达是BIDC患者预后不良的危险因素(P<0.05)。结论:BIDC癌组织中IRS1蛋白、PRSS3蛋白阳性表达率增高,IRS1蛋白、PRSS3蛋白可能通过调节p-AKT参与BIDC癌症进展过程。

羁糖脂对HepG2胰岛素抵抗细胞葡萄糖代谢及相关蛋白表达的影响

目的通过体外实验探讨羁糖脂改善2型糖尿病胰岛素抵抗(IR)的作用,并初步探明其作用机制。方法采用1×10-7 mol/L胰岛素诱导Hep G2细胞,建立IR细胞模型;MTT法检测羁糖脂对Hep G2细胞的增殖抑制率;葡萄糖氧化酶-过氧化物酶(GOD-POD)法检测羁糖脂对Hep G2 IR细胞葡萄糖吸收的影响;Western blotting法检测胰岛素受体底物1磷酸化丝氨酸p-IRS-1(Ser307)、磷酸酰肌醇-3-激酶(PI3K)、葡萄糖转运体-4(GLUT-4)的表达。结果 Hep G2细胞置于含10-7胰岛素培养液孵育24 h,与对照组比较,葡萄糖吸收水平下降,表明建模成功;30~120μg/m L羁糖脂均能显著增加IR细胞葡萄糖吸收率,显著上调GLUT-4、PI3K蛋白表达水平,显著下调IRS-1 Ser307磷酸化水平。结论羁糖脂能有效增强Hep G2 IR细胞对葡萄糖的消耗能力,推测与上调GLUT-4、PI3K蛋白表达,抑制IRS-1丝氨酸磷酸化相关。

黄连素对伴胰岛素抵抗的多囊卵巢综合征大鼠卵巢状态的影响

目的研究黄连素对伴胰岛素抵抗(IR)的多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢状态及磷酸化胰岛素受体底物-1丝氨酸307(p-IRS-1 Ser307)、类固醇合成快速调节蛋白(p-StAR)表达的影响。方法SPF级、雌性SD大鼠100只,随机分为空白组(n=25)、模型组(n=25)、对照组(n=25)及实验组(n=25)。模型组、对照组及实验组大鼠均用来曲唑(1 mg·kg^-1·d^-1)诱导建立伴胰岛素抵抗的PCOS大鼠模型。造模成功后,对照组给予135 mg·kg^-1·d^-1二甲双胍,灌胃;实验组给予81 mg·kg^-1·d^-1黄连素,灌胃,空白组与模型组则灌胃等量生理盐水。各组均连续干预3周。用氧化酶法测定空腹血糖(FBG)水平;用电化学发光法测定空腹胰岛素(FINS)水平,计算稳态模型胰岛素抵抗(HOMA-IR)指数;用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)及睾酮(T)含量;用免疫组化法检测各组大鼠卵巢组织中p-IRS-1 Ser307、p-StAR蛋白阳性表达情况。结果空白组、模型组、对照组及实验组大鼠FBG水平分别为(3.96±0.63),(5.64±0.81),(4.42±0.73),(6.12±2.05)mmol·L^-1;FINS水平分别为(9.89±2.31),(22.13±2.09),(13.14±1.67),(16.65±2.18)mU·L^-1;HOMA-IR指数分别为2.27±0.36,4.12±0.71,2.68±0.38,3.54±0.21。与空白组相比,模型组、对照组及实验组大鼠FBG、FINS及HOMA-IR指数、血清性激素水平和卵巢组织p-IRS-1 Ser307、p-StAR蛋白阳性细胞百分比均显著升高;与模型组相比,对照组与实验组以上指标均显著降低,且对照组低于实验组(均P<0.05)。结论黄连素可降低伴胰岛素抵抗的PCOS大鼠的血清FBG、FINS及HOMA-IR指数及性激素水平,还可通过下调p-IRS-1 Ser307与p-StAR蛋白表达改善PCOS引起的胰岛素抵抗和高雄激素血症。

组织构建过程中的运动效应①：本刊中文部

1有氧运动对小鼠骨骼肌结节性硬化复合物蛋白2基因表达及胰岛素受体底物1丝氨酸磷酸化的影响．见2011年第7期1232—1236页。