棕榈酸对胰岛MIN6细胞胰岛素成熟的影响

为研究棕榈酸对胰岛MIN6细胞胰岛素成熟的影响,用0.3mmol/L棕榈酸处理体外培养的MIN6细胞,通过Western blot检测内质网应激(ER stress)相关蛋白、激素原转化酶1(PC1)和激素原转化酶2(PC2)表达水平。通过ELISA检测细胞培养液中成熟胰岛素在总胰岛素中所占的比例,判断棕榈酸对MIN6细胞胰岛素剪切的影响。结果表明,与对照组相比,棕榈酸会导致MIN6细胞ER Stress相关分子表达升高,同时与胰岛素剪切相关的PC1和PC2蛋白水平明显降低。MIN6细胞中胰岛素的剪切成熟在棕榈酸作用下受到影响,成熟胰岛素的产生显著降低。说明棕榈酸可诱导MIN6细胞发生内质网应激,影响与胰岛素剪切成熟相关的PC1和PC2蛋白的表达,结果导致MIN6细胞分泌的成熟胰岛素在总胰岛素中所占比例降低。

N-乙酰半胱氨酸对氧化应激所致胰岛素原成熟障碍的改善作用

目的观察抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)对氧化应激(OS)所致胰岛素原成熟及胰岛β细胞分泌胰岛素功能的影响,探讨减轻OS对改善胰岛β细胞的作用及机制。方法体外培养小鼠胰岛细胞系MIN6细胞,分为对照组、H_2O_2处理组、H_2O_2+NAC处理组。对照组在培养基中不加入H_2O_2及NAC;H_2O_2处理组在培养基中加入10μmol/L H_2O_2处理;H_2O_2+NAC处理组培养基中加入10μmol/L H_2O_2刺激4 h后,再加入250μmol/L NAC处理。各组细胞培养24 h后,采用台盼蓝染色法检测细胞死亡率,采用H2DCFDA荧光探针法检测细胞中活性氧簇(ROS)表达水平,采用Western blotting法检测细胞胰岛素原、构象未成熟胰岛素原复合物(CIPC)蛋白表达并计算胰岛素原/CIPC,采用放免法检测细胞上清胰岛素相对含量。结果 H_2O_2处理组细胞死亡率高于对照组,H_2O_2+NAC处理组细胞死亡率低于H_2O_2处理组(P均<0.05)。H_2O_2处理组细胞ROS表达水平高于对照组,H_2O_2+NAC处理组细胞ROS表达水平低于H_2O_2处理组(P均<0.05)。H_2O_2处理组细胞胰岛素原/CIPC比例低于对照组,H_2O_2+NAC处理组细胞胰岛素原/CIPC高于H_2O_2处理组(P均<0.05)。H_2O_2处理组细胞上清胰岛素相对含量低于对照组,H_2O_2+NAC处理组细胞上清胰岛素相对含量高于H_2O_2处理组(P均<0.05)。结论 NAC可以改善OS引起的胰岛β细胞损伤、胰岛素原成熟障碍及胰岛素的释放异常,有效地保护胰岛β细胞功能。