携人胰岛素样生长因子-1基因的成肌细胞移植后在体存活及产物表达的研究

目的：观察并探讨携人胰岛素样生长因子-1（hIGF-1）基因的成肌细胞移植入雄性C3H小鼠体内后的存活、转归以及移植后hIGF-1基因的表达.方法：84只雄性C3H小鼠随机（20～30g,7～11w）分为A组（正常小鼠转基因细胞移植组）、B组（正常小鼠空白成肌细胞移植组）、C组（受伤小鼠转基因细胞移植组）和D组（受伤小鼠空白成肌细胞移植组）,每组20只,另4只作正常对照.A、B两组分别于右侧腓肠肌中段注射转基因成肌细胞或空白成肌细胞;C、D两组以重力打击造成小鼠右侧腓肠肌中段钝挫伤,伤后第3天分别于致伤局部注射转基因成肌细胞或空白成肌细胞.注射细胞后第2、5、10、20、30天,各组随机抽取4只小鼠处死,取右侧腓肠肌中段检测,Br-dU免疫组化染色检测外源细胞在体内的存活情况;4组另行hIGF-1免疫组化染色及实时PCR检测外源转基因细胞在体内表达hIGF-1情况.结果：各组小鼠均有BrdU免疫组化阳性染色,A、C两组均有hIGF-1 mRNA表达及hIGF-1分泌,B、D两组未检测到hIGF-1 mRNA表达及hIGF-1分泌.结论：携hIGF-1基因的成肌细胞移植入正常及钝挫伤小鼠体内后,可存活一段时间,并能稳定地分泌hIGF-1因子.

人胰岛素样生长因子-1基因的克隆、表达及生物活性分析

采用RT PCR方法 ,从人扁桃体组织中扩增得到人胰岛素样生长因子 1 (IGF 1 )cDNA ,利用基因重组技术将该基因片段重组于pcDNA3 .1 ( +)真核表达载体上 ,成功构建了 pcDNA/I重组表达载体。应用脂质体介导的基因转移技术将重组质粒体外转染至人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)。MTT法检测结果表明 :重组质粒转染能明显促进内皮细胞的分裂增生。将重组质粒通过脂质体介导 ,体外转染至人肾细胞 2 93细胞系进行表达 ,经G41 8筛选获得稳定表达的重组质粒细胞克隆 ,表达产物经鸡胚绒毛尿囊膜试验表明有促血管生成活性。此结果为研究IGF 1对血管内皮细胞作用的分子机制 ,以及利用IGF 1基因治疗肢体及冠状动脉缺血性疾病等的研究奠定了实验基础。

人胰岛素样生长因子-1基因克隆及其真核表达载体的构建

目的:从胎儿肝组织中克隆人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因,并构建真核表达载体pCI-neo/hIGF-1。方法:提取胎儿肝总RNA,RT-PCR法扩增IGF-1 cDNA片段,重组于pUCM-T载体,测序正确后构建表达载体。结果:扩增得到710bp带有Kozak序列的IGF-1 cDNA片段,成功构建了真核表达载体pCI-neo/hIGF-1。结论:通过RT-PCR的方法克隆了人IGF-1 cDNA,并成功构建了真核表达载体pCI-neo/hIGF-1,为IGF-1基因治疗糖尿病创造了条件。

鸡胰岛素样生长因子-1基因的遗传多态性与其体重的关系

对宁都三黄鸡、万载康乐黄鸡两个鸡种共295个样本,采用PCR RFLP技术对胰岛素样生长因子—1(cIGF 1)基因的5'端调控区进行遗传变异研究,发现该调控区的扩增产物经PstⅠ酶切后出现3种基因型(AA、AB、BB)。结果表明:性别对宁都三黄鸡这3种基因型的分布呈现显著差异(P<0 05)。分析这3种基因型与其体重的关系发现,这3种基因型对初生重、30日龄体重、60日龄体重、90日龄体重及120日龄体重影响差异均不显著(P>0 05),但体现出AA型有较高体重的趋势,公母表现出一致的规律。在万载康乐黄鸡中,均呈现出杂合优势,在8周龄及18周龄时差异不显著(P>0 05),而在12周龄表现为差异显著(P<0 05)。宁都三黄鸡公母基因型分布均符合哈代 温格伯定律,而万载康乐黄鸡基因型分布不符合哈代 温格伯定律。

胰岛素样生长因子-1基因多态性与猪部分生产性能的关系

采用PCR RFLP对南昌白猪 (92头 )和大约克夏猪 (170头 )的IGF 1基因的 179bp片段进行了扩增 ,并用HhaI酶切 ,产生两个等位基因A(15 1+2 8bp)和等位基因B(116 +35 +2 8bp)。分析了不同基因型对个体初生重、2月龄重、4月龄重、6月龄重、料重比、背膘厚和瘦肉率等生产性能的影响。结果表明 ,在南昌白猪中 ,AA型猪比AB型猪初生重大 ,差异显著 (P <0 0 5 ) ;在大约克夏猪中 ,BB型猪比AB型猪的 6月龄体重大 ,差异显著 (P <0 0 5 ) ;AA型猪比AB型和BB型猪瘦肉率低 ,差异极差著 (P <0 0 1)。

水溶性苜蓿多糖对肉仔鸡生长性能、胴体品质及生长激素和胰岛素样生长因子-1基因表达的影响

本试验旨在研究不同水平水溶性苜蓿多糖（ WSAP）对肉仔鸡生长性能、胴体品质及生长激素（GH）和胰岛素样生长因子-1（IGF-1）基因表达的影响。选取1日龄艾维茵肉仔鸡360只，随机分为4组，每组6个重复，每个重复15只鸡。对照组饲喂基础饲粮，试验组饲喂在基础饲粮基础上分别添加0.5％、1.0％、1.5％WSAP的试验饲粮，试验期42 d。结果表明：与对照组相比，添加1.0％和1.5％WSAP显著提高了第42天平均体重（ P＜0.05），显著或极显著提高了生长后期（21～42 d）和全期（1～42 d）的平均日增重和平均日采食量（P＜0.05或P＜0.01），显著降低了生长后期和全期的料重比（P＜0.05）；显著提高了胸肌率（P＜0.05），显著降低了腹脂率（P＜0.05）；添加WSAP还显著或极显著地提高了GH和IGF-1基因在肝脏、脂肪组织和肾脏中的表达（ P＜0.05或P＜0.01）。综合分析认为，WSAP可提高GH和IGF-1基因在肉仔鸡组织中的表达量，促进肉仔鸡的生长，改善胴体品质，以1.0％的添加水平效果较好。

人胰岛素样生长因子-1基因的克隆、表达和活性检测

目的 克隆人胰岛素样生长因子Ⅰ型 (hIGF 1) ,构建真核表达载体并进行表达及活性检测 ,为IGF 1基因治疗糖尿病奠定基础。 方法 提取胎儿肝脏总RNA ,RT PCR法扩增IGF 1cDNA片段 ,重组于pUCM T载体 ,测序正确后构建表达载体 ,转染猴肾成纤维细胞系COS 7,用原位杂交和免疫组织化学检测表达 ,收集培养上清以胰岛素刺激释放实验进行活性测定。 结果 扩增得到 710bp带有Kozak序列的IGF 1cDNA片段 ;成功构建了真核表达载体pCI neo hIGF 1;IGF 1在COS 7细胞得到了表达 ,并具有刺激胰岛素分泌的活性。 结论 新构建的载体pCI neo hIGF 1能在COS 7细胞中表达、分泌 ,且所分泌的IGF 1具有生物活性。

人胰岛素样生长因子-1基因的克隆及其表达

目的获得大量高纯度、具有生物学活性的人胰岛素样生长因子 1(hIGF 1) ,构建hIGF 1原核表达载体 ,并进行表达与纯化。方法以pUCIGF质粒为模板 ,PCR扩增了hIGF 1基因。经适当酶切后 ,构建表达载体pRSET IGF ,转入大肠杆菌BL2 1(DE3)进行表达 ,并经阴离子交换色谱、疏水色谱和凝胶过滤纯化。结果带有重组质粒pRSET IGF的大肠杆菌经IPTG诱导后 ,以可溶性形式表达 7.8kD大小的蛋白 ,其表达量占菌体总蛋白量的10 %～ 2 0 % ,纯化后目的蛋白纯度达 95 %以上 ,Western印迹表明重组蛋白具有hIGF 1抗原活性。结论构建了pRSET IGF重组质粒 ,并成功地在大肠杆菌中获得可溶性表达 。

胰岛素样生长因子-1基因表达对糖尿病大鼠血糖的影响

目的:探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因表达对糖尿病(DM)大鼠血糖的影响。方法:将含人IGF-1基因的重组转运质粒pCMV/IGF-1 DNA每鼠400μg肌内注射于DM大鼠模型(T组,n=7)体内,对照组(C组,n=7)给予同等剂量pcMV空载质粒DNA,同时设立正常对照组(N组,n=7)和DM对照组(DM组,n=7)。观察大鼠血糖和血IGF-1浓度(ELISA法),用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法比较治疗前后大鼠肝、肾、骨骼肌等组织IGF-1 mRNA表达量变化。结果:ICF-1基因治疗后,T组血糖较治疗前明显下降,由(28.71±1.79)mmol/L至(17.02±1.69)mmol/L,同时血IGF-1较基础水平明显升高,由(109.34±10.90)ng/ml至(135.61±6.15)ng/ml;T组大鼠在接受治疗后,血糖明显低于C组和DM组(P<0.000 1),而血IGF-1明显高于C组和DM组(P<0.000 1);RT-PCR结果显示,T组大鼠肝脏和骨骼肌IGF-1 mRNA表达量明显高于DM组(P<0.000 1,P=0.002),肾组织IGF-1基因含量与DM组比较,无明显统计学差异(P=0.387)。结论:IGF-1基因表达能有效降低DM动物血糖,为开展DM治疗新策略奠定基础。

糖尿病大鼠外周神经病变与胰岛素样生长因子-1基因表达异常的关系

目的:探讨肝组织胰岛素样生长因子-1(insulinlikegrowthfactor-1,IGF-1)基因表达异常及其与糖尿病外周神经病变的关系。方法:实验选用清洁级SD雄性大鼠64只。将64只大鼠按初质量匹配随机分成:正常对照组16只和糖尿病组48只。用四氧嘧啶诱发糖尿病大鼠模型,并进一步将糖尿病大鼠按血糖水平分成3组(胰岛素治疗1,2,3组),与正常大鼠组进行实验比较。反转录一多聚酶链扩增反应半定量分析坐骨神经IGF-1mRNA含量;酶联免疫吸附法分析组织IGF-1肽含量;诱发肌电图测定坐骨神经电生理指标;光镜,电镜下观察坐骨神经形态学改变。结果:糖尿病2周时,胰岛素治疗2,3组大鼠肝组织IGF-1mRNA含量明显低于正常对照组,且随病程发展进一步下降(P<0.01)。糖尿病3个月时,胰岛素治疗2,3组大鼠肝组织IGF-1mRNA含量与正常对照组比较,差异有非常显著性意义(P<0.01)。肝组织IGF-1肽含量与IGF-1mRNA几呈平行变化趋势。此变化趋势与肝组织IGF-1肽含量变化一致(r=0.99,P<0.001)。糖尿病2周时,糖尿病组与正常对照组间电生理差异无显著无意义(P>0.05)。糖尿病2,3个月时,胰岛素治疗2,3组大鼠电生理指标与正常对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05～0.01)。糖尿病2,3个月时,胰岛素治疗3组与胰岛素治疗2组比较,差异有显著性意义(P<0.01),胰岛素?

人胰岛素样生长因子-1基因强化组织工程法诱导裸鼠异位软骨形成

目的探讨人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)基因转染诱导后的人骨髓基质干细胞(hMSCs)与再生丝素膜复合后在裸鼠体内形成组织工程软骨的能力。方法分离培养hMSCs,体外诱导成软骨样细胞,流式细胞仪测定细胞表型,免疫组化检测软骨细胞表型;脂质体介导hIGF-1转染诱导后的hMSCs,RT-PCR、酶免疫测定法和免疫组化检测hIGF-1及Ⅱ型胶原的表达;转染后的hMSCs与再生丝素膜复合培养,扫描电镜观察细胞形态,复合物植入裸鼠皮下,HE及免疫组化染色观察新生软骨的结构和表型。结果分离培养出纯化的hMSCs符合间充质干细胞表型,具有快速增殖及经诱导后向软骨分化的能力,诱导后的细胞表达Ⅱ型胶原;转染诱导后的hMSCs能稳定分泌具活性的hIGF-1蛋白,并表达软骨细胞表型;转染后的hMSCs与再生丝素膜复合培养显示良好的生物相容性,新生组织具典型的软骨组织陷窝,并表达Ⅱ型胶原。结论经hIGF-1基因诱导后的hMSCs与再生丝素膜在体内能构建出软骨样组织。

实验性糖尿病大鼠胰岛素样生长因子-1基因表达异常与神经电生理及外周神经病变(英文)

目的:探讨糖尿病时肝组织胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因表达的异常及其与糖尿病外周神经病变的关系。方法:分离解剖出右侧坐骨神经,测定诱发电位出现的波幅(amplitudeofevokedpotentials,AEP)、感觉及运动神经传导速度(sensory/motornerveconductionvelocity,SNCV/MNCV),用四氧嘧啶诱发糖尿病SD大鼠模型。48只糖尿病大鼠按经(胰岛素)控制后血糖水平分成3组:ID-1,2,3组,16只正常大鼠用作对照组。反转录一多聚酶链扩增反应半定量分析坐骨神经IGF-1mRNA含量;酶联免疫吸附法分析组织IGF-1肽含量;诱发肌电图测定坐骨神经电生理指标;观察坐骨神经形态学改变。结果:病程早期(2周,2个月),正常对照组、ID-2组大鼠肝组织IGF-1mRNA含量(1.15±0.090,0.79±0.048,P<0.001;1.17±0.069,0.53±0.023,P<0.001)、肽含量均下降犤(196.66±14.9),(128.2±11.25)μg/g,P<0.001;(196.66±14.9),(74.43±5.33)μg/g,P<0.001犦出现在相应糖尿病组大鼠坐骨神经电生理指标异常之前,程度均随糖尿病控制状态而异,且随病程进一步逐渐下降犤IGF-1mRNA(0.71±0.024)～(0.47±0.021);IGF-1肽(114.35±8.09)～(64.58±3.89)μg/g,P<0.001犦。血清IGF-1呈一致性下降(r=0.99,P<0.001)。其变化与坐骨神经功能改变(感觉神经:r=0.54,P<0.05,

人胰岛素样生长因子-1基因转染对软骨细胞增殖的影响(英文)

背景:各种生长因子对体外培养的软骨细胞均有不同程度的促增值作用,但半衰期较短,很难达到软骨缺陷治疗所要求的时效。目的:探讨自行构建携带人胰岛素样生长因子腺病毒载体(Ad/CMV-hIGF-1)对软骨细胞增殖的影响。设计:设立对照的实验研究。地点和对象:实验在中山大学林百欣医学研究中心进行。体外培养人胚胎软骨细胞,采用对数增长期的第3代软骨细胞进行实验。干预:自行构建携带hIGF-1基因的重组腺病毒并进行PCR,Westernblot鉴定。采用1,10,100及500不同感染复数单位(multiplicityofinfection,MOI)的Ad/CMV-hIGF-1分别转染第3代软骨细胞,用磷酸盐PBS)做(阴性对照,hIGF-1生长因子(100μg/L)做阳性对照。主要观察指标:采用四氮甲基唑蓝(methylthiazolyltetrazolium,MTT)法检测不同时间、不同组别软骨细胞吸光度。结果:第2代重组腺病毒上清液中PCR鉴定含有hIGF-1基因,Westernblot证实Ad/CMV-hIGF-1表达成熟的hIGF-1生长因子。不同病毒滴度转染对软骨细胞增殖的影响存在量效依赖关系,在1～100MOI之间,软骨细胞吸光度随着病毒滴度增加逐渐升高,100MOI软骨细胞吸光度约为PBS组的3倍;500MOIAd/CMV-hIGF-1时,软骨细胞吸光度较100MOI下降,与1MOI与10MOI对软骨细胞增殖的影响近似。PBS组随着细胞体外培养时间延长,?

胰岛素样生长因子-1基因真核表达载体的构建

目的构建胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因重组逆转录病毒,为将IGF-1基因应用于神经系统疾病的治疗打下基础。方法质粒pcDNA3.1-IGF-1经EcoR I和Xho I双酶切后亚克隆至逆转录病毒载体pLXSN,构建成重组逆转录病毒表达载体pLXSN-IGF-1,采用酶切及测序对重组体进行鉴定。而后脂质体转染pLXSN-IGF-1至包装细胞pA317,检测培养上清病毒滴度。结果重组真核基因表达载体pLXSN-IGF-1经EcoR I和Xho I双酶切后,得到了400 bp和6.0 kb两条带;以重组体为模板进行PCR检测,400 bp的目的基因片段呈阳性;重组体测序结果与预期结果完全一致;建立了细胞系PA317-IGF-1,其培养上清平均病毒滴度为6.5×105CFU/ml。结论成功构建了IGF-1基因重组逆转录病毒。

人胰岛素样生长因子-1基因的克隆及在真核细胞的表达

目的 构建人胰岛素样生长因子 1(IGF1)真核表达载体 ,并在成纤维细胞NIH3T3细胞内进行表达。方法 用RT PCR法从人肝细胞中克隆人IGF1的基因 ,将其连入真核表达载体pSecTag/FRT/V5 His,PCR法及测序鉴定阳性克隆 ;用脂质体法将阳性克隆转染NIH3T3细胞 ;收集转染后的细胞上清 ,用Westernblot进行检测。结果 琼脂糖电泳显示RT PCR扩增出 315bp的条带 ;与载体连接后的克隆进行测序得到一个阳性克隆 ;Westernblot检测显示转染后细胞上清出现与预计值相符的特异性条带。结论 成功克隆并构建人IGF1基因的真核表达载体 。

小鼠胰岛素样生长因子-1基因体外克隆及表达的研究

目的探讨小鼠胰岛素样生长因子-1（IGF-1）基因提取、鉴定及重组质粒转染COS-7细胞表达。方法通过RT—PCR获取小鼠骨骼肌IGF-1的eDNA，将该基因亚克隆入重组质粒p1（peDNA3．1-Nestin—EGFP）中，构建重组质粒p2（peDNA3．1-Nestin—EGFP—IGF-1），脂质体转染COS-7细胞，ELISA检测细胞培养基中IGF-1蛋白量。结果克隆IGF-1基因eDNA与GenBank中该基因序列-致，重组质粒转染COS-7细胞培养基中均含有IGF-1蛋白。结论IGF-1基因成功构建到重组质粒p2中，且能在COS-7细胞中过表达。

胰岛素样生长因子-1基因转染在大鼠眼外肌的表达

目的 观察胰岛素样生长因子-1（ IGF-1）基因转染在大鼠眼外肌的表达.方法大鼠眼外肌成肌细胞等量传代,分为实验组、第一对照组及第二对照组.采用ABC-ELISA法检测IGF-1的含量.结果 实验组在转染后第1天即有IGF-1的表达,第5天达分泌高峰,以后渐次下降,持续至少4周.结论IGF-1基因转染后大鼠眼外肌分泌IGF-1蛋白.

胰岛素样生长因子-1基因原核表达载体的构建及表达蛋白的生物学活性

目的构建人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)基因原核表达载体,并检测表达的重组人IGF-1(rhIGF-1)蛋白的生物学活性。方法以pUC57-hIGF-1质粒为模板,PCR扩增hIGF-1基因,克隆入pTEtrans载体,进行DNA序列分析后,亚克隆入表达载体pTE,转化大肠杆菌W3110,进行诱导表达,表达产物经阳离子交换层析和凝胶过滤层析纯化,并进行Tricine-SDS-PAGE和Western blot分析。MTT法检测rhIGF-1促MCF-7细胞的增殖作用。结果转化质粒pTE-hIGF-1的大肠杆菌经诱导后,以可溶性形式表达相对分子质量约为7700的目的蛋白,表达量约占菌体总蛋白的8%。Western blot证实该蛋白具有良好的反应原性,Tricine-SDS-PAGE证实纯度达98%以上,MTT证实具有良好的促MCF-7细胞增殖的作用。结论已成功构建了含hIGF-1基因的原核表达载体,并获得具有生物学活性的高纯度rhIGF-1。

胰岛素样生长因子-1基因转染对人牙髓干细胞体外矿化性能的影响

目的目前利用基因转染靶向干预胰岛素样生长因子-1(IGF-1)表达,优化人牙髓干细胞(hDPSCs)体外矿化性能的相关研究报道较少。文中旨在利用基因转染调控hDPSCs中IGF-1的表达,探讨对hDPSCs体外矿化性能的影响。方法首先培养hDPSCs,流式细胞仪鉴定细胞表型,并检测其克隆形成能力及多向分化能力。再用IGF-1过表达慢病毒转染hDPSCs获取过表达IGF-1,分为:hDPSCs-1组(hDPSCs未转染)、Con-over组(hDPSCs转染空载体)、IGF-1-over组(hDPSCs转染过表达IGF-1慢病毒)。用IGF-1低表达慢病毒转染hDPSCs获取低表达IGF-1,分为:hDPSCs-2组(hDPSCs未转染)、Con-inhibition组(hDPSCs转染空载体)、IGF-1-inhibition组(hDPSCs转染低表达IGF-1慢病毒)。采用qRT-PCR、Western blot及Elisa评估基因转染对hDPSCs中IGF-1基因、细胞内蛋白以及分泌蛋白表达的影响。采用CCK-8法检测hDPSCs增殖能力变化,通过ALP活性、茜素红染色及基质钙含量检测hDPSCs的矿化性能。最后采用qRT-PCR及Western blot检测成牙及成骨分化关键分子牙本质涎磷蛋白(DSPP)和骨钙素基因、蛋白水平的表达。结果与hDPSCs-1组、Con-over组IGF-1基因、蛋白表达量比较,IGF-1-over组显著升高(P<0.01)。与hDPSCs-2组、Con-inhibition组IGF-1基因、蛋白表达量比较,IGF-1-inhibition组显著降低(P<0.01)。IGF-1-over组较hDPSCs-1组、Con-over组可产生更多矿化结节,染色程度更深,基质钙含量更高(P<0.01)。IGF-1-over组DSPP基因表达(1.32±0.06)较hDPSCs-1组(1.03±0.03)、Con-over组(0.97±0.03)显著升高(P<0.01),骨钙素基因表达亦升高(P<0.05)。IGF-1-inhibition组DSPP基因、蛋白的表达较hDPSCs-2组、Con-inhibition组显著降低(P<0.01),骨钙素蛋白表达亦降低(P<0.05)。结论慢病毒转染可有效干预hDPSCs中IGF-1的表达,过表达IGF-1慢病毒转染可增强hDPSCs的成牙和成骨向分化能力,低表达IGF-1慢病毒转染可抑制hDPSCs的成牙和成骨向分化能力。