胰岛素样生长因子I(IGF-I)基因的克隆及分泌表达

目的 构建原核分泌型表达载体并高效表达胰岛素样生长因子I(IGF I)。方法 构建出 2种分泌型表达载体 ,命名为pCSA和pCST ,并将胰岛素样生长因子I(IGF I)基因插入pCSA和pCST中 ,转化E .coliW3110 ,经筛选获得工程菌pCSA/IGF I/W3110和pCST/IGF 1/W3110 ,并进行表达。结果 经SDS PAGE检测 ,在相对分子质量 76 0 0处有明显表达带 ,Westernblot表明重组蛋白具有IGF I的抗原性。结论 原核分泌型IGF I的高效表达 ,为进一步研究人IGF

利用转基因动物模型研究胰岛素样生长因子-I(IGF-I)在中枢神经系统中的生物学作用

胰岛素样生长因子 I(IGF I)是一种多功能性的细胞营养因子 ,在中枢神经系统的发育过程中发挥着重要的作用。近年来 ,针对IGF I在中枢神经系统 (CNS)中的生物学作用开展了大量的研究。综述了利用IGF I及其所属蛋白家族部分成员的转基因动物模型研究它们在中枢神经系统中的分布和对中枢神经系统各组成部分生长发育的影响及其临床学上的应用。

人胰岛素样生长因子-I基因转化葡萄的研究

以根癌农杆菌介导的叶盘法转化技术将huIGF-I基因转入葡萄组织细胞,并通过既成的再生-转化体系诱导筛选huIGF-I转基因葡萄植株,在抗性筛选中使用卡那霉素浓度为(Kan.)40mg/L,使用的根癌农杆菌工程菌株为EHA105/pBIGF-I、EHA105/pCIGF-I。最后用PCR技术、Southernblot对转基因植株作分子鉴定,其检测阳性率分别为60%和66.6%。

蛋氨酸对肉兔氮代谢、血清激素及肝脏胰岛素样生长因子-ImRNA基因表达的影响

选用2月龄新西兰肉兔60只,随机分成五个处理组,在日粮中添加不同水平的蛋氨酸(0、0.2%、0.4%、0. 6%和0.8%),探讨了日粮添加不同水平蛋氨酸对2-3月龄肉兔氮代谢,血清胰岛素(INS)、生长激素(GH)、胰岛素样生长因子-I(IGF-I)含量,及肝脏IGF-I mRNA基因表达量的影响。结果表明:日粮添加蛋氨酸对生长肉兔氮的表观消化率(DN/IN)影响显著(P<0.05),添加0.4%的蛋氨酸时,DN/IN最高;蛋氨酸添加量对粪氮(FN)、尿氮(UN)、沉积氮(RN)、氮的总利用率(RN/IN)、氮的生物利用率(RN/DN)和可消化氮(DN)均无显著影响(P>0.05),但是可消化氮(DN)呈现先升高后降低的趋势。蛋氨酸添加水平对血清中INS和GH的含量无显著影响,对IGF-I含量影响显著(P=0.02),对IGF-I mRNA基因表达量影响极显著(P=0.001)。2月龄至3月龄生长肉兔适宜的蛋氨酸添加水平为0.4%。

银鲳(Pampus argenteus)胰岛素样生长因子-I基因的克隆和表达分析

胰岛素样生长因子-I(Insulin-like growth factor-I,IGF-I)是影响脊椎动物生长、发育及代谢的重要调控因子。本研究采用RT-PCR和RACE技术,克隆了银鲳(Pampus argenteus)肝脏IGF-IcDNA序列,应用半定量RT-PCR、Real-time q PCR和原位杂交的方法检测了IGF-I的组织表达特性、在肝脏中的生长表达特性和IGF-I基因在肝脏中的定位。序列分析表明,IGF-I cDNA序列全长836bp,其5′非编码区128bp、3′非编码区92bp,开放阅读框(open reading frame,ORF)605bp,由此推导IGF-I前体蛋白由201个氨基酸组成;前体肽由信号肽、成熟肽、E肽三部分组成,其中信号肽59个氨基酸,成熟肽68个氨基酸,E肽74个氨基酸;成熟肽由B、C、A、D四个区域组成,E肽分析表明,银鲳IGF-I属Ea-4型。同源性比较结果表明,银鲳与同目鲈形目鱼类的IGF-I编码序列同源性较高,为83.52%—91.40%;与哺乳类、鸟类和爬行类的同源性较低。半定量RT-PCR和Real-time q PCR组织特异性表达结果显示,IGF-I m RNA在肝脏组织中的表达量最高,显著高于其它组织,肾脏、心脏、肌肉、脑、鳃、小肠、卵巢次之,嗅球、脾脏和胃中表达较低;半定量RT-PCR和Real-time q PCR不同生长阶段表达结果显示,IGF-I m RNA在30—50g肝脏组织中表达量最高(P<0.05);IGF-I m RNA在肝脏中的原位杂交定位结果显示,在肝脏细胞中均有表达,阳性信号主要位于细胞质中,靠近细胞边缘处信号较强。

胰岛素样生长因子2结合蛋白2基因多态性与妊娠期糖尿病的关系

目的分析胰岛素样生长因子2结合蛋白2(IGF2BP2)基因多态性与妊娠期糖尿病(GDM)的关系。方法选择GDM患者84例为GDM组,另选取同期健康孕妇84例为对照组,收集两组一般资料。实时聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性法检测IGF2BP2基因rs4402960位点、rs1470579位点和rs11705701位点的多态性。结果GDM组总胆固醇、空腹血糖和空腹胰岛素高于对照组(P<0.05)。与对照组比较,GDM组IGF2BP2基因rs4402960位点GG基因型较少,TT基因型较多,等位基因T频率较高,等位基因G频率较低(P<0.05);rs11705701位点等位基因A频率较低,等位基因G频率较高(P<0.05);而其他基因型和基因频率两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论IGF2BP2基因多态性与GDM发生有关,可通过基因多态性结果评估和筛选GDM高风险人群,以提高对GDM控制。

家禽胰岛素样生长因子-I基因与生产性能相关研究进展

胰岛素样生长因子-I是胰岛素样生长因子家族的成员,是生长激素发挥促生长作用的主要介导因子。本文介绍了家禽的IGF-I结构,阐述了当前IGF-I在组织中的表达水平、基因多态性与家禽经济性状相关的研究现状。

胰岛素样生长因子-I和人绒毛膜促性腺激素对成年大鼠Leydig细胞葡萄糖转运蛋白基因表达调控

目的:研究胰岛素样生长因子I(IGF I)和人绒毛膜促性腺激素(hCG)对成年大鼠睾丸Leydig细胞中葡萄糖转运蛋白(GLUT)基因表达的影响,为进一步探讨Leydig细胞中睾酮的合成、分泌与葡萄糖代谢的关系提供依据。方法:采用改良的Klinefelter方法从成年大鼠睾丸中分离获得Leydig细胞;用反转录聚合酶链技术检测IGF I和hCG对原代培养的Leydig细胞中GLUT基因表达的调控作用。结果:分离得到纯度为98%的大鼠Leydig细胞,并与对照组比较,hCG可显著增加Leydig细胞中GLUT8基因mRNA的表达水平(P<0.001),且此作用具有剂量依赖性与时效性。当在试验组细胞中单独加入IGF I或IGF I和hCG作用于细胞后,发现IGF I(100ng mL)可显著增加Leydig细胞中GLUT8基因mRNA的表达(P<0.01),也可与hCG协同作用显著提高GLUT8基因的mRNA表达,该结果与IGF I(100ng mL)和hCG(10ng mL)能协同作用极显著增加睾酮合成水平(P<0.001)的结果是相吻合的。在大鼠Leydig细胞中,无论10ng mL或100ng mL还是两者同时作用于细胞,都不能影响GLUT1和GLUT3基因的mRNA水平。结论:在成年大鼠Leydig细胞中,IGF I和hCG对细胞中的GLUT8基因表达的调节作用具有特异性,其协同作用能显著提高细胞中GLUT8基因mRNA水平,增强细胞摄取葡萄糖的能力,给细胞提供更多的代谢能源,最终增加Leydig细胞睾酮的合成与分泌。

鸡胰岛素样生长因子-I的研究进展

介绍了鸡胰岛素样生长因子 -I(IGF -I)的结构、功能 ,并阐述了该基因的遗传变异与生产性能相关的最近研究进展。

肝硬化患者血清胰岛素样生长因子-I测定及其临床意义

目的 探讨肝硬化患者血清胰岛素样生长因子 I(IGF I)测值改变及其与肝功能Child分级间的关系。方法 45例肝炎后肝硬化患者及 34例健康对照者应用免疫放射法测定血清IGF I值 ,比较IGF I在正常人与肝硬化以及肝功能不同Child级别组中的变化。结果 肝硬化患者的血清IGF I值 (2 45 .5 3± 94.0 9)ng/ml明显低于正常组 (6 7.98± 6 5 .97)ng/ml,P <0 .0 0 1,且随肝功能Child分级的增高而进行性下降。 结论 IGF I测值与肝功能状况有明显的相关性 ,测值低于 30ng/ml则临床预后不良。研究结果提示血清IGF

草鱼胰岛素样生长因子-Ⅰ基因克隆及序列分析

采用逆转录 -聚合酶链式反应 (RT PCR)方法 ,从草鱼肝脏的总RNA中扩增出胰岛素样生长因子 I(IGF I)基因序列 ,定向克隆至质粒pUC18。测定了该基因序列 ,推导其编码的蛋白质序列。克隆的cDNA序列编码包括B、C、A、D和E五个区域的 117个氨基酸。与鲤IGF I成熟肽比较 ,核酸序列和氨基酸序列的同源性分别为 93.8%和 97.1%。E区域分析结果表明 ,所克隆的草鱼IGF I序列属于IGF IEa

胰岛素样生长因子-1基因多态性与猪部分生产性能的关系

采用PCR RFLP对南昌白猪 (92头 )和大约克夏猪 (170头 )的IGF 1基因的 179bp片段进行了扩增 ,并用HhaI酶切 ,产生两个等位基因A(15 1+2 8bp)和等位基因B(116 +35 +2 8bp)。分析了不同基因型对个体初生重、2月龄重、4月龄重、6月龄重、料重比、背膘厚和瘦肉率等生产性能的影响。结果表明 ,在南昌白猪中 ,AA型猪比AB型猪初生重大 ,差异显著 (P <0 0 5 ) ;在大约克夏猪中 ,BB型猪比AB型猪的 6月龄体重大 ,差异显著 (P <0 0 5 ) ;AA型猪比AB型和BB型猪瘦肉率低 ,差异极差著 (P <0 0 1)。

草鱼胰岛素样生长因子-I的融合表达、纯化和抗血清制备

采用PCR方法改造已克隆到的草鱼胰岛素样生长因子 Ⅰ (IGF Ⅰ )cDNA ,使其成为成熟肽cDNA并亚克隆到pGEX 4T 1载体中 ,构建草鱼IGF I融合蛋白表达质粒pGEX IGF。质粒转化大肠杆菌BL2 1菌株。该菌株经IPTG诱导可表达分子量约 34kD的特异蛋白。在不同的温度条件下分别产生以可溶性的和包涵体形式为主的特异蛋白。经 30℃诱导的菌体经溶菌酶消化、超声破碎及高速离心后 ,裂解液上清经glutathionesepharose亲和层析纯化获得高纯度的GST IGF。以此纯化的融合蛋白为抗原制备兔抗草鱼IGF I的抗血清。凝胶双扩散试验显示抗血清效价为 1∶6 4 。

大菱鲆胰岛素样生长因子-I成熟肽的克隆、重组表达及活性分析

通过RT-PCR方法从大菱鲆肝组织克隆了胰岛素样生长因子-I(IGF-I)成熟肽片段,分析表明,此成熟肽由70个氨基酸残基组成,含有3个链内二硫键。将扩增片段克隆到原核表达载体pGEX-4T-1上,实现了IGF-I成熟肽和GST蛋白在Escherichia coli BL21(DE3)plysS中的融合表达。融合蛋白分子量约为34ku,诱导4h时占菌体总蛋白的59%,主要以包涵体形式存在。Western-blotting免疫印迹表明,融合蛋白可以特异性地被anti-GST抗体识别。包涵体经6mol/L盐酸胍变性溶解及脉冲法稀释复性后,通过GSTrapFF亲和预装柱纯化,获得了电泳分析纯的融合蛋白。以细胞增殖实验检测蛋白生物活性,结果显示,纯化蛋白能促进大菱鲆肾脏细胞的增殖。

鸡胰岛素样生长因子-1基因的遗传多态性与其体重的关系

对宁都三黄鸡、万载康乐黄鸡两个鸡种共295个样本,采用PCR RFLP技术对胰岛素样生长因子—1(cIGF 1)基因的5'端调控区进行遗传变异研究,发现该调控区的扩增产物经PstⅠ酶切后出现3种基因型(AA、AB、BB)。结果表明:性别对宁都三黄鸡这3种基因型的分布呈现显著差异(P<0 05)。分析这3种基因型与其体重的关系发现,这3种基因型对初生重、30日龄体重、60日龄体重、90日龄体重及120日龄体重影响差异均不显著(P>0 05),但体现出AA型有较高体重的趋势,公母表现出一致的规律。在万载康乐黄鸡中,均呈现出杂合优势,在8周龄及18周龄时差异不显著(P>0 05),而在12周龄表现为差异显著(P<0 05)。宁都三黄鸡公母基因型分布均符合哈代 温格伯定律,而万载康乐黄鸡基因型分布不符合哈代 温格伯定律。

胰岛素样生长因子-I对骨骼肌生长和修复研究进展

生长激素(GH/)胰岛素样生长因子-I(IGF-I)轴是肌肉生长的重要调节因子之一。虽然许多组织都能表达IGF-I,但它们各自的功能不同。骨骼肌是IGF-I的靶器官,同时也分泌IGF-I。骨骼肌组织表达的IGF-I对骨骼肌损伤后的再生、修复非常重要,也是通过适当干预保持肌肉质量的重要调节因素。主要讨论GH/IGF-I在促进骨骼肌再生和修复中的作用,并讨论其在运动康复中的应用前景。

团头鲂胰岛素样生长因子-Ⅰ基因克隆与分析

胰岛素样生长因子 Ⅰ (IGF Ⅰ )是一单链多肽。在脊椎动物中 ,IGF Ⅰ通过介导生长激素达到促进生长的作用。为研究鲤科鱼类IGF Ⅰ的结构功能及在水产养殖中的潜在应用前景 ,采用逆转录 -聚合酶链式反应 (RT PCR)方法 ,从团头鲂 (Megalobramaamblycephala)肝脏的总RNA中扩增出IGF ⅠcDNA。测定了该基因序列 ,推导其编码的蛋白质序列。克隆的cDNA序列编码包括信号肽和B、C、A、D、E 6个区域的 16 1个氨基酸。E区域分析结果表明所克隆的团头鲂IGF Ⅰ序列属于IGF ⅠEa - 2亚型。

人胰岛素样生长因子-1基因的克隆、表达和活性检测

目的 克隆人胰岛素样生长因子Ⅰ型 (hIGF 1) ,构建真核表达载体并进行表达及活性检测 ,为IGF 1基因治疗糖尿病奠定基础。 方法 提取胎儿肝脏总RNA ,RT PCR法扩增IGF 1cDNA片段 ,重组于pUCM T载体 ,测序正确后构建表达载体 ,转染猴肾成纤维细胞系COS 7,用原位杂交和免疫组织化学检测表达 ,收集培养上清以胰岛素刺激释放实验进行活性测定。 结果 扩增得到 710bp带有Kozak序列的IGF 1cDNA片段 ;成功构建了真核表达载体pCI neo hIGF 1;IGF 1在COS 7细胞得到了表达 ,并具有刺激胰岛素分泌的活性。 结论 新构建的载体pCI neo hIGF 1能在COS 7细胞中表达、分泌 ,且所分泌的IGF 1具有生物活性。

新生儿血清瘦素水平变化及与胰岛素样生长因子-I和胰岛素关系研究

为探讨新生儿期血清瘦素、胰岛素样生长因子_I(IGF_I)和胰岛素水平变化及其对新生儿生长发育的影响,采用放射免疫法检测46例健康新生儿静脉血和脐静脉血瘦素、IGF_I和胰岛素水平 ,采用新生儿体重、身长和Rohrers指数[(RI)=出生体重(g)×100/身长(cm)3]估测新生儿生长营养状态。结果显示早期新生儿组血清瘦素水平(0.59±0.43μg/L)明显低于初生组(8.29±6.76μg/L)和晚期新生儿组(1.68±0.58μg/L) ;早期至晚期新生儿组血清瘦素水平的增长值与此期间血清IGF_I、胰岛素和新生儿体重的增长值呈显著正相关(r=0.383,r=0.284,r=0.365) ;初生至早期新生儿组血清瘦素水平的下降值与胰岛素水平、新生儿体重的变化无相关性。提示瘦素在调节新生儿期体重和能量平衡方面起重要作用 ;瘦素可能通过IGF_I。

大鼠胰岛素样生长因子Ⅰ基因的克隆及表达

以大鼠染色体DNA为模板 ,PCR分别扩增胰岛素样生长因子Ⅰ (IGF Ⅰ )基因外显子 2编码区和外显子 3编码区 ,并使外显子 2编码区的 3′端与外显子 3编码区的 5′端有相同的 4 0个碱基。采用外显子拼接法 ,以两种扩增产物为模板再次进行PCR ,得到 2 10bp的大鼠IGF Ⅰ基因全编码序列。将此序列克隆入pUC18质粒进一步构建表达型重组质粒pGEX IGF Ⅰ ,并在大肠杆菌DH5α中进行诱导表达。表达产物经SDS PAGE分析及Westernblot检测 ,并经体外实验证明其具有刺激细胞增殖的生物活性。