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脂多糖对大鼠胰岛素瘤细胞INS-1自噬和凋亡的影响 被引量:1
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作者 刘兴艳 苏华 +3 位作者 季虹 张丽 辛衍代 荣海钦 《中华糖尿病杂志》 CAS 2012年第5期296-300,共5页
目的研究脂多糖(LPS)对大鼠胰岛素瘤细胞INS-1自噬和凋亡的影响及其可能机制。方法取处于对数期生长的INS-1细胞用于实验,分别用0.1、1.0、10.0mg/LLPS处理细胞,24h后用磺酰罗丹明B(SRB)染色法检测LPS对INS-1细胞增殖的影响... 目的研究脂多糖(LPS)对大鼠胰岛素瘤细胞INS-1自噬和凋亡的影响及其可能机制。方法取处于对数期生长的INS-1细胞用于实验,分别用0.1、1.0、10.0mg/LLPS处理细胞,24h后用磺酰罗丹明B(SRB)染色法检测LPS对INS-1细胞增殖的影响,用二氯荧光素双醋酸盐(DCFH-DA)作为荧光探针检测细胞内活性氧的水平变化,应用Western blotting法检测细胞自噬体膜上自噬标志分子微管相关蛋白1的轻链3-Ⅱ(Map1LC3-Ⅱ)和凋亡标志蛋白聚腺苷二磷酸-核糖多聚酶(PARP)切割带的变化。将INS-1细胞的自噬必需基因7(A增7)通过siRNA介导的RNA干扰手段进行沉默,然后以1.0mg/LLPS处理细胞,24h后应用Western blotting检测细胞中Atg7、Map1LC3-Ⅱ和PARP切割带的水平。先用400μmoL/L的活性氧清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)处理INS-1细胞,1h后加入10.0mg/L的LPS,24h后应用Western blotting法检测细胞Map1LC3-Ⅱ蛋白和PARP切割蛋白的水平。组间数据比较采用方差分析和t检验。结果与对照组(0.755±0.030)比较,0.1、1.0、10.0mg/LLPS组INS-1存活率降低,差异有统计学意义(分别为0.658±0.042、0.658±0.015、0.634±0.029,F=30.98,P〈0.01);与对照组(0.447±0.012)相比,0.1、1.0、10.0mg/LLPS组Map1LC3-Ⅱ蛋白水平增加,差异有统计学意义(分别为0.992±0.030、0.949±0.020、0.982±0.013,F=525.79,P〈0.01);与对照组(0.055±0.001)相比,0.1、1.0、10.0mg/LLPS组PARP切割蛋白水平增加,差异有统计学意义(分别为0.313±0.007、0.390±0.011、0.500±0.033,F=327.09,均P〈0.01);与对照组比较,10mg/LLPS组活性氧产生明显增多。与对照组比较,转染Atg7siRNA组Atg7、Map1LC3-Ⅱ和PARP切割蛋白水平均显著下降,差异均有统计学意义(t=156.069、123.154、103.246,均P〈0.01)。与LPS10.0mg/L组比较,LPS10.0mg/L+NAC组Map1LC3-Ⅱ和PARP切割蛋白水平均显著下降,差异均有统计学意义(t=66.37、26.84,均P〈0.01)。结论LPS可诱导INS-1细胞的自噬和凋亡,且其所诱导的凋亡依赖于自噬的发生;活性氧参与了LPS诱导的INS-1细胞的自噬和凋亡。 展开更多
关键词 胰岛素瘤细胞ins-1 脂多糖 自噬 凋亡 大鼠
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Nelfinavir损害鼠胰岛素瘤INS-1细胞内IRS-2信号传导 被引量:2
2
作者 周嘉强 项尊 Morten Schutt 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2004年第4期311-314,共4页
目的 :探讨 HIV- 1蛋白酶抑制剂 nelfinavir对胰岛 β细胞内胰岛素信号传导蛋白磷酸化的影响。方法 :体外观察鼠胰岛素瘤 INS- 1细胞经 nelfinavir治疗 4 8h后 ,用 10 0 nmol/ L胰岛素刺激 2 min,细胞裂解产物中的胰岛素信号传导蛋白磷... 目的 :探讨 HIV- 1蛋白酶抑制剂 nelfinavir对胰岛 β细胞内胰岛素信号传导蛋白磷酸化的影响。方法 :体外观察鼠胰岛素瘤 INS- 1细胞经 nelfinavir治疗 4 8h后 ,用 10 0 nmol/ L胰岛素刺激 2 min,细胞裂解产物中的胰岛素信号传导蛋白磷酸化采用免疫沉淀和 Western印迹方法测定。用台盼蓝染色细胞计数和 MTT衰减试验 ,评估nelfinavir对 INS- 1细胞活力的影响。结果 :nelfinavir降低胰岛素刺激的胰岛素受体底物 IRS- 2和 Akt- Thr3 0 8磷酸化 ,并呈剂量依赖关系。nelfinavir浓度为 10 μmol/ L时 ,分别降低 IRS- 2和 Akt- Thr3 0 8磷酸化达 5 2 %和 5 5 % ,在这个浓度下 nelfinavir没有细胞毒性作用。结论 :nelfinavir治疗可以损害胰岛 β细胞内 IRS- 展开更多
关键词 蛋白酶抑制药/投药和剂量 受体 胰岛素 Nelfinavir ins-1细胞 胰岛素受体底物-2 信号传导
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玄参水提取物对高糖暴露条件下INS-1细胞AMPK的激活作用
3
作者 郭旭 周俊 +6 位作者 李晓晗 陈仕琦 高艳果 张永红 王启斌 郑涛 陈黎 《医药导报》 CAS 北大核心 2024年第6期850-854,共5页
目的研究玄参水提取物(AESN)对高糖(HG)条件下INS-1细胞腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)活性的影响。方法将INS-1细胞培养于HG培养基中,并给予不同浓度AESN共孵育处理;利用细胞计数试剂-8(CCK-8)法检测AESN干预对细胞增殖/活力和焦亡小体形成... 目的研究玄参水提取物(AESN)对高糖(HG)条件下INS-1细胞腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)活性的影响。方法将INS-1细胞培养于HG培养基中,并给予不同浓度AESN共孵育处理;利用细胞计数试剂-8(CCK-8)法检测AESN干预对细胞增殖/活力和焦亡小体形成的影响,使用Western blotting法观察AESN对细胞内AMPK表达及磷酸化水平的影响;利用时间分辨-荧光共振能量转移(TR-FRET)实验检测AESN对AMPK激酶活性的影响。结果CCK-8检测结果显示同正常培养条件相比,HG暴露显著降低INS-1细胞增殖/活力并增加焦亡小体形成数量,Western blotting检测结果表明HG暴露可导致细胞内AMPK磷酸化水平下降;而AESN共孵育可呈浓度依赖性地增加INS-1细胞增殖/活力、抑制焦亡小体形成并激活AMPK。TR-FRET实验结果表明,AESN可浓度依赖性增加AMPK激酶活性。结论AESN对HG暴露条件下INS-1细胞AMPK具有激活作用。 展开更多
关键词 玄参 腺苷酸活化蛋白激酶 高糖暴露 ins-1细胞 荧光共振能量转移
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冷冻电镜含水超薄切片技术观察大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1)的超微结构 被引量:3
4
作者 刘红梅 栾会芹 +3 位作者 成永琴 丁东 李剑 樊瑜波 《电子显微学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期367-370,共4页
冷冻电镜含水切片技术(CEMOVIS)作为冷冻厚生物样品制备技术,包括生物样品的快速冷冻、冷冻切片和低温电镜观察过程,能够获得完全含水状态的生物样品的超微结构。本文应用冷冻含水切片技术观察到了大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1)内细胞器的高... 冷冻电镜含水切片技术(CEMOVIS)作为冷冻厚生物样品制备技术,包括生物样品的快速冷冻、冷冻切片和低温电镜观察过程,能够获得完全含水状态的生物样品的超微结构。本文应用冷冻含水切片技术观察到了大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1)内细胞器的高分辨超微结构。 展开更多
关键词 高压冷冻 冷冻含水切片 ins-1细胞 电镜 超微结构
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丝胶靶向Akt1调控PI3K/Akt信号通路促进STZ致损伤INS-1细胞增殖
5
作者 韩思雨 李雨欣 +2 位作者 易梦雅 李警耀 陈志宏 《承德医学院学报》 2024年第2期96-100,共5页
目的探讨丝胶是否通过靶向Akt1调控磷酸肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信号通路促进链脲佐菌素(STZ)致损伤大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1细胞)增殖。方法INS-1细胞随机分为4组:对照组(不予任何处理)、模型组(给予10 mmol/... 目的探讨丝胶是否通过靶向Akt1调控磷酸肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信号通路促进链脲佐菌素(STZ)致损伤大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1细胞)增殖。方法INS-1细胞随机分为4组:对照组(不予任何处理)、模型组(给予10 mmol/L STZ处理细胞)、丝胶组(给予10 mmol/L STZ+600μg/mL丝胶处理细胞)、抑制剂组(给予10 mmol/LSTZ+600μg/mL丝胶+0.3 mmol/L的Akt1抑制剂A-674563处理细胞)。药物作用时间均为24 h。CCK-8法检测各组INS-1细胞存活率。免疫蛋白印迹法(western blot)检测PI3K/Akt信号通路相关蛋白PI3K、p-Akt和增殖相关蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞核增殖相关抗原Ki67(Ki67)的表达情况。结果与对照组相比,模型组INS-1细胞存活率下降(P<0.05),PI3K、p-Akt1、PCNA和Ki67的蛋白表达显著下降(P<0.05);与模型组相比,丝胶组INS-1细胞存活率上升(P<0.05),PI3K、p-Akt1、PCNA和Ki67的蛋白表达显著增多(P<0.05);与丝胶组相比,抑制剂组INS-1细胞存活率下降(P<0.05),p-Akt1、PCNA和Ki67的蛋白表达显著下降(P<0.05)。结论丝胶具有促进STZ致损伤INS-1细胞增殖的作用,其作用机制与丝胶通过靶向Akt1调控PI3K/Akt信号通路有关。 展开更多
关键词 丝胶 2型糖尿病 ins-1细胞 增殖
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丝胶通过PI3K/Akt信号通路对受损INS-1细胞糖酵解的调控作用
6
作者 李雨欣 韩思雨 +2 位作者 易梦雅 李警耀 陈志宏 《承德医学院学报》 2024年第3期181-184,共4页
目的观察丝胶对链脲佐菌素(STZ)致损伤大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1细胞)PI3K/Akt信号通路和糖酵解的调控作用。方法实验以体外培养的INS-1细胞为研究对象随机分为五组,正常对照组、模型组、丝胶组、Akt1抑制剂组、Akt1激动剂组。运用蛋白印... 目的观察丝胶对链脲佐菌素(STZ)致损伤大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1细胞)PI3K/Akt信号通路和糖酵解的调控作用。方法实验以体外培养的INS-1细胞为研究对象随机分为五组,正常对照组、模型组、丝胶组、Akt1抑制剂组、Akt1激动剂组。运用蛋白印迹和实时荧光定量PCR法检测各分组细胞的磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K),蛋白激酶B(Akt),磷酸果糖激酶-1(PFK1),6-磷酸果糖-2,6-二磷酸酶(PFKFB2)的蛋白及mRNA的表达情况。结果与正常对照组相比,模型组PI3K,p-Akt,PFK1,PFKFB2的蛋白表达显著下降(P<0.05);丝胶组与模型组相比PI3K,p-Akt,PFK1,PFKFB2的蛋白表达显著增高(P<0.05);Akt1抑制剂组与丝胶组相比,p-Akt,PFK1,PFKFB2的蛋白表达显著降低(P<0.05);Akt1激动剂组与丝胶组相比,p-Akt,PFK1,PFKFB2的蛋白呈现上升的趋势。各组INS-1细胞中PI3K,Akt,PFK1,PFKFB2 mRNA的变化趋势与蛋白一致。结论丝胶对STZ致损伤INS-1细胞发挥保护作用的机制可能是,靶向Akt1影响PI3K/Akt信号通路增强糖酵解。 展开更多
关键词 丝胶 糖尿病 ins-1细胞 PI3K/AKT信号通路 糖酵解
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番石榴酸对INS-1胰岛β细胞增殖、胰岛素合成与分泌的促进作用及其机制分析 被引量:10
7
作者 叶开和 王婧茹 +4 位作者 马锦锦 王小康 张晓琦 叶文才 叶春玲 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1681-1687,共7页
目的考察番石榴酸(guavenoic acid,GA)对 INS-1胰岛β细胞增殖、细胞内胰岛素含量及分泌功能的影响,并探讨其可能的作用机制。方法培养 INS-1胰岛β细胞,给予GA(0.3、1、3、10、30 n·L^-1),并设空白对照组、溶媒对照组(... 目的考察番石榴酸(guavenoic acid,GA)对 INS-1胰岛β细胞增殖、细胞内胰岛素含量及分泌功能的影响,并探讨其可能的作用机制。方法培养 INS-1胰岛β细胞,给予GA(0.3、1、3、10、30 n·L^-1),并设空白对照组、溶媒对照组(0.1% DMSO)、分泌模型组及阳性药组(150 nmol·L^-1格列苯脲含1‰DMSO),药物作用48 h。应用 MTT 法检测药物对 INS-1的影响。使用酸醇提取液提取细胞中胰岛素,用放射免疫法检测药物对 I 细胞增殖 NS-1细胞内胰岛素含量的影响。分别用5.6、16.7 mmol·L^-1葡萄糖干预细胞1 h建立基础胰岛素分泌模型(BIS)、高糖刺激胰岛素分泌模型(GSIS),用放射免疫法测定药物对 INS-1细胞胰岛素分泌的影响,结果以总蛋白量校正。荧光定量 PCR 法检测药物对INS-1细胞内胰岛素基因、PDX-1、MafA mRNA 表达的影响。结果与溶媒对照组比较,GA 能明显地促进 INS-1胰岛细胞的增殖(P <0.01)并能明显增加 INS-1细胞内胰岛素含量(P <0.01),0.3~30 nmol·L -1 GA 对 BIS 及 GSIS 均有明显促进作用(P <0.05或 P <0.01),0.3~30 nmol·L^-1 GA 明显地上调 Insulin mRNA 的相对表达(P <0.01)。3、30 nmol·L^-1 GA 明显地上调 PDX-1 mRNA 的相对表达(P <0.01)。3、30 nmol·L^-1 GA 能明显地上调 MafA mRNA 的相对表达(P <0.01)。结论GA 能促进 INS-1胰岛β细胞增殖;增加细胞内胰岛素含量与分泌量,可能与其上调 Insulin、PDX-1、MafA 基因表达有关。 展开更多
关键词 番石榴酸 ins-1胰岛β细胞 增殖 胰岛素合成 胰岛素分泌 基因表达
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枸杞多糖通过抑制H_2O_2诱导的INS-1细胞凋亡促进胰岛素分泌 被引量:5
8
作者 张学军 尹长江 +2 位作者 杨坤宝 张海峰 史华宁 《中国中医基础医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1215-1217,共3页
目的:探讨枸杞多糖对H2O2诱导胰岛INS-1细胞凋亡和胰岛素分泌功能的影响。方法:采用H2O2诱导INS-1细胞凋亡模型,用100 mg/L枸杞多糖处理INS-1细胞,MTT法检测细胞活力,放射免疫法检测胰岛素含量,流式细胞仪检测细胞凋亡,荧光定量PCR检测B... 目的:探讨枸杞多糖对H2O2诱导胰岛INS-1细胞凋亡和胰岛素分泌功能的影响。方法:采用H2O2诱导INS-1细胞凋亡模型,用100 mg/L枸杞多糖处理INS-1细胞,MTT法检测细胞活力,放射免疫法检测胰岛素含量,流式细胞仪检测细胞凋亡,荧光定量PCR检测Bcl-2、Bax和Caspase-3的mRNA表达。结果 100 mg/L枸杞多糖能明显提高H2O2处理INS-1细胞的活力(P<0.01),促进细胞基础和葡萄糖刺激的胰岛素分泌(P<0.05,P<0.01),减少细胞凋亡(P<0.01),同时Bcl-2的表达明显升高(P<0.01),Bax和Caspase-3的表达明显降低(P<0.01,P<0.01)。结论:枸杞多糖可能通过促进Bcl-2的表达,抑制Bax和Caspase-3的表达,以降低H2O2诱导的INS-1凋亡,同时促进INS-1细胞的胰岛素分泌。 展开更多
关键词 枸杞多糖 ins-1 细胞凋亡 胰岛素分泌
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苦参碱对INS-1细胞胰岛素分泌的影响 被引量:3
9
作者 张保丽 李中平 +3 位作者 任文辉 陈红梅 蔺美玲 李伟 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期24-25,共2页
目的观察苦参碱对大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1)分泌胰岛素的作用及对链脲佐菌素(STZ)损伤大鼠INS-1细胞的保护和修复作用。方法实验分为5组:正常对照组,STZ组,苦参碱低、中、高3个浓度组。用四氮唑蓝(MTT)法测细胞活性、放免法测胰岛素分泌... 目的观察苦参碱对大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1)分泌胰岛素的作用及对链脲佐菌素(STZ)损伤大鼠INS-1细胞的保护和修复作用。方法实验分为5组:正常对照组,STZ组,苦参碱低、中、高3个浓度组。用四氮唑蓝(MTT)法测细胞活性、放免法测胰岛素分泌量、TBA比色法测丙二醛(MDA)含量和比色法测总抗氧化能力(T-AOC)。结果苦参碱可以增强INS-1细胞活性(P<0.05);刺激INS-1细胞分泌胰岛素(P<0.05);提高STZ损伤的INS-1细胞活性(P<0.05);促进STZ损伤的INS-1细胞胰岛素的分泌(P<0.05);降低STZ损伤的INS-1细胞MDA含量(P<0.05);升高STZ损伤的INS-1细胞的T-AOC(P<0.05)。结论苦参碱能够增强INS-1细胞活性,刺激其分泌胰岛素,减轻STZ对INS-1细胞的损伤作用,提高STZ损伤的INS-1细胞的抗氧化能力。 展开更多
关键词 苦参碱 ins-1细胞 链脲佐菌素 胰岛素
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内毒素脂多糖对胰岛细胞株INS-1细胞活力及胰岛素分泌的影响 被引量:3
10
作者 杜世春 林宁 +1 位作者 葛勤敏 苏青 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1577-1580,共4页
目的观察Toll样受体4(TLR4)在胰岛细胞株(INS-1)中的表达情况,探讨内毒素脂多糖(LPS)对INS-1细胞活力、胰岛素分泌功能以及TLR4表达的影响。方法采用RT-PCR技术和Western blotting方法检测INS-1细胞和经1 mg/L LPS刺激的INS-1细胞中TLR4... 目的观察Toll样受体4(TLR4)在胰岛细胞株(INS-1)中的表达情况,探讨内毒素脂多糖(LPS)对INS-1细胞活力、胰岛素分泌功能以及TLR4表达的影响。方法采用RT-PCR技术和Western blotting方法检测INS-1细胞和经1 mg/L LPS刺激的INS-1细胞中TLR4 mRNA和蛋白的表达变化;分别用不同质量浓度的LPS(0.01、0.1、1、5、10 mg/L)刺激INS-1细胞,CCK8法检测细胞活力,GSIS法测定胰岛素分泌功能。结果 RT-PCR和Western blotting检测结果显示:LPS刺激使INS-1细胞TLR4mRNA和蛋白的表达显著增加(P<0.05)。当LPS在0.1~10 mg/L时,INS-1细胞活力受到抑制,且呈剂量时间依赖性(P<0.05);1 mg/L LPS刺激可使高糖环境下的INS-1细胞的胰岛素分泌量显著减少(P<0.05)。结论一定浓度范围内的LPS刺激可抑制INS-1细胞活力,并减少高糖培养条件下细胞胰岛素的分泌量。LPS刺激能上调INS-1细胞TLR4 mRNA和蛋白的表达。内毒素可能通过直接作用损伤胰岛β细胞。 展开更多
关键词 Toll样受体4 脂多糖 ins-1细胞 Β细胞功能
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丹蛭降糖胶囊对波动高糖诱导的INS-1细胞凋亡和胰岛素分泌的影响 被引量:5
11
作者 郑书国 赵梦秋 +1 位作者 吴元洁 任尤楠 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期722-727,共6页
目的探讨丹蛭降糖胶囊(丹皮、太子参、生地黄、水蛭等)对波动高糖诱导的大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1)凋亡和胰岛素分泌功能的影响,并探讨其可能机制。方法 INS-1细胞与丹蛭降糖胶囊含药血清和对照血清预孵24 h后暴露于波动高糖(11.1 mmol/L ... 目的探讨丹蛭降糖胶囊(丹皮、太子参、生地黄、水蛭等)对波动高糖诱导的大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1)凋亡和胰岛素分泌功能的影响,并探讨其可能机制。方法 INS-1细胞与丹蛭降糖胶囊含药血清和对照血清预孵24 h后暴露于波动高糖(11.1 mmol/L 12 h,33.3 mmol/L 12 h)72 h。MTT法测定INS-1细胞活性,ELISA法测定胰岛素释放水平,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞内活性氧(ROS)水平,Western blot法检测胰十二指肠同源盒基因-1(PDX-1)蛋白表达水平,比色法测定细胞总抗氧化能力(TAC)和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果含丹蛭降糖胶囊血清可明显减轻波动高糖诱导的INS-1细胞损伤、凋亡和胰岛素分泌功能障碍(P<0.05或P<0.01),上调PDX-1蛋白表达水平(P<0.01),并能显著提高细胞内SOD活性和总抗氧化能力,降低细胞内ROS水平。结论丹蛭降糖胶囊可有效减轻波动高糖诱导的INS-1细胞损伤和凋亡,改善胰岛素分泌功能,其机制与提高细胞抗氧化能力、降低细胞内ROS水平,进而上调PDX-1蛋白表达水平有关。 展开更多
关键词 丹蛭降糖胶囊 糖尿病 波动高糖 ins-1细胞 活性氧
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S-雌马酚改善高糖培养条件下INS-1细胞胰岛素分泌功能的研究 被引量:3
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作者 王丽 陈卡 +2 位作者 刘凯 高燕翔 糜漫天 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期386-391,共6页
目的研究大豆甙元活性代谢产物S-雌马酚(S-equol,S-Eq)对高糖培养条件下大鼠胰岛素瘤(INS-1)细胞胰岛素分泌功能的影响。方法采用26.2 mmol/L葡萄糖(高糖组,H)及葡萄糖分别与不同浓度S-Eq(0.1、1、10、100μmol/L S-Eq+H组)干预INS-1细... 目的研究大豆甙元活性代谢产物S-雌马酚(S-equol,S-Eq)对高糖培养条件下大鼠胰岛素瘤(INS-1)细胞胰岛素分泌功能的影响。方法采用26.2 mmol/L葡萄糖(高糖组,H)及葡萄糖分别与不同浓度S-Eq(0.1、1、10、100μmol/L S-Eq+H组)干预INS-1细胞24 h,另设未干预的INS-1细胞为对照组(C)。采用CCK-8检测细胞活力,ELISA法测定葡萄糖刺激胰岛素分泌(GSIS)功能,TUNEL法联合Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡,Real-time PCR和Western blot分别检测前胰岛素原(preproinsulin,PPI)、葡萄糖转运蛋白2(glucose transporter 2,Glut2)、线粒体阴离子载体解偶联蛋白2(uncoupling protein 2,UCP2)mRNA及蛋白表达。结果 S-Eq能显著增加高糖培养条件下INS-1细胞活力(P<0.05),其中1μmol/L S-Eq效果最为明显。GSIS检测发现,与对照组比较,高糖处理后INS-1细胞胰岛素分泌显著降低,而S-Eq能显著增加高糖处理的INS-1细胞的胰岛素分泌(P<0.05)。同时,0.1、1、10μmol/L S-Eq均能明显减少高糖培养条件下INS-1细胞凋亡,上调PPI mRNA、Glut2 mRNA和Glut2蛋白表达,而显著抑制UCP2 mRNA及其蛋白的表达(P<0.05)。结论 S-Eq可有效改善高糖培养条件下INS-1细胞胰岛素分泌功能,可能与抑制细胞凋亡,调节Glut2和UCP2表达有关。 展开更多
关键词 S-雌马酚 ins-1细胞 葡萄糖刺激胰岛素分泌 葡萄糖转运蛋白2 解偶联蛋白2
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褪黑素对大鼠胰岛瘤细胞INS-1胰岛素和Gαi/o蛋白基因表达的影响 被引量:3
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作者 赵益文 赵佳 庞全海 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第17期3429-3438,共10页
【目的】研究褪黑素对大鼠胰岛瘤细胞INS-1中胰岛素和Gαi/o蛋白基因表达的影响,探究褪黑素在m RNA水平对Gαi/o和Insulin1调节作用中可能存在的分子机制。褪黑素(melatonin,MT)是松果腺分泌的一种吲哚类神经内分泌激素,在机体内可调节... 【目的】研究褪黑素对大鼠胰岛瘤细胞INS-1中胰岛素和Gαi/o蛋白基因表达的影响,探究褪黑素在m RNA水平对Gαi/o和Insulin1调节作用中可能存在的分子机制。褪黑素(melatonin,MT)是松果腺分泌的一种吲哚类神经内分泌激素,在机体内可调节胰岛素的分泌而使其呈现昼夜节律性分泌,影响葡萄糖昼夜代谢水平的变化进而维持机体血糖的相对恒定,故对于褪黑素影响胰岛素表达的研究可能会对褪黑素在胰岛素昼夜节律性分泌中的调控作用提供依据。【方法】将冻存的INS-1细胞复苏培养至第三代,INS-1细胞传代后,用RPMI1640培养基培养INS-1细胞约24—48 h,当细胞密度达60%—70%时,使用无血清无葡萄糖的RPMI1640洗2次,然后在INS-1细胞培养外液中分别加入不同浓度(0、10、20、30、50 mmol·L-1)的葡萄糖及100 nmol·L-1褪黑素和不同浓度葡萄糖孵育INS-1细胞12 h,观察和统计INS-1细胞的形态学变化。利用Easy Pure?RNA Kit提取INS-1细胞的总RNA,核酸蛋白测定仪测定细胞总RNA的浓度和纯度,其次利用甲醛变性琼脂糖凝胶电泳检测细胞的总RNA质量,Trans Script One-Step g DNA Removal and c DNA Synthesis Super Mix反转录合成c DNA。利用Primer Premier5.0引物设计软件,参考Gen Bank上已登录的基因序列进行Insulin1、Gαi1、Gαi2、Gαo、PKA和PKCα引物的设计。应用q RT-PCR法进行检测处理后的INS-1细胞Insulin1、Gαi1、Gαi2、Gαo、PKA和PKCαm RNA水平的变化。【结果】用含不同浓度葡萄糖培养液孵育INS-1细胞后,观察发现随着培养基中葡萄糖浓度含量的增加INS-1细胞突触的增长呈现先增加后减少的趋势,其中20 mmol·L-1葡萄糖处理组INS-1细胞突触的增长明显,而20 mmol·L-1葡萄糖和100 nmol·L-1褪黑素处理组INS-1细胞表面积增大,但突触增长却不明显;培养基中含不同浓度葡萄糖的处理组中,Insulin1 m RNA水平呈现先升后降的趋势,Gαi1 m RNA水平则呈现先降后升的趋势,其中20 mmol·L-1葡萄糖处理组,Insulin1 m RNA水平显著增加(P<0.05),Gαi1 m RNA水平显著减少(P<0.05),而Gαi2和Gαo则无显著变化(P>0.05),因而Gαi1表现出与Insulin1 m RNA水平呈现负相关性而非Gαi2、Gαo与Insulin1 m RNA水平呈现负相关性;20 mmol·L-1葡萄糖和褪黑素处理组和20 mmol·L-1葡萄糖处理组相比,20 mmol·L-1葡萄糖和褪黑素处理组的Gαi1 m RNA水平显著增高(P<0.05),且Insulin1和PKCαm RNA水平显著减少(P<0.05),PKA m RNA水平则减少不显著(P>0.05)。【结论】褪黑素能够抑制INS-1细胞Insulin1的表达,减少胰岛素的分泌导致INS-1细胞适应性增生。褪黑素与其受体结合后可促进Gαi1 m RNA水平增高而抑制PKCα的表达,使得Insulin1的表达受到抑制,胰岛素分泌减少,使血糖在夜间得以维持相对恒定。 展开更多
关键词 褪黑素 ins-1细胞 葡萄糖 胰岛素 Gαi/o
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平糖方药物血清急性抑制软脂酸刺激的INS-1β细胞胰岛素分泌 被引量:1
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作者 张海啸 杨叔禹 +4 位作者 曹洪欣 鞠大宏 刘长勤 李学军 赵岩 《中国中医基础医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期780-782,共3页
目的:观察平糖方药物血清对高浓度软脂酸刺激下的INS-1β细胞胰岛素分泌的影响。方法:以大鼠胰岛β细胞株INS-1细胞为模型,以平糖方药物血清作为刺激因素,通过MTT方法,测定INS-1细胞的生长和增殖能力;在0.5mmol/L PA的条件下,分别观察... 目的:观察平糖方药物血清对高浓度软脂酸刺激下的INS-1β细胞胰岛素分泌的影响。方法:以大鼠胰岛β细胞株INS-1细胞为模型,以平糖方药物血清作为刺激因素,通过MTT方法,测定INS-1细胞的生长和增殖能力;在0.5mmol/L PA的条件下,分别观察平糖方药物血清对INS-1细胞胰岛素分泌和ATP合成的影响,胰岛素分泌采用RIA方法检测,ATP采用荧光素酶方法检测。结果:平糖方药物血清对INS-1β细胞的生长增殖有一定的抑制趋势,其中高剂量组与细胞对照组相比出现了明显的降低。PA作用于细胞24h可以导致胰岛素分泌增加、ATP合成升高,平糖方药物血清可使PA促进的胰岛素分泌降低、ATP合成降低;而作用于细胞72h可以导致胰岛素分泌减少、ATP合成降低,平糖方药物血清对PA引起的ATP降低没有明显的改善作用。结论:平糖方药物血清急性抑制PA促进胰岛素分泌和ATP合成,还可能通过抑制ATP合成而急性抑制PA促进胰岛素分泌。 展开更多
关键词 平糖方药物血清 软脂酸 ins-细胞 胰岛素分泌
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DTBNP、DTDP促进INS-1细胞葡萄糖刺激胰岛素分泌 被引量:1
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作者 潘明麟 居来提.赛买提 +1 位作者 刘田 郭嫣嫣 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2016年第6期883-886,共4页
目的:探讨巯基氧化还原试剂对葡萄糖刺激胰岛素分泌(glucose-stimulated insulin secretion,GSIS)影响,进而揭示其调节胰岛素分泌的可能机制。方法 :INS-l细胞经传代培养3~4 d后在KRBH液中,37℃培养箱孵育30 min,再用含有不同浓度... 目的:探讨巯基氧化还原试剂对葡萄糖刺激胰岛素分泌(glucose-stimulated insulin secretion,GSIS)影响,进而揭示其调节胰岛素分泌的可能机制。方法 :INS-l细胞经传代培养3~4 d后在KRBH液中,37℃培养箱孵育30 min,再用含有不同浓度葡萄糖和巯基氧化还原试剂的KRBH液中培养60 min。然后留取上清液进行胰岛素测定。结果:(1)INS-1细胞在2.5、5、10、15、20 mmol/L葡萄糖浓度范围内胰岛素分泌量逐渐增加,G5、G10、G15组间两两相比均有统计学意义(P〈0.05);(2)与G10组相比,G10+DTBNP、G10+DTDP组胰岛素分泌量显著增加(P〈0.05),且该效应可以被DTT所消除。(3)DTBNP、DTDP均能增加NIF处理组胰岛素分泌,但其增加幅度低于非NIF处理组(P〈0.05);(4)与非DIA组相比,G10+DIA+DTBNP、G10+DIA+DTDP组胰岛素分泌增加幅度显著减低(P〈0.05);(5)同G10组比较,G10+DIA+NIF+DTBNP、G10+DIA+NIF+DTDP组胰岛素分泌值增加(P〈0.05)。结论 :本研究显示巯基氧化还原试剂对GSIS产生调节作用。DTDP、DTBNP可能通过对K_ATP、L型Ca_V通道及IP_3受体活性的调节,促进胰岛素分泌。 展开更多
关键词 葡萄糖刺激胰岛素分泌 ins-1细胞 巯基氧化还原试剂
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丝胶对STZ致损伤INS-1细胞活性和胰岛素分泌的影响 被引量:1
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作者 王小杰 刘美晓 +2 位作者 谢云鹏 孙一婵 陈志宏 《承德医学院学报》 2017年第3期190-192,共3页
目的:探讨丝胶对STZ致损伤的大鼠胰岛素瘤INS-1细胞活性和胰岛素分泌的影响。方法:以链脲佐菌素(STZ)诱导INS-1细胞损伤,细胞分为正常组、STZ组和丝胶组(300μg/L)。普通光学倒置显微镜观察各组细胞的一般状态;MTT法测定细胞活性;ELISA... 目的:探讨丝胶对STZ致损伤的大鼠胰岛素瘤INS-1细胞活性和胰岛素分泌的影响。方法:以链脲佐菌素(STZ)诱导INS-1细胞损伤,细胞分为正常组、STZ组和丝胶组(300μg/L)。普通光学倒置显微镜观察各组细胞的一般状态;MTT法测定细胞活性;ELISA法检测培养上清中胰岛素的含量。结果:与正常组相比,STZ组细胞活性明显下降,培养上清中胰岛素的含量明显降低(P<0.05)。经300μg/L丝胶处理后,INS-1细胞活性、培养上清中胰岛素的含量均明显升高(P<0.05)。结论:丝胶蛋白可提高STZ致损伤大鼠胰岛素瘤INS-1细胞的活性,以及促进胰岛素的分泌。 展开更多
关键词 丝胶 链脲佐菌素(STZ) ins-1细胞 细胞活性 胰岛素分泌
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海马胆碱能神经刺激肽通过活化3型毒蕈碱受体促进INS-1细胞胰岛素释放
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作者 高飞 陈宏 +3 位作者 张桦 郭南京 徐艳花 蔡德鸿 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期580-582,共3页
目的明确海马胆碱能神经刺激肽(HCNP)对INS-1细胞胰岛素分泌影响,并对其可能作用的毒蕈碱样胆碱能受体途径进行分析。方法 INS-1细胞随机分为3组:对照组、HCNP组、HCNP+佛波酯(PMA)组。对照组给予RPMI 1640液培养,HCNP组给予人工合成HCN... 目的明确海马胆碱能神经刺激肽(HCNP)对INS-1细胞胰岛素分泌影响,并对其可能作用的毒蕈碱样胆碱能受体途径进行分析。方法 INS-1细胞随机分为3组:对照组、HCNP组、HCNP+佛波酯(PMA)组。对照组给予RPMI 1640液培养,HCNP组给予人工合成HCNP(50 pg/ml)与RPMI 1640液共培养,HCNP+PMA组予人工合成HCNP与RPMI 1640液共培养后,行胰岛素释放前18 h加入PMA(10 nmol/L);应用放射免疫方法检测各组不同浓度葡萄糖培养液中胰岛素含量。实时定量PCR检测对照组、HCNP组HCNP前体蛋白(HCNP-pp)、胆碱乙酰转移酶(choline acetyltransferase,ChAT)、3型毒蕈碱样受体(3-typemuscarinic receptor,M3R)基因水平表达情况。结果浓度为3.3 mmol/L葡萄糖,三组间胰岛素含量无明显差异。浓度为5.6mmol/L、16.7 mmol/L葡萄糖作用下,HCNP组胰岛素含量均高于对照、HCNP+PMA组,差异具有统计学意义。HCNP组INS-1细胞HCNP-pp、ChAT、M3R三者mRNA含量均高于对照组,差异具有统计学意义。结论 HCNP通过提高ChAT活性,推测影响乙酰胆碱合成,进一步活化M3R,促进胰岛素分泌,PMA可阻断此作用。 展开更多
关键词 海马胆碱能神经刺激肽 ins-1细胞 胰岛素 3型毒蕈碱受体
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胰岛α细胞培养上清液对INS-1细胞胰岛素释放与合成的影响
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作者 巩秋红 李光伟 娄晋宁 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2004年第2期161-164,共4页
在培养的INS 1细胞中 ,分别加入不同比例的胰岛α细胞培养上清液 (以下简称上清液 ) ,在不同浓度葡萄糖的刺激下 ,分别孵育不同时间 ,用放射免疫法测定INS 1细胞培养基中的胰岛素含量。在 2 0mmol L葡萄糖浓度下 ,不同刺激时间 ,不同浓... 在培养的INS 1细胞中 ,分别加入不同比例的胰岛α细胞培养上清液 (以下简称上清液 ) ,在不同浓度葡萄糖的刺激下 ,分别孵育不同时间 ,用放射免疫法测定INS 1细胞培养基中的胰岛素含量。在 2 0mmol L葡萄糖浓度下 ,不同刺激时间 ,不同浓度的上清液刺激INS 1细胞分泌的胰岛素显著高于 0 %上清液 (以下简称对照组 ,P <0 0 5或0 0 1 )。在 0、1 85mmol L葡萄糖刺激时 ,不同浓度的上清液对INS 1细胞的胰岛素分泌无明显作用 ,而在 5 6、1 6 7和 5 0mmol L葡萄糖刺激时 ,不同浓度的上清液刺激INS 1细胞分泌的胰岛素显著高于对照组 (P <0 0 5或 0 0 1 )。RT PCR结果显示 ,在 1 6 7mmol L葡萄糖刺激 4、1 2和 2 4h后 ,30 %上清液对INS 1细胞胰岛素mRNA水平均无明显影响。提示胰岛α细胞培养上清液对糖刺激的INS 1细胞的胰岛素分泌有促进作用 。 展开更多
关键词 胰岛α-细胞 细胞培养 上清液 ins-1细胞 胰岛素 释放 合成
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番石榴酸改善INS-1胰岛β细胞胰岛素抵抗 被引量:3
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作者 魏崧丞 王婧茹 +5 位作者 叶开和 王小康 马锦锦 张晓琦 叶文才 叶春玲 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期710-715,共6页
目的考察番石榴酸对INS-1胰岛β细胞胰岛素抵抗的作用,并探讨其可能的作用机制。方法 40 mmol/L葡萄糖干预INS-1胰岛β细胞48 h建立胰岛素抵抗模型,设番石榴酸干预组(0.3、1、3、10、30 nmol/L),以及空白对照组、二甲亚砜对照组,胰岛素... 目的考察番石榴酸对INS-1胰岛β细胞胰岛素抵抗的作用,并探讨其可能的作用机制。方法 40 mmol/L葡萄糖干预INS-1胰岛β细胞48 h建立胰岛素抵抗模型,设番石榴酸干预组(0.3、1、3、10、30 nmol/L),以及空白对照组、二甲亚砜对照组,胰岛素抵抗模型组,正钒酸钠组(1 mmol/L)和罗格列酮组(1 mmol/L),药物作用48 h。分别以5.6、16.7 mmol/L葡萄糖干预细胞1 h作为基础胰岛素分泌(BIS)、高糖刺激胰岛素分泌(GSIS)条件,用放射免疫法检测药物对胰岛素分泌的影响,结果以该细胞总蛋白量校正。荧光定量PCR法检测药物对胰岛素抵抗INS-1细胞内PTP1B、PPARγmRNA表达的作用。结果与胰岛素抵抗模型组比较,0.3 nmol/L番石榴酸便能促进胰岛素抵抗INS-1细胞的GSIS(P<0.05或P<0.01);1 nmol/L番石榴酸即可显著促进基础胰岛素分泌(P<0.01)。0.3、3、30 nmol/L番石榴酸均能显著下调胰岛素抵抗INS-1细胞的PTP1B mRNA相对表达(P<0.05或P<0.01),其中0.3和3 nmol/L番石榴酸下调作用优于正钒酸钠,上调PPARγmRNA相对表达作用优于罗格列酮。结论番石榴酸能够改善INS-1细胞胰岛素抵抗,可能通过下调PTP1B和上调PPARγ基因表达有关。番石榴酸可能通过改善胰岛β细胞自身胰岛素抵抗而发挥抗糖尿病作用。 展开更多
关键词 番石榴酸 ins-1胰岛β细胞 胰岛素抵抗 PTP1B PPARΓ
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益气化浊汤下调胰岛素分泌受损INS-1细胞miR-124-3p改善胰岛素分泌 被引量:2
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作者 翁思颖 毛竹君 柴可夫 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2019年第3期563-568,共6页
目的:研究益气化浊汤调控miR-124-3p改善胰岛素分泌受损INS-1细胞的作用机制。方法:四氧嘧啶诱导INS-1细胞建立胰岛素分泌受损(ISD)模型,分设model组、低剂量益气化浊汤干预组(YD-lo)、高剂量益气化浊汤组(YD-hi),正常INS-1细胞设为cont... 目的:研究益气化浊汤调控miR-124-3p改善胰岛素分泌受损INS-1细胞的作用机制。方法:四氧嘧啶诱导INS-1细胞建立胰岛素分泌受损(ISD)模型,分设model组、低剂量益气化浊汤干预组(YD-lo)、高剂量益气化浊汤组(YD-hi),正常INS-1细胞设为control组,测各组细胞胰岛素分泌水平及测miR-124-3p表达丰度;生物信息学法预测miR-124-3p潜在靶基因;测各组细胞miR-124-3p靶基因PLC-B1及其下游IP3R表达;双荧光报告基因实验行靶基因验证;测miR-124-3p mimic与miR-124-3p inhibitor转染后ISD-INS-1细胞PLC-B1及IP3R表达。结果:model组基础胰岛素分泌(BIS)、葡萄糖刺激后胰岛素分泌(GSIS)较control组均下降(P<0.05),YD-lo组BIS、GSIS较model组无差异(P>0.05),YD-hi组BIS、GSIS较model组均升高(P<0.05); miR-124-3p表达丰度,model组较control组下降(P<0.05),YD-lo组较model组无差异(P>0.05),YD-hi组较model组升高(P<0.05)。生物信息学法分析结果显示PLC-B1为miR-124-3p潜在靶基因;PLC-B1、IP3R-1 mRNA相对表达量,model组较control组均下降(P<0.05),YD-lo组较model组均无差异(P>0.05),YD-hi组较model组均升高(P<0.05);双荧光报告基因实验验证PLC-B1为miR-124-3p靶基因;相较control组,转染miR-124-3p mimics后,PLC-B1、IP3R的mRNA及蛋白表达量均明显降低(P<0.05),转染miR-124-3p inhibtor后,PLC-B1、IP3R的mRNA及蛋白表达量均无变化(P>0.05);益气化浊汤可减少转染miR-124-3p mimics后ISD-INS-1细胞PLC-B1、IP3R基因及蛋白表达量的降低(P<0.05)。结论:益气化浊汤能促进ISD-INS-1细胞胰岛素分泌;miR-124-3p过表达是INS-1细胞胰岛素分泌下降的机制之一;益气化浊汤可通过下调ISD-INS-1细胞miR-124-3p表达,增加PLC-B1表达,减少它对PLC-B1/IP3R通路的抑制,改善胰岛素分泌。 展开更多
关键词 益气化浊汤 胰岛素分泌受损 ins-1细胞 mircoRNA-124-3p PLC-B1
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