黄河鲤胰岛素诱导基因1(INSIG1)序列特征、SNP位点及其与生长性状的关联分析

为探究胰岛素诱导基因1(insulin-induced gene,INSIG1)在黄河鲤(Cyprinus carpio haematoperus)生长发育过程中的作用,采用候选基因法对黄河鲤生长候选基因INSIG1进行了序列特征分析、组织表达及SNP与生长性状的关联分析。结果表明:黄河鲤INSIG1基因全长为4853 bp,包含5个外显子和4个内含子,其中cDNA全长为1530 bp,蛋白编码区(CDS)全长为756 bp,可编码251个氨基酸;INSIG1在不同物种间序列保守性较高,黄河鲤INSIG1与金线鲃、斑马鱼和鲫等鲤科鱼类聚为一支;预测黄河鲤INSIG1蛋白相对分子质量为27674.25,理论等电点为8.09,属于稳定的疏水性蛋白,该蛋白无信号肽,包含6个跨膜结构,蛋白三级结构包含6个α-螺旋和部分无规则卷曲;qRT-PCR分析显示,INSIG1基因在黄河鲤肝、脾、肾、肠、心脏、鳃、脑、肌肉和皮肤等组织中均有表达,其中在肠和肝组织中表达量较高,在鳃组织中表达量最低;黄河鲤INSIG1基因共鉴定到10个SNP位点,其中g.1854T>C和g.1982A>T 2个SNP位点的不同基因型与黄河鲤肥满度性状显著相关(P<0.05),其他位点的不同基因型与生长性状未表现出显著关联性。研究表明,INSIG1基因参与了黄河鲤的生长发育过程,其突变位点g.1854T>C和g.1982A>T显著影响了黄河鲤的肥满度,该结果为黄河鲤生长性状的分子标记辅助育种提供了可用的分子标记,对于选育具有优良性状的黄河鲤具有重要的实践意义。

牛科物种胰岛素诱导基因1(INSIG1)研究进展

胰岛素诱导基因1编码蛋白(INSIG1)定位于内质网膜上,是调控脂代谢的重要因子。INSIG1主要通过调控固醇调控元件结合蛋白(SREBP)和3-羟-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)来影响脂质代谢。越来越多的研究结果揭示了INSIG1在生物体内作用的复杂性。本文综述了INSIG1与SREBP和HMGR之间在脂代谢调控过程中的相互作用机制、INSIG1的结构及表达调控、INSIG1对牛科动物泌乳、生长等性状的影响。

猪胰岛素诱导1基因的cDNA克隆和差异表达及蛋白质序列分析

克隆猪胰岛素诱导1(INSIG1)基因,并对其蛋白质序列进行分析。根据人INSIG1基因的保守序列设计1对引物,以猪总RNA为模板,经RT–PCR获得INSIG1基因序列,通过相对荧光定量PCR分析该基因在不同组织中的表达量;将INSIG1基因序列连接到pMD19–T Simple载体上,用PCR检测阳性克隆后测序,并对克隆得到的基因进行生物信息学分析。结果表明,INSIG1基因在肺中的表达量最高,其次是在肝脏,再次是在脾脏,在心脏中的表达量最低;通过克隆,获得了一段999 bp的序列,其中831 bp的开放阅读框编码276个氨基酸;该蛋白不含信号肽序列,与其他动物INSIG1基因氨基酸序列的一致性在71%以上。

山羊INSIG1基因超表达对乳腺上皮细胞中脂质合成的影响

本研究旨在通过构建西农萨能奶山羊胰岛素诱导基因1(INSIG1)的重组腺病毒(Adenovirus,Ad)超表达载体,研究该基因超表达后对乳腺上皮细胞中脂质合成的影响,从而为该基因在山羊乳腺脂质合成调控中的功能研究奠定基础。根据GenBank(登录号:JQ665439)中山羊INSIG1基因序列设计引物,PCR扩增得到其CDS区序列。将目的基因连接到穿梭载体pAdTrack-CMV后获得pAdTrack-CMV-INSIG1质粒,将该质粒PmeⅠ线性化后转入大肠杆菌BJ5183感受态细胞进行同源重组,获得pAdEasy-INSIG1重组腺病毒超表达载体。该重组质粒经PacⅠ线性化后转染293A细胞进行病毒的包装及扩繁,利用LaSRT法测定其滴度。将获得的重组腺病毒AdINSIG1感染山羊原代乳腺上皮细胞,利用实时荧光定量PCR检测INSIG1及脂质合成相关基因的mRNA表达情况,利用GPO-Trinder酶学反应检测细胞中甘油三酯的含量。结果表明,成功构建了奶山羊INSIG1基因重组腺病毒超表达载体,获得了具有较高滴度(2×108 U·mL-1)的超表达腺病毒Ad-INSIG1;Ad-INSIG1感染山羊原代乳腺上皮细胞48h后,与Ad-GFP组相比,INSIG1基因的mRNA表达量上调约500倍,固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)和SREBP裂解活化蛋白(SCAP)的mRNA表达量无明显变化,参与脂肪酸从头合成(ACCα、FASN)及去饱和(SCD1)基因的mRNA表达量均显著下降(P<0.05);参与甘油三酯合成的3个关键基因中,GPAM及DGAT2的mRNA表达量显著下降(P<0.05),AGPAT6的表达无显著变化;同时,催化甘油三酯分解(ATGL)的基因mRNA表达量也显著下降(P<0.05);细胞内甘油三酯含量无显著变化。综上所述,在山羊原代乳腺上皮细胞中,INSIG1能够抑制脂质合成相关基因的表达,对山羊乳腺脂质合成具有调控作用。

小鼠骨髓干细胞有诱导分化为胰岛素分泌细胞的可能性

【目的】探讨小鼠骨髓干细胞有无被诱导分化为胰岛素分泌细胞的可能性。【方法】培养小鼠骨髓干细胞,采用含GLP-1和nicotinamide的无血清培养液诱导分化,在培养过程中,检测有关基因的表达。【结果】培养的小鼠骨髓干细胞具有与文献报道相似的生物学特性;在诱导分化第7天,有ngn3和pdx-1基因表达;在诱导分化第14天,有nkx2.2、pdx-1和ins2基因表达。【结论】小鼠骨髓干细胞有诱导分化为胰岛素分泌细胞的可能性,值得进一步研究。

IGF2基因印记丢失对胚胎干细胞向胰岛样细胞诱导分化的影响

背景:IGF2是一种重要的胚胎有丝分裂生长促进因子,在维持细胞正常生长过程中起关键作用,其基因表达以基因组印迹方式受表观遗传调控。当IGF2发生印迹丢失时,与个体的非正常发育以及肿瘤发生存在一些联系。目的:探讨IGF2基因发生印记丢失对小鼠胚胎干细胞定向诱导分化为胰岛样细胞的影响。方法:体外诱导2种小鼠胚胎干细胞(SF1-G和SF1-1)向胰岛样细胞分化;Real-Time PCR和细胞免疫荧光检测Insulin基因的表达;聚合酶链式反应-限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)检测印迹基因IGF2在诱导分化前后细胞中的亲本表达;体外胰岛素释放实验检测诱导终末细胞的胰岛素释放水平。结果与结论:(1)IGF2基因印记正常(SF1-G)和印记丢失(SF1-1)的2种小鼠胚胎干细胞在诱导分化前后印迹状态没有发生改变;(2)在诱导的终末细胞中,尽管2种细胞的胰岛素释放水平差异无显著性意义,但是Insulin基因在SF1-1组中的表达水平要高于其在SF1-G组的表达水平;(3)IGF2基因印记丢失可能与诱导分化来源的终末细胞中Insulin基因的表达上调相关。

INSIG1基因SNP rs9769506位点的多态性与2型糖尿病的关系

目的探讨胰岛素诱导基因1(INSIG1)单核苷酸多态性(SNP)rs9769506位点的多态性与2型糖尿病(T2DM)的相关性,以期为T2DM的防治提供潜在的分子靶点。方法选择河南省南阳市中心医院2013年1月至2014年3月收治的T2DM患者98例,另选取体检中心的健康体检者90例作为对照组,INSIG1基因SNP rs9769506位点多态性检测使用实时荧光定量PCR(RT-PCR)Taqman分析。结果 T2DM组rs9769506位点A等位基因频率为54.1%,G等位基因频率为45.9%,对照组A等位基因频率为47.8%,G等位基因频率为52.2%,两组之间差异无统计学意义(P>0.05)。T2DM组患者rs9769506位点A/A、A/G和G/G基因型频率分别为41.8%、24.5%和33.7%,对照组rs9769506位点A/A、A/G和G/G基因型频率分别为32.2%、31.1%和36.7%,A/A基因型频率在对照组和T2DM组之间差异有统计学意义(P<0.05),而A/G和G/G基因型频率在对照组和T2DM组之间差异则无统计学意义(P>0.05)。T2DM患者中三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)表达水平在A/A、A/G、G/G基因型患者之间差异有统计学意义(P<0.05),而A/G、G/G基因型患者之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 INSIG1基因SNP rs9769506位点A/A基因型在T2DM患者中检出率高,对T2DM早期筛查及基因治疗具有临床指导意义。

Pdx1激活Ngn3和Pax6诱导iPS细胞向胰岛β细胞分化的实验研究

目的:探讨胰十二指肠同源盒基因-1(Pdx1)在诱导多潜能干细胞(i PSCs)分化为胰岛β细胞中的作用及其机制。方法:体外培养人皮肤成纤维细胞来源的i PSCs,将该i PSCs定向诱导分化20 d;RT-PCR检测胰岛素相关基因的表达情况;比较诱导前后几个重要转录因子的表达情况;Ch IP检测胰岛β细胞发育过程中最重要的转录因子Pdx1结合启动子区域的具体位点。结果:体外成功培养人皮肤来源的i PSCs;胰岛素相关基因Maf A、insulin、Glut2、Nkx6.1、Glucokinase和Tcf1均呈现不同程度的表达增强,并在第20 d时表达基本达到高峰;实验组转录因子Pdx1、Ngn3与Pax6表达较对照组明显增强;Pdx1通过结合Insulin-P、Ngn3-P、Pax6-P区域激活下游基因Ngn3和Pax6。结论:Pdx1激活下游基因Ngn3和Pax6可能是其促进i PSCs定向诱导分化为胰岛β细胞的机制之一。

西农萨能奶山羊INSIG-1编码区的克隆、序列特征分析和组织表达

【目的】克隆西农萨能奶山羊胰岛素诱导基因1(INSIG-1)编码区,并对其进行序列特征分析和组织表达规律研究。【方法】提取西农萨能奶山羊总RNA,反转录cDNA后进行PCR反应,对克隆得到的INSIG-1序列进行生物信息学分析。用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测INSIG-1在皮下脂肪、胸部肌肉、乳腺、肝脏、肾脏、心脏、肺、脾脏、瘤胃、小肠10个组织中的表达情况。【结果】获得西农萨能奶山羊INSIG-1基因1 014bp序列(Gen-Bank登录号JQ665439),其中编码区序列长度为831bp,编码276个氨基酸。西农萨能奶山羊INSIG-1编码区与牛(GenBank登录号NM_001077909)的亲缘关系最近,相似性达97%,编码氨基酸序列的相似性达90%,而与小鼠(GenBank登录号NM_025836)的亲缘关系较远。预测INSIG-1蛋白质分子量为29.70ku,理论等电点为8.99;IN-SIG-1蛋白质具有5个跨膜螺旋结构,且有较强的疏水性,不含信号肽。RT-qPCR检测结果表明,在西农萨能奶山羊10个组织中INSIG-1均有表达,其中在肝脏中的相对表达量最高,皮下脂肪、胸部肌肉、肺次之,在心脏中的相对表达量最低。【结论】克隆得到了西农萨能奶山羊的INSIG-1基因,并探明了其组织表达规律。

INSIG2稳定表达细胞系的建立及该基因对脂肪代谢的影响

目的建立胰岛素诱导基因2(INSIG2)稳定表达细胞系,观察过表达INSIG2后对脂肪代谢的影响。方法构建INSIG2真核表达质粒,经脂质体转染3T3-L1细胞,RT-PCR、免疫细胞化学法鉴定INSIG2阳性细胞株及检测胰岛素诱导基因1(INSIG1)、脂肪酸合成酶(FAS)mRNA表达;ELISA检测细胞培养液中游离脂肪酸(FFA)的含量;油红"O"染色检测脂肪细胞的分化。结果pcDNA3.1(+)I-NSIG2成功转染3T3-L1细胞,过表达INSIG2后,INSIG1、FASmRNA表达均下调,细胞培养液中游离脂肪酸含量降低,脂肪细胞分化明显抑制。结论获得了INSIG2稳定表达细胞系,过表达INSIG2对脂肪代谢具有抑制作用。

猪INSIG2基因cDNA克隆、序列特征分析及差异表达

为了克隆猪胰岛素诱导2(INSIG2)基因,并对其进行序列特征分析和组织差异表达规律研究,试验提取猪总RNA,反转录c DNA后进行PCR反应,对克隆得到的INSIG2序列进行生物信息学分析,并用实时荧光定量PCR检测INSIG2在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、胃、肾脏、肌肉7个器官/组织中的表达情况。结果表明:试验获得1段998 bp的序列,该片段编码区序列长度为678 bp,编码225个氨基酸。INSIG2蛋白分子质量为24.730 9 ku,理论等电点为8.64,不含信号肽;INSIG2蛋白有较强的疏水性,具有5个跨膜螺旋结构。与其他动物的INSIG2基因氨基酸序列一致性在92%以上。INSIG2基因在7个被检测器官/组织中均有表达,且肺脏中表达量最高,肝脏次之,再次是胃,心脏和肌肉的表达量最低。

小鼠胰岛素诱导基因1 siRNA稳定表达细胞株的建立及其对细胞胆固醇代谢的影响

目的构建并筛选针对小鼠胰岛素诱导基因1(insulin induced gene 1,insig1)siRNA的特异性表达质粒,建立稳定转染细胞株,并观察其对小鼠巨噬细胞RAW264.7胆固醇代谢的影响。方法根据GenBank中登录的insig1基因序列及RNA干扰原则,设计3个阳性克隆及1个阴性克隆序列,定向克隆入pGenesil-1质粒,构建insig1 shRNA真核表达质粒,测序鉴定后,脂质体法转染RAW264.7细胞,筛选干扰效果最佳的质粒,将其转染入RAW264.7细胞,经G418筛选建立稳定转染细胞株,采用RT-PCR及Western blot法检测转染细胞中insig1基因的转录水平及蛋白的表达水平,油红O染色观察转染细胞中胆固醇含量的变化。结果酶切及测序结果证实,insig1基因shRNA表达质粒构建正确,其中si-2为干扰效果最佳的质粒;在稳定转染的RAW264.7细胞中,si-2组insig1基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平较阴性质粒组和未转染组明显降低(P<0.05),油红O颗粒含量最多。结论成功建立了insig1 siRNA稳定表达细胞株,体外模型证明了对insig1基因的干扰可促进细胞胆固醇摄取。

奶牛胰岛素诱导基因1的克隆、组织分布及稳定表达细胞系的建立

为研究奶牛INSIG1基因的功能,本研究检测了8个组织中INSIG1基因的分布情况,PCR扩增得到INSIG1基因的编码区序列,采用嘌呤霉素筛选稳定表达INSIG1的肝脏细胞系并进行鉴定,结果表明INSIG1基因在奶牛肝脏、小肠、肌肉和脂肪组织的表达丰度较高,将构建的INSIG1-C31真核载体与phi C31整合酶共转染肝脏细胞,经过4μg/m L嘌呤霉素筛选后,获得完全表达绿色荧光蛋白的肝脏细胞系,鉴定表明INSIG1基因已经整合到细胞基因组中。本研究获得了稳定表达INSIG1基因的肝脏细胞系,为深入研究INSIG1基因功能提供了材料。

胰腺十二指肠同源异型盒-1、神经源性分化因子-1及肌腱膜纤维肉瘤癌基因同系物A三基因修饰小鼠诱导多潜能干细胞分化为胰岛素分泌细胞的研究

目的 观察胰岛素转录关键调控因子胰腺十二指肠同源异型盒-1（PDX-1）、神经源性分化因子-1（NeuroD1）及肌腱膜纤维肉瘤癌基因同系物A（MafA）对小鼠诱导多潜能干细胞（iPS）分化为胰岛素分泌细胞的作用。方法 重组腺病毒Ad-mPDX-1-IRES-绿色荧光蛋白（GFP）、Ad-mNeuroD1-IRES-GFP、Ad-mMafA-IRES-GFP联合转染小鼠iPS细胞,体外培养后逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测胰岛β细胞功能基因表达,免疫荧光检测胰岛素蛋白表达及定位,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测不同糖浓度下胰岛素的分泌量。将胰岛素分泌细胞移植到糖尿病小鼠肝脏,免疫组织化学检测其在体内胰岛素的表达,葡萄糖耐量试验及空腹血糖监测评估移植细胞在糖尿病小鼠体内的功能发挥。结果 三基因转染的小鼠iPS细胞能分化为胰岛素分泌细胞,RT-PCR结果显示其胰岛β细胞功能基因的表达与小鼠胰岛β细胞株MIN6相似,免疫荧光检测见细胞内有胰岛素合成,ELISA检测结果显示细胞对不同浓度葡萄糖有较好的反应性。当葡萄糖浓度为30 mmol/L,胰岛素释放量最高为（0.309 3±0.017 9）ng。免疫组织化学染色显示移植细胞注射区域的肝实质内可见相对集中的棕黄色染色,表明移植细胞有胰岛素分泌。糖耐量试验及空腹血糖监测显示移植细胞能够控制糖尿病小鼠的血糖水平,在体内发挥良好的治疗作用。结论 胰岛素转录关键调控因子PDX-1、NeuroD1和MafA三基因能使小鼠iPS细胞分化为具有显著胰岛素合成和分泌能力的胰岛素分泌细胞,在体内发挥一定的治疗作用。

乌药醇提物对酒精联合高脂饮食诱导的脂肪肝防治作用研究

目的观察乌药醇提取物(LREE)对酒精性脂肪肝模型小鼠的保护作用,探讨其可能的作用机制。方法32只雄性ICR小鼠按随机数字表法分为正常对照组、模型对照组、易善复组(0.2736 g/kg)和乌药组(1 g/kg),每组8只。采用饮食高脂饲料复合梯度浓度白酒连续灌胃8周复制酒精性脂肪肝模型小鼠,造模的同时给予易善复、LREE进行干预;于第2、4、6、8周采血,全自动生化仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性及总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)水平;实验期末,解剖,取肝脏,油红O染色检测肝组织脂肪病变程度,RT-PCR检测肝组织低密度脂蛋白受体(LDLR)、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR-α)、胰岛素诱导基因1(Insig1)、固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SCAP)、固醇调节元件结合蛋白-1(SREBP-1)mRNA表达水平。结果LREE和易善复能抑制高脂饮食+酒精诱导的小鼠体质量增加[(38.6±2.9)g、(39.4±2.3)g比(42.3±1.9)g,P<0.05],实验期末,乌药组及易善复组小鼠血清ALT、AST活性显著降低[ALT:(37.5±8.2)U/L、(41.4±17.5)U/L比(64.3±14.7)U/L,P<0.05;AST:(67.3±23.0)U/L、(67.4±23.9)U/L比(96.3±11.5)U/L,P<0.01],肝组织脂质沉积改善;RT-PCR结果显示,LREE与易善复能上调肝组织LDLR[(0.6±0.1)、(0.8±0.1)比(0.3±0.1),P<0.01]和PPAR-α[(0.8±0.1)、(0.7±0.1)比(0.5±0.1),P<0.05或P<0.01]mRNA表达水平,下调Insig1[(1.6±0.1)、(1.6±0.1)比(3.1±0.4),P<0.01]、SCAP[(1.8±0.2)、(1.3±0.1)比(2.3±0.1),P<0.05]和SREBP-1[(1.5±0.3)、(1.2±0.1)比(2.5±0.1),P<0.01]mRNA表达水平。结论LREE对高脂联合酒精诱导的酒精性脂肪肝具有良好的保护作用,其机制可能与抑制Insig1-SCAP-SERBP1通路活化有关。

水飞蓟宾对高脂饮食小鼠胰岛β细胞的保护作用

目的:研究水飞蓟宾对高脂饮食喂养的C57BL/6J小鼠胰岛β细胞的保护作用及其可能的机制。方法:18只3周龄雄性C57BL/6J小鼠分为普通饮食组(n=6)、高脂饮食组(n=6)及水飞蓟宾干预高脂饮食组(n=6),干预10周后观察各组小鼠空腹血糖、胰岛素、血脂、谷丙转氨酶、肌酐、尿素氮变化及胰岛β细胞的脂质含量、抗氧化水平及凋亡情况,并检测胰腺组织胰岛素诱导基因-1(insulin-induced gene-1,Insig-1)、固醇调节原件结合蛋白-1c(sterol regulatory element binding protein-1c,SREBP-1c)和脂肪酸合成酶(fatty acid synthetase,FAS)的m RNA,以及Insig-1和SREBP-1c蛋白的表达水平。结果:与高脂饮食组相比,水飞蓟宾干预高脂饮食组小鼠胰岛分泌功能明显改善,血糖水平降低(P<0.05),胰岛组织脂质含量、氧化应激水平及凋亡水平均降低(均P<0.05);水飞蓟宾能促进胰岛组织Insig-1的表达,抑制SREBP-1c和FAS的表达(均P<0.05)。三组间谷丙转氨酶、肌酐、尿素氮功能差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:水飞蓟宾对高脂饮食小鼠的胰岛β细胞具有保护作用,其机制可能与调节Insig-1/SREBP-1c途径及增加抗氧化活性有关,且长期口服水飞蓟宾安全性良好。

卵巢癌患者组织标本HOXA5 IGF-I STIP1表达与疾病预后的相关性

目的探讨卵巢癌患者组织标本同源异型盒基因5、胰岛素样生长因子-I、磷酸化应激诱导蛋白1的表达及其与预后的相关性。方法对卵巢癌组(80例卵巢癌患者)、良性组(35例卵巢良性肿瘤患者)、正常组(35例正常卵巢组织患者)的卵巢组织标本进行细胞染色,采用免疫组化链菌素亲生物素-过氧化酶连接法检测卵巢组织标本同源异型盒基因5、胰岛素样生长因子-I、磷酸化应激诱导蛋白1表达,并根据染色结果评定阳性表达状况。比较3组间以及不同病理特征、预后卵巢癌患者上述指标阳性表达率,并分析其阳性表达率与临床特征、不良预后的相关性。结果卵巢癌组同源异型盒基因5阳性表达率显著低于良性组、正常组(P<0.01),胰岛素样生长因子-I、磷酸化应激诱导蛋白1阳性表达率显著高于良性组、正常组(P<0.01)。相关分析显示,卵巢癌患者同源异型盒基因5阳性表达率与临床分期、淋巴结转移、不良预后呈显著负相关(P<0.05或0.01),与组织分化程度呈显著正相关(P<0.05);胰岛素样生长因子-I、磷酸化应激诱导蛋白1阳性表达率与卵巢癌患者临床分期、淋巴结转移、不良预后呈显著正相关(P<0.05或0.01),与组织分化程度呈显著负相关(P<0.05或0.01)。结论卵巢癌患者组织标本同源异型盒基因5、胰岛素样生长因子-I、磷酸化应激诱导蛋白1呈异常表达,三者均参与病情进展、淋巴结转移,且与不良预后密切相关。

使用phiC31整合酶构建奶牛INSIG1基因乳腺恒定表达细胞系

为了使用phiC31整合酶建立奶牛胰岛素诱导基因1(INSIG1)的稳定表达乳腺细胞系,首先从奶牛乳腺组织中克隆得到INSIG1基因的编码区,然后将克隆片段与phiC31载体进行BamHⅠ和KpnⅠ双酶切构建INSIG1-C31真核表达质粒;将其与phiC31整合酶质粒共同转染到小鼠乳腺细胞中,采用嘌呤霉素筛选细胞,荧光显微镜观察细胞绿色荧光蛋白的表达,PCR鉴定细胞基因组中INSIG1基因的表达,荧光定量PCR检测细胞中INSIG1基因的表达。结果表明,试验成功构建INSIG1-C31真核载体,与phiC31整合酶共转染小鼠乳腺细胞,经过8mg/L嘌呤霉素筛选后获得完全表达绿色荧光蛋白的乳腺细胞系;对细胞系鉴定表明INSIG1基因已经整合到细胞基因组中,与对照组相比,INSIG1基因的mRNA表达丰度增加了597.98倍(P<0.001)。本研究获得了稳定表达奶牛INSIG1基因的乳腺细胞系,为深入研究INSIG1基因功能打下基础。

青少年肥胖及代谢异常与INSIG2基因多态性

目的研究胰岛素诱导基因2（INSIG2）rs7566605多态性与我国儿童青少年肥胖和代谢异常的相关性。方法在北京市海淀区选择1 103名7～18岁儿童青少年进行身体和代谢指标测量,并进行rs7566605多态性的基因型鉴定。结果1 103名儿童青少年rs7566605的突变率（G〉C）为35.56%～37.06%,与欧美人群接近。体重正常、超重和肥胖组基因型及等位基因频率差异无统计学意义（P〉0.05）。分层分析发现,超重组CC基因型携带者的皮褶厚度和体脂百分比高于GG/GC基因型者（P〈0.05）;肥胖组CC基因型携带者的甘油三酯（TG）平均比GG/GC基因型者高0.21 mmol/L（P=0.014）。结论ISNIG2基因rs7566605多态性与我国儿童超重或肥胖的发生无相关性,但是该多态性对超重和肥胖儿童青少年体脂含量及TG蓄积可能有一定影响。