投喂时间影响大菱鲆幼鱼的生长及类胰岛素样生长因子-Ⅰ基因的表达

本试验旨在研究投喂时间对大菱鲆幼鱼生长和类胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)基因表达的影响。试验设3个组,分别于早上(06:00)、中午(12:00)、傍晚(18:00)3个不同的时间点投喂大菱鲆幼鱼[初始平均体重为(8.95±0.13)g],每个组3个重复,每个重复25尾。养殖试验周期为45 d。结果表明:06:00投喂组大菱鲆幼鱼的增重率和特定生长率显著高于其他2组(P<0.05),3个投喂组间大菱鲆幼鱼的摄食率无显著差异(P>0.05),但06:00投喂组与12:00投喂组的饲料效率显著高于18:00投喂组(P<0.05);06:00投喂组大菱鲆幼鱼肝脏中IG F-ⅠmRNA相对表达量显著高于12:00和18:00投喂组(P<0.05),而投喂时间对大菱鲆幼鱼脑中IGF-ⅠmRNA相对表达量无显著影响(P>0.05)。综上,建议体重8 g左右的大菱鲆幼鱼的投喂时间为06:00。

不同蛋白质源饲料中添加α-酮戊二酸对杂交鲟幼鱼肝脏谷氨酰胺含量、抗氧化能力及生长激素、胰岛素样生长因子-Ⅰ基因表达的影响

本试验旨在研究不同蛋白质源饲料中添加α-酮戊二酸对杂交鲟(Acipenser schrenckii♀×Acipenser baeri)幼鱼肝脏谷氨酰胺(Gln)含量、抗氧化能力及生长激素(GH)、胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)基因表达的影响。分别以大豆浓缩蛋白和大豆浓缩蛋白+鱼粉为蛋白质源,设2个α-酮戊二酸(AKG)添加量(0和1%),配制4种试验饲料。选取平均体重为(7.65±0.04)g的杂交鲟幼鱼500尾,随机分为4组,每组5个重复,每个重复25尾,养殖周期为8周。结果表明:饲料中添加1%AKG显著提高肝脏Gln含量和谷氨酰氨合成酶(GS)活性(P<0.05),对肝脏碱性磷酸酶(ALP)活性无显著影响(P>0.05)。蛋白质源对肝脏Gln含量、GS活性和ALP活性无显著影响(P>0.05),且蛋白质源和AKG添加量对肝脏Gln含量、GS活性和ALP活性无显著交互作用(P>0.05)。饲料中添加1%AKG显著降低肝脏丙二醛(MDA)含量,显著提高肝脏还原型谷胱甘肽(GSH)含量(P<0.05)。与大豆浓缩蛋白+鱼粉作为蛋白质源相比,大豆浓缩蛋白作为蛋白质源显著提高肝脏GSH含量(P<0.05)。蛋白质源和AKG添加量对肝脏超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性均无显著影响(P>0.05),且蛋白质源和AKG添加量对肝脏各抗氧化指标无显著交互作用(P>0.05)。饲料中添加1%AKG显著提高肝脏GH、IGF-Ⅰ基因的相对表达量(P<0.05)。与大豆浓缩蛋白+鱼粉作为蛋白质源相比,大豆浓缩蛋白作为蛋白质源显著提高肝脏IGF-Ⅰ和GH基因的相对表达量(P<0.05)。蛋白质源和AKG添加量对肝脏GH、IGF-Ⅰ基因的相对表达量无显著交互作用(P>0.05)。综上所述,杂交鲟幼鱼饲料中添加1%AKG可以通过提高肝脏中GS的活性进而提高Gln的含量,通过提高肝脏中GSH的含量进而降低MDA的含量,并可提高肝脏中生长相关基因GH、IGF-Ⅰ的表达。

自发性高血压大鼠胸腺中胰岛素-I基因的表达降低

目的为了研究自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）胸腺功能异常的分子机制，我们用ｃＤＮＡ代表性差异分析ｃＤＮＡｒｅｐｒｅｓｅｎ－ｔａｔｉｏｎａｌｄｉｆｅｒｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓ（ＲＤＡ）技术比较了ＳＨＲ与其正常血压对照（ＷＫＹ）大鼠二者胸腺基因表达的差异。方法用ｃＤＮＡ代表性差异分析技术比较了ＳＨＲ和ＷＫＹ大鼠胸腺基因表达的差异。差异表达的ｃＤＮＡ接入Ｔ—载体进一步进行差异筛选。挑选阳性克隆进行测序并用ＢＬＡＳＴ软件进行同源性分析。最后用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析验证差异筛选的结果。结果挑选了４个差异筛选的阳性克隆进行测序，序列同源性分析表明它们均与胰岛素－Ｉ基因序列高度一致。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果证实了胰岛素－Ｉ基因在ＳＨＲ胸腺中表达降低。结论运用ｃＤＮＡ代表性差异分析技术，结合差异筛选方法，本文观察到ＳＨＲ胸腺中胰岛素－Ｉ基因表达降低，提示局部微环境中的胰岛素缺乏在ＳＨＲ胸腺细胞的发育异常中可能起一定的作用。

翘嘴鲌胰岛素样生长因子-Ⅰ的克隆及序列分析

为探讨胰岛素样生长因子-Ⅰ(Insulin like growth factor-Ⅰ,IGF-Ⅰ)对于翘嘴鲌(Culter alburnus)生长性状的影响,对其DNA序列进行了克隆。翘嘴鲌IGF-Ⅰ全长14567 bp,由5个外显子和4个内含子组成。其5个外显子长度分别为298、160、182、36和1360 bp。推测的阅读框为486 bp,编码由161个氨基酸组成的IGF-Ⅰ前体蛋白。前体肽由信号肽、成熟肽、E肽三部分组成,其中信号肽44个氨基酸,成熟肽70个氨基酸,E肽47个氨基酸。成熟肽由B、C、A、D四个区域组成,其中B结构域和A结构域的保守性最高,在这2个区域包含由6个半胱氨酸残基形成的3个二硫键。翘嘴鲌B区域还包含保守的IGF-Ⅰ受体识别序列(Phe B23-Tyr B24-Phe B25)。E肽的长度表明翘嘴鲌IGF-Ⅰ属Ea-2型。同源性分析表明翘嘴鲌与鲤科鱼类的IGF-Ⅰ编码氨基酸同源性较高,为94%—100%,但在聚类分析中翘嘴鲌并不是首先和鲌亚科的鱼类聚集在一起。Real-time qPCR组织特异性表达结果显示IGF-ⅠmRNA在肝脏组织中的表达量最高,脾、心脏、精巢、脑次之,肾、鳃、胃和卵巢中表达量较低。翘嘴鲌IGF-Ⅰ基因4个内含子长度分别为1170、9364、251和1746 bp。相对外显子来说,种间内含子变异较大,其中第三内含子变异最大。翘嘴鲌IGF-Ⅰ基因中包含6个微卫星,(GATG)5AATAT(ATAG)11位于第一内含子中,(CT)8、(TTA)5、(AC)13、(TG)12和(ATT)5位于第二内含子中。其中4个微卫星位点具有多态性,将它们在120尾同塘养殖的翘嘴鲌中进行基因型与生长性状的关联性分析,均未达到显著水平(P>0.05)。结果为进一步研究该基因的表达、功能及其转录调控特征奠定了分子基础。

边鸡IGF-ⅠR基因AluⅠ位点多态性及其对生长性状和繁殖性状的遗传效应分析

为了寻找与边鸡生长性状和繁殖性状相关的遗传标记,本试验采用PCR-RFLP技术检测边鸡类胰岛素生长因子Ⅰ受体(insulin-like growth factorⅠreceptor,IGF-ⅠR)基因AluⅠ位点的多态性,并分析该多态位点对边鸡生长性状和繁殖性状的遗传效应。结果显示,边鸡IGF-ⅠR基因AluⅠ位点存在多态性,在外显子2的376bp处有1个G→A突变,产生了GG、GA和AA 3种基因型,基因型频率分别为0.687、0.296和0.017,GG为优势基因型;G等位基因频率为0.835,为优势等位基因。卡方适合性检验结果表明,该基因座位在边鸡群体中处于哈代-温伯格平衡状态(P>0.05)。相关分析结果表明,在8、14、16和18周龄时,GG基因型个体的体重显著高于GA基因型(P<0.05),GG基因型个体的开产体重极显著高于GA基因型个体(P<0.01),但并不能说明该位点可以作为影响边鸡繁殖性状的遗传标记。IGF-ⅠR基因外显子2的AluⅠ位点(G→A)可能是影响边鸡生长性状的一个遗传标记。