胰岛素B链肽干预对NOD鼠T辅助细胞平衡及胰岛细胞Bcl-2/Bax表达的影响

目的 探讨新生期胰岛素B链肽干预对NOD鼠Ⅰ型糖尿病的预防作用及其机制。方法 采用动物模型NOD鼠 ,新生期胰岛素B链肽干预后检测血糖、尿糖及糖尿病发病率 ;HE染色观察胰岛炎 ;用RT PCR法检测胰腺干扰素γ (IFN γ)、肿瘤坏死因子α(TNF α)、白细胞介素 10 (IL 10 ) ;免疫组化检测胰腺胰岛细胞Bcl 2和Bax表达。结果 新生期B链肽干预组糖尿病发病率为 2 5.0 % ,明显低于对照组 (72 .2 % ,P <0 .0 1) ,且胰岛炎严重程度也明显减轻 (P <0 .0 1)。胰腺TNF α、IFN γmRNA的表达较对照组显著降低 (P <0 .0 1) ;IL 10mRNA的表达增强 (P <0 .0 1)。胰腺胰岛Bcl 2表达明显增强 ,而Bax表达较对照组明显减弱。结论 新生期胰岛素B链肽干预可以预防NOD鼠糖尿病的发生 ,其机制可能与纠正TH1型细胞因子与TH2型细胞因子比例失衡 ,进而上调胰岛 β细胞Bcl

一种新的B链C端去四肽胰岛素的研制方法

报道了将单体胰岛素前体(MIP)经胰蛋白酶和羧肽酶B两步连续酶切获得B链C端去四肽胰岛素(DTI)的方法。MIP由甲醇酵母表达,最高发酵表达量达到150mg/L。发酵液中MIP通过疏水层析,分子筛初步纯化后直接进行酶切,在胰蛋白酶酶切3h后加入抑制剂paminobenzamidine处理15min,然后直接加入羧肽酶B酶切6h,再通过反相柱纯化即可得到纯品DTI,从分子筛到最后DTI,总纯化得率达到77%。按中国药典小白鼠惊厥法测定得DTI的生物活力为22IU/mg,是胰岛素的80%,在Superdex G-75分子筛上测定DTI的解离聚合曲线,证明其是单体。

霍乱毒素B亚单位与胰岛素B链结构类似多肽融合蛋白的制备

为了在大肠杆菌中表达霍乱毒素B亚单位(Cholera toxin B subunit,CTB)与胰岛素B链(9-23)肽段结构类似多肽(Ins B(9-23))的融合蛋白,使用基因工程方法构建了CTB与Ins B(9-23)的融合基因CTB-Ins B-X若干,并将融合基因克隆到大肠杆菌表达载体pET28a(+)中,获得的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)。重组菌株经乳糖诱导后,其表达产物经过12%SDS-PAGE分析表明该菌株可以包含体形式表达融合蛋白,并制备得到纯度较高的重组蛋白。该重组蛋白的包含体经过变性、复性后,可以在体外自组装成五聚体结构。GM1-ELISA分析结果表明,重组蛋白在体外可以与神经节苷脂GM1(monosialoganglioside)特异性结合,表明该融合蛋白保持了CTB形成五聚体的生物活性。