鸡类胰岛素生长因子-Ⅱ基因单核苷酸多态与生长、屠体性状相关性的研究

以鸡类胰岛素生长因子 -Ⅱ (IGF -Ⅱ )基因作为控制鸡生长、屠体性状主基因的候选基因 ,以明星肉鸡和丝毛乌骨鸡杂交产生的F2 代鸡群为实验材料。通过PCR -RFLP方法对IGF -Ⅱ基因进行多态性检测。在该基因外显子 2中发现一处碱基突变 ,可由内切酶Aci-Ⅰ酶切证实 ,但未导致氨基酸改变。对F2 鸡群个体进行了基因型鉴定 ,结果经方差分析显示 :该基因对一些生长、屠体性状有显著性影响 (如胸角宽、腺胃重、半净膛重等 )。表明该基因可能调控鸡生长、屠体性状的表达 ,或与控制生长、屠体性状的主基因连锁。

骨髓间充质干细胞对机械张应力刺激的反应及转化生长因子-β和胰岛素样生长因子-Ⅱ的基因表达

目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)对机械张应力刺激的反应及力学刺激下转化生长因子-β(TGF-β)和胰岛素样生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)基因表达的规律。方法分离培养大鼠骨髓MSCs,应用四点弯曲加力系统对细胞施加单一周期的机械张应力刺激(2000με,40min)。检测MSCs细胞增殖及碱性磷酸酶(ALP)活性,并采用实时荧光定量RT-PCR检测TGF-β和IGF-Ⅱ的基因表达。结果机械张应力刺激下,MSCs的增殖活力、ALP活性以及TGF-β和IGF-Ⅱ的基因表达均显著增高。TGF-β和IGF-Ⅱ的mRNA水平在加力后瞬时达最高水平;与对照细胞比较,分别增加了51.44和8.92倍。除加力后6h有少许增高外,TGF-β和IGF-Ⅱ的表达随时间逐步下降,并于加力后12h恢复到对照组水平。结论机械张应力刺激可促进MSCs增殖,提高其ALP活性,使TGF-β和IGF-Ⅱ基因表达呈时间依赖性上调,并最终诱导MSCs向成骨细胞分化。机械力学刺激是MSCs骨向分化的关键驱动因子,对牵张成骨骨痂形成具有重要的作用。

转人类胰岛素样生长因子-Ⅰ基因成肌细胞对骨骼肌急性钝挫伤后Ⅱb型肌球蛋白重链及波形蛋白mRNA表达的影响

目的:观察转人类胰岛素样生长因子-Ⅰ(HumanInsulin -likeGrowthFactor-Ⅰ,hIGF -Ⅰ)基因成肌细胞回输小鼠骨骼肌钝挫伤局部后,对小鼠骨骼肌愈合过程中Ⅱb型肌球蛋白重链(MyosinHeavyChain -Ⅱb ,MHC -Ⅱb)及波形蛋白(Vimentin)mRNA表达的影响。方法:将90只7～12周雄性C3H小鼠右下肢腓肠肌中段内侧实施急性钝挫伤后,随机分为自然愈合组、单纯成肌细胞注射组和转基因成肌细胞注射组。挫伤后第3天,对单纯成肌细胞注射组、转基因成肌细胞注射组损伤局部分别注射等量单纯成肌细胞和转基因成肌细胞,并于损伤后第1、5、10、2 0、30天取材。检测不同时间点MHC -Ⅱb和VimentinmRNA表达水平,观察比较各组骨骼肌修复情况。结果:(1)在急性骨骼肌钝挫伤修复期,3组小鼠骨骼肌MHC -ⅡbmRNA均明显升高,第2 0天达到峰值。转基因成肌细胞注射组MHC -ⅡbmRNA表达水平最高,其次为单纯成肌细胞注射组。(2 )急性骨骼肌钝挫伤修复过程中,转基因成肌细胞注射组VimentinmRNA的表达水平始终在3组中表达最低。结论:急性骨骼肌钝挫伤修复过程中,注射转基因成肌细胞能提高损伤后MHC -IIbmR NA表达水平,促进肌纤维的增生,加速骨骼肌愈合进程。同时,损伤局部注射转hIGF -Ⅰ基因的成肌细胞后,使得损伤局部VimentinmRNA表达低于另两组。

鳜胰岛素样生长因子-Ⅱ cDNA基因的克隆与表达特征

为全面获得鳜Siniperca chuatsi GH-IGFs生长发育轴的调控因子特征,采用RT-PCR、cDNA末端快速扩增(RACE)技术成功克隆了肝组织胰岛素样生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)cDNA序列。结果表明:鳜IGF-ⅡcDNA全长为1 643 bp,包括5'端非翻译区103 bp、3'端非翻译区892 bp和开放阅读框648 bp,开放阅读框编码215个氨基酸;鳜IGF-Ⅱ前肽由信号肽、成熟肽和E肽3部分组成,其中信号肽为47个氨基酸,成熟肽为70个氨基酸,E肽为98个氨基酸;鳜IGF-Ⅱ氨基酸序列与其他脊椎动物的相似度为81%～98%,与鳜IGF-Ⅰ的相似度为62.5%。运用实时荧光定量PCR技术检测了鳜成鱼不同组织以及孵化后0～22 d仔稚鱼中IGF-ⅡmRNA的表达情况,结果表明:IGF-ⅡmRNA在鳜脑中表达量最高,在肌肉、心脏、胃、鳃、肾脏中表达量次之,在脾、前肠、后肠、性腺、肝脏中表达量较低;在孵化后早期发育阶段均检测到有IGF-ⅡmRNA表达,孵化当天(0 d)表达量最高,之后表达量有所降低。本研究结果可为鳜IGF-Ⅱ对生长发育的调控作用研究提供科学依据。

胃癌中转化生长因子-βRⅡ、胰岛素样生长因子-ⅡR、Bax基因突变与微卫星不稳定性相关性研究

目的:检测胃癌组织中转化生长因子-βⅡ型受体(TGF-βRⅡ)、胰岛素样生长因子Ⅱ型受体(IGF-ⅡR)和Bax基因突变与微卫星不稳定性(MSI)发生情况,探讨其相关性以及MSI在胃癌发生发展中可能的作用机制。方法:胃镜下取36例胃癌标本,酚与氯仿法抽提基因组DNA,银染PCR-SSCP方法同时检测目的位点。结果:胃癌组织中TGF-BRⅡ、IGF-ⅡR和Bax基因发生突变分别有7例、6例和6例,MSI发生率达58.3％,3种基因突变均见于MSI阳性的胃癌,尤其是MSI-H型胃癌。结论:MSI可通过引起靶基因突变,特别是部分抑癌基因突变,促进了部分胃癌的发生发展。

人胰岛素样生长因子-Ⅱ基因cDNA克隆与序列分析

本研究通过RT-PCR技术从人胎盘组织中扩增出长为841bp的胰岛素样生长因 子-ⅡcDNA,PCR产物经凝胶回收纯化后,克隆在PGEM-T载体的T位点。测序结果和序列分 析表明,本人已成功地扩增、克隆了人胰岛素样生长因子-Ⅱ基因cDNA序列。

胰岛素样生长因子-1基因多态性与猪部分生产性能的关系

采用PCR RFLP对南昌白猪 (92头 )和大约克夏猪 (170头 )的IGF 1基因的 179bp片段进行了扩增 ,并用HhaI酶切 ,产生两个等位基因A(15 1+2 8bp)和等位基因B(116 +35 +2 8bp)。分析了不同基因型对个体初生重、2月龄重、4月龄重、6月龄重、料重比、背膘厚和瘦肉率等生产性能的影响。结果表明 ,在南昌白猪中 ,AA型猪比AB型猪初生重大 ,差异显著 (P <0 0 5 ) ;在大约克夏猪中 ,BB型猪比AB型猪的 6月龄体重大 ,差异显著 (P <0 0 5 ) ;AA型猪比AB型和BB型猪瘦肉率低 ,差异极差著 (P <0 0 1)。

类胰岛素生长因子Ⅱ(IGF2)基因多态性与鸡体脂性状的相关研究

以肉鸡和3个地方品种(北京油鸡,石岐杂,白耳鸡)以及海兰蛋鸡为试验材料,用1对引物对类胰岛素生长因子Ⅱ(IGF2)基因的外显子2进行SNPs检测,探讨IGF2基因作为影响鸡脂肪性状候选基因的可能性。利用测序和单链构象多态(SSCP)的方法进行SNPs检测和基因型的分析。X2检验表明,139处点突变的基因型在各品种间差异极显著(P<0.01)。3种基因型与肉鸡屠体性状的最小二乘分析结果表明,BB基因型个体的腹脂重和腹脂率显著低于AB基因型的个体。初步推断IGF2基因可能是影响鸡脂肪性状的主效基因或与主效基因连锁,推测可以利用该位点对鸡的脂肪性状进行标记辅助选择。

鸡胰岛素样生长因子-1基因的遗传多态性与其体重的关系

对宁都三黄鸡、万载康乐黄鸡两个鸡种共295个样本,采用PCR RFLP技术对胰岛素样生长因子—1(cIGF 1)基因的5'端调控区进行遗传变异研究,发现该调控区的扩增产物经PstⅠ酶切后出现3种基因型(AA、AB、BB)。结果表明:性别对宁都三黄鸡这3种基因型的分布呈现显著差异(P<0 05)。分析这3种基因型与其体重的关系发现,这3种基因型对初生重、30日龄体重、60日龄体重、90日龄体重及120日龄体重影响差异均不显著(P>0 05),但体现出AA型有较高体重的趋势,公母表现出一致的规律。在万载康乐黄鸡中,均呈现出杂合优势,在8周龄及18周龄时差异不显著(P>0 05),而在12周龄表现为差异显著(P<0 05)。宁都三黄鸡公母基因型分布均符合哈代 温格伯定律,而万载康乐黄鸡基因型分布不符合哈代 温格伯定律。

血清孕酮、胰岛素生长因子-Ⅱ在预测妊娠早期不良结局中的作用

目的:探讨血清孕酮(progesterone,P)、胰岛素生长因子-Ⅱ(insulin growth factorⅡ)在预测妊娠早期不良结局中的作用。方法:采用化学发光免疫分析及放射免疫法分别检测42例健康早孕妇女(A组)和85例具有先兆流产症状给予保胎治疗的早孕妇女P、IGF-Ⅱ水平,其中保胎成功45例(B组)、发展为稽留流产40例(C组)。比较各组数值的相关性。应用ROC曲线对P、IGF-Ⅱ进行分析评价。结果:(1)A、B、C 3组血清孕酮的值分别为(30.36±2.96)、(23.88±2.26)、(11.43±2.46)ng/m L,血清IGF-Ⅱ的值分别为:(139.29±16.44)、(123.93±16.14)、(107.94±12.87)μg/L,3组P、IGF-Ⅱ值均具有差异性(F=571.69和43.05,均P<0.05);(2)A、C两组血清中P和IGF-Ⅱ存在正相关(r=0.732、0.942,均P<0.05),B组两者不具有相关性(r=0.199,P=0.191,P>0.05);(3)P、IGF-Ⅱ判断活胎和胚胎停止发育最佳诊断点分别为:13.42 ng/m L,121.26μg/L。结论:血清P联合IGF-Ⅱ测定在预测胚胎及胎儿早期发育中有一定的价值。

团头鲂胰岛素样生长因子-Ⅰ基因克隆与分析

胰岛素样生长因子 Ⅰ (IGF Ⅰ )是一单链多肽。在脊椎动物中 ,IGF Ⅰ通过介导生长激素达到促进生长的作用。为研究鲤科鱼类IGF Ⅰ的结构功能及在水产养殖中的潜在应用前景 ,采用逆转录 -聚合酶链式反应 (RT PCR)方法 ,从团头鲂 (Megalobramaamblycephala)肝脏的总RNA中扩增出IGF ⅠcDNA。测定了该基因序列 ,推导其编码的蛋白质序列。克隆的cDNA序列编码包括信号肽和B、C、A、D、E 6个区域的 16 1个氨基酸。E区域分析结果表明所克隆的团头鲂IGF Ⅰ序列属于IGF ⅠEa - 2亚型。

人胰岛素样生长因子-1基因的克隆、表达和活性检测

目的 克隆人胰岛素样生长因子Ⅰ型 (hIGF 1) ,构建真核表达载体并进行表达及活性检测 ,为IGF 1基因治疗糖尿病奠定基础。 方法 提取胎儿肝脏总RNA ,RT PCR法扩增IGF 1cDNA片段 ,重组于pUCM T载体 ,测序正确后构建表达载体 ,转染猴肾成纤维细胞系COS 7,用原位杂交和免疫组织化学检测表达 ,收集培养上清以胰岛素刺激释放实验进行活性测定。 结果 扩增得到 710bp带有Kozak序列的IGF 1cDNA片段 ;成功构建了真核表达载体pCI neo hIGF 1;IGF 1在COS 7细胞得到了表达 ,并具有刺激胰岛素分泌的活性。 结论 新构建的载体pCI neo hIGF 1能在COS 7细胞中表达、分泌 ,且所分泌的IGF 1具有生物活性。

胎儿宫内生长受限与胰岛素样生长因子-Ⅱ关系的研究

为探讨胎儿宫内生长受限 (IUGR)与胰岛素样生长因子 - (IGF- )的关系 ,采用放射免疫法检测正常足月妊娠 2 8例 (正常组 )和足月妊娠 IUGR2 0例 (IUGR组 )的母血、脐血和羊水中 IGF- 水平。结果 :IUGR组脐血和羊水中 IGF- 显著下降 (P<0 .0 1 )。 IUGR组母血与正常组比较无显著差异 (P>0 .0 5)。 IGF- 是促进胎儿生长发育的一种细胞因子 ,检测羊水中 IGF- 可作为

人胰岛素样生长因子-1基因的克隆及其表达

目的获得大量高纯度、具有生物学活性的人胰岛素样生长因子 1(hIGF 1) ,构建hIGF 1原核表达载体 ,并进行表达与纯化。方法以pUCIGF质粒为模板 ,PCR扩增了hIGF 1基因。经适当酶切后 ,构建表达载体pRSET IGF ,转入大肠杆菌BL2 1(DE3)进行表达 ,并经阴离子交换色谱、疏水色谱和凝胶过滤纯化。结果带有重组质粒pRSET IGF的大肠杆菌经IPTG诱导后 ,以可溶性形式表达 7.8kD大小的蛋白 ,其表达量占菌体总蛋白量的10 %～ 2 0 % ,纯化后目的蛋白纯度达 95 %以上 ,Western印迹表明重组蛋白具有hIGF 1抗原活性。结论构建了pRSET IGF重组质粒 ,并成功地在大肠杆菌中获得可溶性表达 。

子宫肌瘤患者外周血胰岛素样生长因子-Ⅰ和Ⅱ水平的变化及与子宫肌瘤组织雌激素受体的关系

目的探讨子宫肌瘤患者外周血中胰岛素样生长因子(IGF)-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平的变化及与子宫肌瘤组织雌激素受体(ER)的关系。方法选取收治行子宫切除术的患者110例为研究对象,其中术后经病理检查证实为子宫肌瘤的55例患者为观察组,而病理检查证实为正常平滑肌组织的55例患者为对照组,分别检测两组患者外周血中IGF-Ⅰ及IGF-Ⅱ含量,观察两组患者ER细胞阴阳性,并进行对比评价。对观察组患者子宫肌瘤局部IGF-Ⅰ浓度与其ER表达量进行相关性分析。结果观察组患者术前外周血IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平均明显高于对照组,在行子宫切除术后,IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平逐渐降低;观察组患者的子宫肌瘤组织ER阳性率为76.36%,相比对照组的20.00%有明显增高(x^2=34.99,P<0.05);观察组患者中ER阴性、弱阳性及强阳性者,其外周血IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平在7 d内均逐渐减小,而同一天的数据相比,外周血IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平则是随着ER的阳性程度增加而增加,其增加趋势随着时间变化也逐渐减小,以上差异均有统计学意义(均P<0.001)。观察组患者子宫肌瘤组织局部IGF-Ⅰ浓度与ER表达呈正相关(P<0.05)。结论子宫肌瘤患者外周血中IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平相比健康人有明显升高,IGF-Ⅰ水平与ER表达呈正相关,为从分子水平研究子宫肌瘤药物治疗开辟新途径。

人胰岛素样生长因子Ⅱ基因P1、P3启动子克隆及意义

目的 :人胰岛素样生长因子Ⅱ (IGF -Ⅱ )基因P1、P3启动子的克隆。方法 :根据GenBank数据库提供的IGF -Ⅱ基因DNA全序列及有关文献 ,应用巢式PCR技术从L - 0 2正常人胎肝细胞系中扩增分离出P1、P3启动子片段 ,并采用TOPOTACloningkit将PCR产物克隆入pCR2 .1-TOPOT载体。结果 :经琼脂糖凝胶电泳及直接测序鉴定 ,克隆的IGF -Ⅱ基因P1、P3启动子片段碱基序列与GenBank数据库一致。结论 :成功克隆了IGF -II基因P1、P3启动子。

新生儿缺氧缺血性脑病血清脑脊液中胰岛素样生长因子-Ⅱ水平的变化

目的很多研究都证实低水平的胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)与缺氧缺血性脑损伤的发生有关,认为IGF-Ⅰ具有重要的神经保护作用。胰岛素样生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)在结构及功能上与IGF-Ⅰ具有同源性,但对其在脑损伤中的作用尚不明了。该研究通过观察新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)血清、脑脊液中IGF-Ⅱ水平的变化,探讨IGF-Ⅱ在新生儿HIE发病机制及预后中的作用。方法用放射免疫法(RIA)检测41例HIE新生儿在急性期和恢复期血清、脑脊液及10例正常足月新生儿(对照组)血清中IGF-Ⅱ的水平变化。结果在急性期,轻、中度HIE组血清IGF-Ⅱ分别为203.28±40.09ng/mL,192.33±39.66ng/mL,较对照组的229.38±43.39ng/mL无显著性降低(P>0.05);重度HIE组血清IGF-Ⅱ水平为116.72±39.50ng/mL较轻、中度HIE组及对照组明显降低(P<0.01)。在恢复期,轻、中度HIE组及重度HIE症状恢复组血清中IGF-Ⅱ分别为285.53±49.44ng/mL;278.69±51.34ng/mL;254.08±48.50ng/mL,脑脊液中分别为81.58±9.77ng/mL;78.48±10.44ng/mL;69.42±10.20ng/mL,较急性期时的27.23±7.82ng/mL,23.43±7.79ng/mL,15.05±7.03ng/mL水平明显增高(P<0.01);重度HIE症状未恢复组血清、脑脊液IGF-Ⅱ分别为144.64±46.30ng/mL;25.05±784ng/mL,虽较急性期增高,但差异无显著性意义(P>0.05),且明显低于其他各组的水平(P<0.01)。HIE组血清与脑脊液间的IGF-Ⅱ水平存在明显的正相关关系(r=0.69,P<0.01)。结论血和脑脊液中IGF-Ⅱ水平的改变与新生儿HIE的发生及转归有关。

养精种玉汤对原因不明不孕症患者子宫内膜胰岛素样生长因子-Ⅱ及其受体表达的影响

目的:探讨养精种玉汤对原因不明不孕症患者黄体中期子宫内膜胰岛素样生长因子-Ⅱ（IGF-Ⅱ）及其受体表达的影响及与子宫内膜接受性的关系。方法:采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术,对22例原因不明不孕症患者服用养精种玉汤前后黄体中期子宫内膜行IGF-Ⅱ及IGF-Ⅱ型受体mRNA检测。结果:治疗前黄体中期子宫内膜IGF-ⅡmRNA表达水平（灰度比值）为0.794±0.453,显著低于治疗后同期水平（1.202±0.551,P<0.01）;治疗前IGF-Ⅱ型受体mRNA表达水平（灰度比值）为0.725±0.354,显著低于治疗后的表达水平（1.045±0.581,P<0.05）。相关分析显示治疗前后IGF-ⅡmRNA与IGF-Ⅱ型受体mRNA表达呈正相关。结论:养精种玉汤能促进黄体中期子宫内膜IGF-Ⅱ及其受体的基因表达,促进子宫内膜分化,提高子宫内膜对胚泡种植的接受性。

胰岛素样生长因子-1基因表达对糖尿病大鼠血糖的影响

目的:探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因表达对糖尿病(DM)大鼠血糖的影响。方法:将含人IGF-1基因的重组转运质粒pCMV/IGF-1 DNA每鼠400μg肌内注射于DM大鼠模型(T组,n=7)体内,对照组(C组,n=7)给予同等剂量pcMV空载质粒DNA,同时设立正常对照组(N组,n=7)和DM对照组(DM组,n=7)。观察大鼠血糖和血IGF-1浓度(ELISA法),用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法比较治疗前后大鼠肝、肾、骨骼肌等组织IGF-1 mRNA表达量变化。结果:ICF-1基因治疗后,T组血糖较治疗前明显下降,由(28.71±1.79)mmol/L至(17.02±1.69)mmol/L,同时血IGF-1较基础水平明显升高,由(109.34±10.90)ng/ml至(135.61±6.15)ng/ml;T组大鼠在接受治疗后,血糖明显低于C组和DM组(P<0.000 1),而血IGF-1明显高于C组和DM组(P<0.000 1);RT-PCR结果显示,T组大鼠肝脏和骨骼肌IGF-1 mRNA表达量明显高于DM组(P<0.000 1,P=0.002),肾组织IGF-1基因含量与DM组比较,无明显统计学差异(P=0.387)。结论:IGF-1基因表达能有效降低DM动物血糖,为开展DM治疗新策略奠定基础。

儿童肾脏病患者血清白介素-2、白介素-6和胰岛素样生长因子-Ⅱ检测及其临床意义

为观察儿童肾脏病患者血清白介素 - 2 (IL - 2 )、白介素 - 6 (IL - 6 )、胰岛素样生长因子 -Ⅱ (IGF -Ⅱ )的含量 ,探讨细胞因子与肾脏病的关系 ,采用RIA法检测了不同肾脏病儿童患者血清IL - 2、IL - 6、IGF -Ⅱ的水平。结果显示 ,正常儿童血清IL - 2含量为 1 .6 0± 0 .32 μg/L、IL - 6为 37.0± 6 .0ng/L、IGF -Ⅱ为 0 .30±0 .1 5μg/L。正常男女性儿童之间血清三个细胞因子含量无显著性差异 (P >0 .0 5 )。正常儿童与成年人之间三个细胞因子有显著性差异 (P <0 .0 1 )。慢性肾小球肾炎血清IL - 2含量为 1 .96± 0 .4 4 μg/L、IL - 6为 5 4 .9± 2 0 .9ng/L、IGF -Ⅱ为 0 .5 2± 0 .1 5 μg/L ;急性肾炎血清IL - 2含量为 1 .92± 0 .4 7μg/L、IL - 6为 76 .3± 36 .2ng/L、IGF -Ⅱ为 0 .6 2± 0 .2 2 μg/L ;紫癜性肾炎血清IL - 2含量为 1 .91± 0 .33μg/L、IL - 6为 5 5 .5± 1 5 .1ng/L、IGF -Ⅱ为 0 .5 0± 0 .1 9μg/L ;肾病血清IL - 2含量为 1 .96± 0 .6 5 μg/L、IL - 6为 5 6 .2± 2 8.4ng/L、IGF -Ⅱ为 0 .5 9±0 .2 8μg/L ;不同肾脏病儿童三个细胞因子与正常人相比有显著差异 (P <0 .0 1 )。提示 :不同肾脏病儿童血清IL- 2、IL - 6、IGF -Ⅱ含量升高表明 ,这三个细胞因子均积极参与?