鸡胰岛素样生长因子-I的研究进展

介绍了鸡胰岛素样生长因子 -I(IGF -I)的结构、功能 ,并阐述了该基因的遗传变异与生产性能相关的最近研究进展。

草鱼胰岛素样生长因子-I的融合表达、纯化和抗血清制备

采用PCR方法改造已克隆到的草鱼胰岛素样生长因子 Ⅰ (IGF Ⅰ )cDNA ,使其成为成熟肽cDNA并亚克隆到pGEX 4T 1载体中 ,构建草鱼IGF I融合蛋白表达质粒pGEX IGF。质粒转化大肠杆菌BL2 1菌株。该菌株经IPTG诱导可表达分子量约 34kD的特异蛋白。在不同的温度条件下分别产生以可溶性的和包涵体形式为主的特异蛋白。经 30℃诱导的菌体经溶菌酶消化、超声破碎及高速离心后 ,裂解液上清经glutathionesepharose亲和层析纯化获得高纯度的GST IGF。以此纯化的融合蛋白为抗原制备兔抗草鱼IGF I的抗血清。凝胶双扩散试验显示抗血清效价为 1∶6 4 。

肝硬化患者血清胰岛素样生长因子-I测定及其临床意义

目的 探讨肝硬化患者血清胰岛素样生长因子 I(IGF I)测值改变及其与肝功能Child分级间的关系。方法 45例肝炎后肝硬化患者及 34例健康对照者应用免疫放射法测定血清IGF I值 ,比较IGF I在正常人与肝硬化以及肝功能不同Child级别组中的变化。结果 肝硬化患者的血清IGF I值 (2 45 .5 3± 94.0 9)ng/ml明显低于正常组 (6 7.98± 6 5 .97)ng/ml,P <0 .0 0 1,且随肝功能Child分级的增高而进行性下降。 结论 IGF I测值与肝功能状况有明显的相关性 ,测值低于 30ng/ml则临床预后不良。研究结果提示血清IGF

大菱鲆胰岛素样生长因子-I成熟肽的克隆、重组表达及活性分析

通过RT-PCR方法从大菱鲆肝组织克隆了胰岛素样生长因子-I(IGF-I)成熟肽片段,分析表明,此成熟肽由70个氨基酸残基组成,含有3个链内二硫键。将扩增片段克隆到原核表达载体pGEX-4T-1上,实现了IGF-I成熟肽和GST蛋白在Escherichia coli BL21(DE3)plysS中的融合表达。融合蛋白分子量约为34ku,诱导4h时占菌体总蛋白的59%,主要以包涵体形式存在。Western-blotting免疫印迹表明,融合蛋白可以特异性地被anti-GST抗体识别。包涵体经6mol/L盐酸胍变性溶解及脉冲法稀释复性后,通过GSTrapFF亲和预装柱纯化,获得了电泳分析纯的融合蛋白。以细胞增殖实验检测蛋白生物活性,结果显示,纯化蛋白能促进大菱鲆肾脏细胞的增殖。

胰岛素样生长因子-I对骨骼肌生长和修复研究进展

生长激素(GH/)胰岛素样生长因子-I(IGF-I)轴是肌肉生长的重要调节因子之一。虽然许多组织都能表达IGF-I,但它们各自的功能不同。骨骼肌是IGF-I的靶器官,同时也分泌IGF-I。骨骼肌组织表达的IGF-I对骨骼肌损伤后的再生、修复非常重要,也是通过适当干预保持肌肉质量的重要调节因素。主要讨论GH/IGF-I在促进骨骼肌再生和修复中的作用,并讨论其在运动康复中的应用前景。

新生儿血清瘦素水平变化及与胰岛素样生长因子-I和胰岛素关系研究

为探讨新生儿期血清瘦素、胰岛素样生长因子_I(IGF_I)和胰岛素水平变化及其对新生儿生长发育的影响,采用放射免疫法检测46例健康新生儿静脉血和脐静脉血瘦素、IGF_I和胰岛素水平 ,采用新生儿体重、身长和Rohrers指数[(RI)=出生体重(g)×100/身长(cm)3]估测新生儿生长营养状态。结果显示早期新生儿组血清瘦素水平(0.59±0.43μg/L)明显低于初生组(8.29±6.76μg/L)和晚期新生儿组(1.68±0.58μg/L) ;早期至晚期新生儿组血清瘦素水平的增长值与此期间血清IGF_I、胰岛素和新生儿体重的增长值呈显著正相关(r=0.383,r=0.284,r=0.365) ;初生至早期新生儿组血清瘦素水平的下降值与胰岛素水平、新生儿体重的变化无相关性。提示瘦素在调节新生儿期体重和能量平衡方面起重要作用 ;瘦素可能通过IGF_I。

营养水平对母猪妊娠早期类胰岛素生长因子-I及其mRNA表达的调控

类胰岛素生长因子-I(IGF-I)是促合成代谢、促有丝分裂和抗细胞凋亡的因子。妊娠早期母猪体内有大量IGF-I表达,对胚胎发育有重要作用。营养水平影响IGF-I及其mRNA的表达。本文介绍了母猪卵巢、输卵管和子宫内IGF-I及其mRNA的表达特点,重点阐述了营养水平对母猪IGF-I及其mRNA表达的调控与可能机制。

类胰岛素生长因子-I对鱼类氮代谢的影响

类胰岛素生长因子-I对鱼类的氮代谢起着重要的调控作用。类胰岛素生长因子-I可以通过影响蛋白质合成时转录模板DNA含量、转录效率和翻译水平而实现对鱼体蛋白质的调控。影响类胰岛素生长因子-I对鱼类氮代谢的调控因素包括水温、鱼的品种、不同的生长阶段、鱼体内的激素含量以及饵料的营养水平等。本文综述了鱼类类胰岛素生长因子-I的结构及其影响鱼类氮代谢不同作用方式等面的研究进展,并对类胰岛素生长因子-I以后在鱼类上可能的研究方向做了初步探讨。

胰岛素样生长因子-I调节胚胎着床的体外研究

目的 :观察胰岛素样生长因子 I (IGF I)对体外培养的滋养层细胞粘附到细胞外基质的影响 ,研究IGF I在胚胎着床过程中的调节作用。方法 :原代培养滋养层细胞 ,建立体外滋养层细胞粘附模型 ,IGF I按不同的时间和剂量处理细胞 ,用酶联免疫检测仪测定光密度值代表粘附细胞的相对数目。免疫细胞化学法检测粘着局部磷酸化粘着斑激酶 (pFAK)的表达。结果 :随IGF I浓度的增加 ,滋养层细胞的粘附数目明显增多 ,差异具有显著性意义 (P <0 0 5 ) ,10 0nM时粘附细胞数目最多 ,但与 10nM时相比 ,差异无显著性意义 (P >0 0 5 )。相同浓度的IGF I处理时 ,随时间的延长 ,粘附细胞数目也明显增多 ,差异具有显著性意义 (P <0 0 5 ) ,10nMIGF I培养 2h达最佳量效反应 (P <0 0 0 1)。加入抗整合素αvβ3 抗体能明显阻止其促粘附作用(P <0 0 0 1)。免疫组化染色显示 10nMIGF I处理后 ,粘着局部出现pFAK ,而对照组则无pFAK表达。结论 :IGF I能促进滋养层细胞粘附到纤维粘连蛋白 (FN) ,且这种粘附过程具有明显的时间和剂量依赖性 ,生理剂量的IGF I通过刺激整合素与配体结合 ,激活FAK ,进而激活整合素介导的信号传导通路 ,显著促进滋养层细胞粘附到细胞外基质。

肝细胞生长因子、胰岛素样生长因子-I、基质金属蛋白酶-2在卵巢上皮性癌组织中的表达及其相关性

目的：探讨肝细胞生长因子（HGF）、胰岛素样生长因子-I（IGF-I）及基质金属蛋白酶-2（MMP-2）在卵巢上皮性癌组织中的表达及其相关性。方法：分别收集正常卵巢组织20例（正常对照组），卵巢良性上皮性肿瘤组织30例（良性肿瘤组），卵巢上皮性癌组织70例（卵巢癌组）。采用免疫组织化学SP法检测3组卵巢组织中HGF、IGF-I及MMP-2的表达，分析3个因子与卵巢上皮性癌临床病理因素间的关系，采用Spearman相关性检验分析3个因子间的相关性。结果：①HGF、IGF—I和MMP-2在正常对照组、良性肿瘤组、卵巢癌组中的表达呈上升趋势，且组间两两比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。②卵巢癌组中，HGF、IGF-I及MMP-2的阳性表达在临床分期I～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期及有无淋巴结转移中比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。③在卵巢癌组中，HGF、IGF-I及MMP-2的阳性表达三者间均呈正相关（P〈0．01）。结论：HGF、IGF-I及MMP-2在卵巢上皮性癌组织中高表达，可能共同参与卵巢上皮性癌的发生发展，与癌细胞的增殖、浸润和转移有关，且存在协同作用。

复元胶囊对兔膝骨关节炎软骨中胰岛素样生长因子-I及胰岛素样生长因子结合蛋白3表达的影响

目的观察复元胶囊对兔膝骨关节炎软骨中胰岛素样生长因子-I(IGF-I)、胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)表达的影响。方法采用右后肢伸直石膏固定法造模,将44只雌雄各半新西兰大白兔随机分为正常组、模型组、盐酸氨基葡萄糖组、复元胶囊低、中、高剂量组。正常组4只,其余各组8只。各药物组每天灌胃1次,持续6 w。免疫组织化学法检测IGF-I、IGFBP3表达。结果模型组IGF-I、IGFBP3表达积分明显高于正常组(P<0.01);复元胶囊各剂量组与模型组比较,IGF-I表达积分不同程度升高(P<0.05),而IGFBP3表达积分不同程度降低(P<0.01),高剂量组显著。结论复元胶囊具有防治膝骨关节炎作用,其机制可能与调节IGF-I、IGFBP3表达水平有关。

血清胰岛素样生长因子-I、瘦素水平及其与2～7岁小于胎龄儿生长关系的研究

目的探讨胰岛素样生长因子-I（IGF-I）和瘦素（leptin）在小于胎龄儿（SGA）儿童生长中的作用。方法选择符合纳入标准的60例儿童作为研究对象（SGA组），适于胎龄儿40例儿童作为对照组。分析两组儿童相关资料及血清IGF-I、leptin水平。结果①对照组和SGA组身高标准差得分（HtSDS）、体重标准差得分（WtSDS）差异有统计学意义（P均〈0．01）。②男女童血清IGF-I水平差异无显著性（P〉0．05）。③年龄分组比较对照组和SGA组的血清IGF-I水平差异无显著性（P〉0．05）。④当HtSDS、WtSDS均〈-2时，leptin与IGF-I存在较强的正相关关系（r=0．94，P〈0．01）；当HtSDS、WtSDS均〉0时两者不存在相关关系（r=0．46，P〉0．05）。结论①2～7岁组的SGA儿童生长落后于同龄正常儿童，但其血清IGF-I水平无明昆降低，特别是2～岁组，提示SGA儿童可能存在IGF-I抵抗。②在营养不良时血清IGF-I和瘦素水平呈正相关。

牛初乳及过渡乳中类胰岛素生长因子-I含量测定及其变化

牛初乳及过渡乳中类胰岛素生长因子-I(IGF-I)含量随产后泌乳的进行急剧下降,泌乳前5d,初乳中的IGF-I以游离形态为主,游离IGF-I比例由71.1%下降到50.64%;之后过渡中的IGF-I主要以结合形态为主,结合态IGF-I的比例由51.41%上升到60.1%。从初乳到过渡乳中IGF-I存在形态的变化具有重要的生物学意义。

银鲳(Pampus argenteus)胰岛素样生长因子-I基因的克隆和表达分析

胰岛素样生长因子-I(Insulin-like growth factor-I,IGF-I)是影响脊椎动物生长、发育及代谢的重要调控因子。本研究采用RT-PCR和RACE技术,克隆了银鲳(Pampus argenteus)肝脏IGF-IcDNA序列,应用半定量RT-PCR、Real-time q PCR和原位杂交的方法检测了IGF-I的组织表达特性、在肝脏中的生长表达特性和IGF-I基因在肝脏中的定位。序列分析表明,IGF-I cDNA序列全长836bp,其5′非编码区128bp、3′非编码区92bp,开放阅读框(open reading frame,ORF)605bp,由此推导IGF-I前体蛋白由201个氨基酸组成;前体肽由信号肽、成熟肽、E肽三部分组成,其中信号肽59个氨基酸,成熟肽68个氨基酸,E肽74个氨基酸;成熟肽由B、C、A、D四个区域组成,E肽分析表明,银鲳IGF-I属Ea-4型。同源性比较结果表明,银鲳与同目鲈形目鱼类的IGF-I编码序列同源性较高,为83.52%—91.40%;与哺乳类、鸟类和爬行类的同源性较低。半定量RT-PCR和Real-time q PCR组织特异性表达结果显示,IGF-I m RNA在肝脏组织中的表达量最高,显著高于其它组织,肾脏、心脏、肌肉、脑、鳃、小肠、卵巢次之,嗅球、脾脏和胃中表达较低;半定量RT-PCR和Real-time q PCR不同生长阶段表达结果显示,IGF-I m RNA在30—50g肝脏组织中表达量最高(P<0.05);IGF-I m RNA在肝脏中的原位杂交定位结果显示,在肝脏细胞中均有表达,阳性信号主要位于细胞质中,靠近细胞边缘处信号较强。

蛋氨酸对肉兔氮代谢、血清激素及肝脏胰岛素样生长因子-ImRNA基因表达的影响

选用2月龄新西兰肉兔60只,随机分成五个处理组,在日粮中添加不同水平的蛋氨酸(0、0.2%、0.4%、0. 6%和0.8%),探讨了日粮添加不同水平蛋氨酸对2-3月龄肉兔氮代谢,血清胰岛素(INS)、生长激素(GH)、胰岛素样生长因子-I(IGF-I)含量,及肝脏IGF-I mRNA基因表达量的影响。结果表明:日粮添加蛋氨酸对生长肉兔氮的表观消化率(DN/IN)影响显著(P<0.05),添加0.4%的蛋氨酸时,DN/IN最高;蛋氨酸添加量对粪氮(FN)、尿氮(UN)、沉积氮(RN)、氮的总利用率(RN/IN)、氮的生物利用率(RN/DN)和可消化氮(DN)均无显著影响(P>0.05),但是可消化氮(DN)呈现先升高后降低的趋势。蛋氨酸添加水平对血清中INS和GH的含量无显著影响,对IGF-I含量影响显著(P=0.02),对IGF-I mRNA基因表达量影响极显著(P=0.001)。2月龄至3月龄生长肉兔适宜的蛋氨酸添加水平为0.4%。

脉冲电磁场对去势大鼠骨组织胰岛素样生长因子-I表达的影响

目的观察脉冲电磁场(EM)对去势大鼠骨组织结构和胰岛素样生长因子-I(IGF-I)表达的影响,探讨EM在预防骨质疏松中的作用。方法3月龄SD大鼠随机抽签法分为正常对照组(Sham),去势组(OVX),雌激素治疗组(E2)及脉冲电磁场治疗组(EM),2个月后测定骨形态学参数,通过斑点杂交技术测定骨组织IGF-ImRNA的表达,通过免疫组织化学方法进行细胞定位。结果骨形态学测定显示E2组较OVX组骨小梁数目与厚度明显增加,髓腔变窄;EM组骨小梁数目与厚度接近或超过E2组。OVX组骨组织IGF-ImRNA的表达水平(27±6)OD较Sham组(78±6)OD显著下降P<0.01(t=1.823),EM组(69±7)OD与E2组(75±5)OD无显著性差异P>0.05(t=3.206),两组均接近Sham组水平,与OVX组比较显著性增高P<0.01(t=2.138,t=1.752)。结论EM显著抑制了雌激素缺乏导致的骨结构的衰退,改善骨结构特性,在一定程度上其作用优于雌激素替补治疗。EM可能是一种颇具潜力的预防OP的方法,其作用可能是通过IGF-I介导的。

逆转录病毒载体介导人胰岛素样生长因子-I在软骨细胞中的表达

目的探讨逆转录病毒载体介导人胰岛素样生长因子-I(human insulin-like growth factor-I,hIGF-I)体外转染兔软骨细胞后软骨细胞hIGF-I的表达情况及其生物学行为变化。方法将构建的含有目的基因的逆转录病毒载体pLNC-IGF-GFP体外转染兔关节软骨细胞,经G418筛选阳性克隆,采用RT-PCR及免疫化学染色检测转染软骨细胞中hIGF-I的表达情况,并在荧光显微镜下观察标记基因GFP的表达情况。采用MTT法、流式细胞仪、免疫细胞化学染色、二甲基亚甲蓝法及ELISA法对转染hIGF-I后的软骨细胞的增殖能力及表型进行检测。结果 G418筛选后获得的软骨细胞阳性克隆,经RT-PCR和免疫细胞化学检测表明hIGF-1基因在mRNA和蛋白质水平得到稳定表达,荧光显微镜下观察转染的软骨细胞可激发出绿色荧光,证明转染成功。转染软骨细胞株的增殖能力、Ⅱ型胶原和蛋白多糖的分泌水平,在转染后6 w内均高于同时间点未转染的软骨细胞,差异具有显著性(P<0.05)。结论逆转录病毒载体能有效地将hIGF-I基因转染至兔软骨细胞并获得稳定表达,同时转染后的软骨细胞增生活跃,能够在较长时间维持软骨细胞表型,为进一步研究软骨缺损的组织工程修复和基因治疗打下基础。

多囊卵巢综合征患者血清抑制素B、类胰岛素样生长因子-I的测定及临床意义

目的探讨血清抑制素B、类胰岛素样生长因子-I及性激素与PCOS发病的相关性。方法应用免疫学方法比较同期PCOS不孕患者与非PCOS不孕患者血清抑制素B、类胰岛素样生长因子-I及性激素的水平,分析其与PCOS发病的相关性。结果多囊卵巢综合征患者血清抑制素B、类胰岛素样生长因子-I、黄体生成素、雄激素水平明显高于对照组,具有差异性。结论 PCOS不孕妇女的基础血清INHB、IGF-I水平显著高于正常对照组,提示INH-B、IGF-I可能参与了PCOS发病的病理生理过程。