巨噬细胞抑制因子-1、胰岛素样生长因子结合蛋白3、糖类抗原19-9检测对胰腺癌患者预后的预测价值

目的探讨糖类抗原19-9(CA19-9)、胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)、巨噬细胞抑制因子-1(MIC-1)检测对胰腺癌患者预后的预测价值。方法选取82例胰腺癌患者作为观察组,另选取81例健康体检志愿者作为对照组。对比两组受试者MIC-1、IGFBP3、CA19-9水平,分析胰腺癌患者预后的影响因素和MIC-1、IGFBP3、CA19-9单独及联合检测对胰腺癌患者预后的预测价值。结果观察组患者MIC-1、IGFBP3、CA19-9水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。82例胰腺癌患者根据预后情况分为好转组61例与预后不良组21例,好转组与预后不良组患者分化程度、临床分期、淋巴结转移情况及MIC-1、IGFBP3、CA19-9水平比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。分化程度为低分化、临床分期为Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移、MIC-1≥500 pg/ml、IGFBP3≥40 U/ml、CA19-9≥40 U/ml均为胰腺癌患者预后不良的独立危险因素(P﹤0.05)。MIC-1、IGFBP3、CA19-9联合检测预测胰腺癌患者预后的灵敏度和特异度分别为87.4%、71.9%,曲线下面积为0.816(95%CI:0.715~0.917),高于MIC-1、IGFBP3、CA19-9单独检测。结论MIC-1、IGFBP3、CA19-9水平升高均与胰腺癌患者预后不良密切相关,三者在胰腺癌患者预后预测中有较高的使用价值。

单克隆抗体IA2结合胰岛细胞膜155kD和160kD抗原蛋白的纯化

免疫吸附实验表明87％ 1型糖尿病人血清自身抗体能替代单克隆抗体IA2与大鼠胰岛β-肿瘤细胞结合,并且单抗1A2能与人胰岛及大鼠胰腺提取物中的抗原结合。由于抗原含量很低,用亲和沉析、免疫沉淀、HPLC的方法均未得到可检测量的抗原蛋白。我们尝试用凝胶洗脱的办法得到了足够的大鼠胰腺提取物抗原蛋白。银染及Western Blot显示为155kD和160kD两条带。用胰蛋白酶部分消化后N末端氨基酸序列分析得到了12个氨基酸,初步认为该抗原不同于谷氨酸脱羧酶(GAD)、酪氨酸磷酸酶(IA2)等已发现的抗原。本实验为该抗原蛋白的分子克隆及1型糖尿病发病机制的研究打下了基础。

胃癌中胰岛素样生长因子结合蛋白-2,胰岛素样生长因子-1和增殖细胞核抗原的表达和临床意义

目的:研究IGFBP-2、IGF-1和PCNA在胃癌组织中的表达,探讨其与胃癌临床病理学特征的关系及意义。方法:用免疫组织化学SP法检测60例胃癌患者肿瘤组织和40例正常胃黏膜组织中IGFBP-2、IGF-1和PCNA的表达水平。结果:(1)IGFBP-2、IGF-1和PCNA在胃癌组织中的表达率显著高于在正常胃黏膜组织中的表达(P<0.01)。(2)IGFBP-2、IGF-1和PCNA在有淋巴结转移胃癌中的表达显著高于无淋巴结转移胃癌(P<0.05)。(3)IGFBP-2和IGF-1在胃癌组织中的表达具有明显正相关(P<0.01)。(4)PCNA的表达率在IGFBP-2和IGF-1阳性胃癌中的表达显著高于C-erbB-2阴性的胃癌(P<0.01)。结论:胃癌组织中IGFBP-2水平的升高可能增强IGF-1的表达,两者通过促进肿瘤细胞的增殖与胃癌的发生发展和浸润转移有关。

国人胰岛细胞自身抗原ICA69原核表达型质粒的构建

目的：应用基因工程技术生产适用于I型糖尿病早期诊断的试剂盒打下基础。方法：从中国人胰岛细胞瘤组织总RNA中，经逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）克隆了胰岛细胞自身抗原69KD蛋白（ICA69）基因的cDNA，双脱氧末端终止法对其全部核苷酸序列予以确定后，将此编码483个氨基酸、全长1449bp的cDNA重组入表达型质粒中。结果：核苷酸序列分析证实重组质粒接口处读码框架正确。结论：为ICA69重组基因的表达及表达产物在临床诊断中的应用奠定了基础。

甲状腺癌组织中趋化因子受体7、白细胞分化抗原147、胰岛素样生长因子-1受体表达的相关性分析

目的分析甲状腺癌患者病理组织CCR7、CD147水平及血清IGF-1R水平的异常改变并探讨其临床应用价值。方法选取2019年6月至2021年3月于我院外科接受治疗的45例甲状腺癌患者为甲状腺癌组,另选取同期甲状腺良性结节患者45例为良性结节组。收集甲状腺癌及甲状腺良性结节患者的病理组织,采用免疫组织化学S-P法检测两组患者病理组织中CCR7、CD147的水平;采用酶联免疫法检测两组患者血清中IGF-1R表达水平。结果甲状腺癌组患者病理组织中CCR7、CD147的表达含量显著高于良性结节组(P<0.05);甲状腺癌组患者血清IGF-1R表达水平显著低于良性结节组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论病理组织中CCR7、CD147表达及血清IGF-1R表达在临床上可用于甲状腺癌的鉴别诊断,为甲状腺癌的早期诊断及治疗提供参考。

人巨细胞病毒基因工程糖蛋白52kd抗原的临床初步应用

作者在构建人巨细胞病毒(HCMV)糖蛋白52 kd抗原编码区段的表达质粒pHCMV-52基础上,从含该克隆基因的大肠杆菌中分离并纯化其表达产物作为抗原,与已知ELISA-HCMV-IgM为阳性(12例)和阴性(4例)的血清反应,采用辣根过氧化物酶(HRP)标记的马抗人抗体取代同位素检测特异抗原—抗体复合物,两种方法结果一致者10例(10/12)。该临床初步结果显示,基因工程技术制备HCMV抗原可用于HCMV感染的临床诊断,并具有抗原制备方便、产量高、临床实用和易于推广等优点。

抑制细胞周期蛋白依赖性激酶8表达对小鼠胰岛β细胞增殖及胰岛素分泌功能的影响观察

目的观察抑制细胞周期蛋白依赖性激酶8(CDK8)表达对MIN6胰岛β细胞胰岛素分泌功能及细胞增殖的影响,并探讨其可能作用机制。方法将培养好的MIN6细胞分为3组,观察组转染siRNA-CDK8慢病毒液(可抑制细胞CDK8表达),空白组不给予任何干预,对照组转染siRNA-NC慢病毒液(阴性对照),培养48 h。CCK-8检测各组细胞增殖活性(OD值),流式细胞术观察各组细胞周期分布,ELISA法检测各组细胞上清液胰岛素,荧光定量PCR法检测各组细胞CDK8、胰岛素合成相关转录因子(PDX1、INS2和MAFA)、胰岛素转运相关因子GLUT2 mRNA,Western blotting检测各组细胞CDK8、细胞周期蛋白(Cyclin)、过氧化物酶体增殖剂激活受体γ(PPARγ)、增殖细胞核抗原(PCNA)。结果与对照组及空白组比较,观察组细胞OD值降低,G0/G1、S期细胞比例增加,细胞上清液胰岛素水平降低,CDK8、PDX1、INS、MAFA、GLUT2 mRNA相对表达量降低(P均<0.05)。与对照组及空白组比较,观察组CDK8、Cyclin D1、PCNA、PPARγ蛋白相对表达量降低(P均<0.01)。结论抑制CDK8表达的MIN6细胞,细胞增殖活性显著下降,胰岛素分泌减少,其机制可能与抑制Cyclin D1、PCNA及PPARγ蛋白表达相关。

胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白3限制性表位肽诱导的细胞毒性T淋巴细胞的体外免疫应答

目的探讨胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白3(IGF2BP3)限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位诱导的CTL对肺癌细胞的作用。方法使用软件Net CTL 1.2、SYFPEITHI和IEDB预测选取IGF2BP3的人类白细胞抗原A2(HLA-A2)限制性表位肽。T2A2与表位肽的亲和力实验检测候选表位与T2A2细胞表面HLA-A2分子的结合能力,酶联免疫斑点(ELISPOT)实验检测候选表位肽诱导CTL分泌γ干扰素(IFN-γ)的能力,羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)荧光染色检测细胞诱导CTL的能力。结果P143、P199、P280、P409、P515具有较好的结合力。表位肽P409、P515诱导的CTL具有较好的分泌IFN-γ的能力,并且对靶细胞具有一定的杀伤作用。结论P409、P515有望用于肿瘤的过继免疫治疗,可以成为抗肿瘤多肽免疫治疗疫苗的候选表位。

抗入肝细胞癌单克隆抗体的产生及其相应抗原P60的免疫组化定位研究

本文用肝癌手术标本,制备细胞悬液,免疫BALB/c小鼠,融合产生杂交瘤,用ABC染色法筛选单克隆抗体,获得特异性较好的杂交瘤-HAb_(18),抗体亚类为小鼠IgG1,抗原经亲和层析获得,分子量为60KD,过碘酸-Schiffs染色阴性,脂蛋白电泳阴性,PI:8.2。肝癌免疫组化染色阳性率为75％。

ICA69基因工程融合抗原的制备(英文)

基于基因工程技术 ,用PCR法扩增出编码ICA6 9的cDNA片段 ,直接克隆到pSPORT 1质粒上 ,经DNA序列测定 ,插入到GST融合蛋白表达载体 pGEX 2T ,构成重组质粒 p2T ICA6 9,得到的表达产物GST ICA6 9融合蛋白用间接ELISA法检测其免疫原性 .测序结果表明 ,所获PCR产物已正确重组到PGEX 2T表达型质粒中 .重组质粒在原核细胞中表达的融合蛋白具有免疫原性 ,并能应用于Ⅰ型糖尿病病人血清中抗ICA6 9抗体的检测 .所获得的表达产物为重组ICA6 9融合抗原 ,有助于提高Ⅰ型糖尿病的预报率和确诊率 .

抗BSA抗体检测鼠胰岛B肿瘤细胞提取物

目的:检测鼠胰岛B肿瘤细胞(ratinsulinoma,RIN)株的蛋白提取物是否和牛血清白蛋白(bovineserumalbumin,BSA)有共同的抗原决定簇。方法:从经过无血清培养的RIN细胞中提取蛋白质,用WesternBlotting方法,用BSA抗体检测提取物中能和该抗体结合的蛋白质。结果:从提取物中检测出了能和BSA抗体结合的相对分子质量为63000的蛋白质。结论:RIN细胞中含有与BSA有共同的抗原决定簇的蛋白质。

扶正抑癌方对结肠癌根治术后患者血清IGF-1、EGF、TK1、CRP、CA199及CD4^+淋巴细胞亚群水平的影响

目的:探讨扶正抑癌方对结肠癌根治术后患者血清胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)、表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)、细胞质胸苷激酶1(thymidine kinase-1,TK1)、C反应蛋白(C reaction protein,CRP)、糖类抗原199(carbohydrate antigen 199,CA199)及CD4^+淋巴细胞亚群水平的影响。方法:选择2013年1月~2015年12月江阴市人民医院确诊的120例结肠癌根治术后患者,随机分为实验组(n=60)和对照组(n=60)。对照组患者予XELOX方案化疗,实验组患者在对照组的基础上给予扶正抑癌方,21d为1个周期,两组患者均接受治疗3周期,检测并比较两组患者治疗前后血清IGF-1、EGF、TK1、CRP、CA199水平及外周血CD3^+、CD4^+、CD8^+及自然杀伤(NK)细胞所占的比值。结果:治疗前,两组患者血清IGF-1、EGF、TK1、CRP、CA199水平及外周血NK、CD3^+、CD4^+、CD8^+细胞所占比值水平比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组患者血清IGF-1、EGF、TK1、CRP及CA199水平均明显低于治疗前,同时实验组患者上述各指标均明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);治疗后,对照组患者外周血NK、CD3^+、CD4^+及CD8^+细胞所占比值明显低于治疗前,同时实验组各免疫功能指标明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:扶正抑癌方能明显降低结肠癌根治术患者术后血清IGF-1、EGF、TK1、CRP及CA19-9水平,提高CD4^+等淋巴细胞亚群水平,提高机体免疫功能,值得在临床上推广应用。

缺氧诱导因子-1α、胰岛素样生长因子ⅡmRNA结合蛋白3、增殖细胞核抗原和P53蛋白在反流性食管炎、Barrett食管及食管腺癌组织中的表达

目的观察缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、胰岛素样生长因子Ⅱm RNA结合蛋白3(insulin-like growth factor-Ⅱm RNA-binding protein 3,IBMP3)、增殖细胞核抗原(proliferating cellnuclear antigen,PCNA)和P53蛋白在反流性食管炎(ruflex esophagitis,RE)、barrett食管(Barrette esophagus,BE)、食管腺癌(esophageal edenocarcinoma,EAC)组织中的表达情况,分析HIF-1α、IMP3、PCNA和P53的表达在EAC发生过程中的意义。方法采用免疫组化法,检测50份RE、100份BE和100份EAC样本中HIF-1α、IMP3、PCNA和P53蛋白的表达,并取无反酸、烧心等症状,无免疫疾病、感染疾病病史及胃镜下食管下段黏膜无明显病变的功能性消化不良患者样本30份作为对照。结果 HIF-1α蛋白在RE、BE和EAC组中阳性率分别为14%、54%和92%,与对照组相比,差异有统计学意义(P均<0.05);P53蛋白在RE、BE和EAC组中阳性率分别为8%、31%和84%,EAC和BE组与对照组相比,差异有统计学意义(P均<0.01);IMP3蛋白在RE、BE和EAC组中阳性率分别为10%、45%和74%,EAC和BE组与对照组相比,差异有统计学意义(P均<0.01);PCNA蛋白在RE、BE和EAC组中阳性率分别为22%、47%和74%,EAC和BE组与对照组相比,差异有统计学意义(P均<0.01);EAC与BE组及BE与RE组比较,HIF-1α、P53、IMP3、PCNA蛋白的表达差异有统计学意义(P均<0.01),4种蛋白在RE、BE和EAC组中的表达逐渐增强。HIF-1α表达与IMP3、P53、PCNA表达均呈正相关(P<0.01)。结论 HIF-1α、IMP3、PCNA和P53蛋白的表达与BE、EAC的发生发展密切相关,可用作监测BE、EAC早期发生的指标,为今后BE及EAC的治疗提供新的途径。

IMP3蛋白及Ki-67在脑胶质瘤中的表达及临床意义

目的探讨胰岛素样生长因子IImRNA结合蛋白3（IMP3蛋白）及Ki-67在脑胶质瘤中的表达以及临床意义。方法选取我院2008年1月至2012年10月手术切除的不同级别的胶质瘤60例（Ⅰ级5例,Ⅱ级20例,Ⅲ级20例,Ⅳ级15例）及5例正常脑组织,应用免疫组化Envision二步法检测IMP3蛋白及Ki-67在不同级别胶质瘤中的表达,分析二者与胶质瘤恶性程度的关系以及二者的相关性。结果 IMP3在胶质瘤各级别的表达中有统计学意义（χ2=41.17,P〈0.05）,其中胶质瘤Ⅲ~Ⅳ级阳性表达率明显高于Ⅰ~Ⅱ级（91.4%vs8%,χ2=41.34,P〈0.05）。胶质瘤标本的Ki-67指数（Ki-67LI）范围为0%~50%,在胶质瘤各级别的表达中有统计学意义（χ2=29.80,P〈0.05）,其中胶质瘤Ⅲ~Ⅳ级阳性表达率明显高于Ⅰ~Ⅱ级（91.4%vs 20%,χ2=50.29,P〈0.05）。IMP3蛋白的阳性表达率与Ki-67蛋白的阳性表达率有正相关性（r=0.774,P〈0.05）。结论 IMP3及Ki-67在脑胶质瘤中的表达均与胶质瘤的恶性程度呈正相关,二者联合应用可作为评价胶质瘤级别的重要参考指标。

胃癌单抗MG5相应抗原的纯化及分析

作者报告鼠抗人胃癌单克隆抗体MG5相应抗原的纯化和初步鉴定。首先收集胃癌患者转移性腹水癌细胞。并制备可溶性抗原提取液。用concanavalin A(Con A)Sepharose 4B亲和层析法分离提取胃癌细胞糖蛋白成份后,再用MG5-Sepharose4B免疫亲和层析法纯化单抗MG5相应抗原。经高碘酸氧化,电泳脂蛋白染色SDS-PAGE和免疫印渍等实验分析,证实MG5相应抗原是一种含3个亚单位的糖蛋白,分子量分别为68kD、52kD和44kD,抗原决定簇存在于糖链上,免疫分析提示MG5相应抗原是一种新的胃癌相关抗原。

国人ICA69基因cDNA的克隆及序列分析

目的 :克隆国人胰岛细胞自身抗原69kD蛋白基因(hiICA69)并经序列分析予以确证。方法 :采用聚合酶链式反应技术 ,从中国人胰岛细胞瘤cDNA文库中扩增出hiICA69编码序列cDNA ,将基因片段插入 pSPORT1质粒 ,进一步亚克隆到 pUC18载体中 ,经蓝白斑和限制性酶谱分析得以初步筛选后 ,双脱氧末端终止法对其全部核苷酸序列予以确定。结果 :证实了hiICA69基因全长为1449bp、编码483个氨基酸。与Pietropaolo等报道的序列比较 ,仅在编码第139位氨基酸的密码子由CAA→CTA ,即由谷氨酰胺→亮氨酸 ,其余均与文献报道和EMBL核酸数据库提供的序列相同。结论 :这一基因的获得和定征 ,为后续研究打下基础。

转染细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白基因的同供体大鼠树突状细胞对胰岛移植物存活的影响

目的 探讨转染细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(转染CTLA4Ig基因)的同供体大鼠DC细胞对同种大鼠胰岛移植的影响。方法 链尿菌素(STZ) 60mg/kg体重腹腔内注射制作SD大鼠糖尿病模型,胶原酶法分离、Ficoll 40 0密度梯度离心法纯化胰岛,GM CSF +IL 4诱生培育的方法,获得高纯度的DC ,含目的基因CTLA4Ig重组腺病毒AdvCTLA4Ig ,转染同供体DC细胞,与胰岛细胞同时移植于糖尿病受体大鼠肾包膜下,免疫组织化学、Dot ELISA、逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)检测CTLA4Ig基因在实验组和对照组DC细胞中的表达,并检测受体大鼠的血糖浓度变化,同时观察受体存活情况。结果 实验组DC细胞有CTLA4Ig表达,而对照组DC细胞没有CTLA4Ig表达,实验组正常血糖维持时间(17.3±2 .4)d较对照组(10 .1±1.5 )d、空白对照组(8.3±1.2 )d显著延长,实验组、对照组和空白对照组受体大鼠存活天数分别为(3 4.5±3 .4)d、(14 .7±2 .3 )d和(11.2±1.4)d ,实验组高于对照组(P <0 .0 1)。结论 表达CTLA4Ig基因的DC细胞可能诱异胰岛移植免疫耐受。

1型糖尿病自身抗原的研究进展及其意义

胰岛素 (INS)、谷氨酸脱羧酶6 5(GAD6 5)、胰岛细胞瘤相关蛋白 2 (IA 2 )和IA 2 β是已发现的 1型糖尿病(T1DM)的主要自身抗原 ,它们不仅是体液性自身免疫反应的靶蛋白 ,而且可能也是自身反应性T淋巴细胞的靶分子。针对这些自身抗原的自身抗体的存在 ,有助于糖尿病的正确分型及T1DM的预测。INS和GAD6 5成为T1DM免疫干预疗法的主要靶点。

CTLA4Ig基因修饰BMSCs对异种胰岛移植排斥反应的影响

目的探讨细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白(CTLA4Ig)基因修饰骨髓间充质干细胞(BMSCs)在异种胰岛移植排斥反应中的作用。方法构建携带CTLA4Ig基因的重组腺病毒载体,用其感染BMSCs并和人胰岛细胞移植到糖尿病大鼠肾包膜下,建立人-大鼠异种胰岛移植模型。观察胰岛移植后糖尿病大鼠血糖变化、生存情况以及移植物病理形态学改变,检测移植物胰岛素和CTLA4Ig的表达以及移植糖尿病大鼠白细胞介素2(IL-2)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的水平变化。结果①糖尿病大鼠血糖在移植后2～3 d恢复正常,对照组血糖平均在移植后7 d升高,单纯干细胞组和干细胞转染组血糖分别在22 d和46 d升高。②对照组、单纯干细胞组和干细胞转染组移植物存活时间分别为(10±2.8)d、(27±6.5)d和(52±8.7)d,各组间比较差异有统计学意义(F=6.459,P<0.05);移植大鼠生存时间分别为(25±7.6)d、(55±9.8)d、(98±16.3)d,各组间比较和移植物存活时间相似(F=7.365,P<0.05)。③对照组在移植后1周内,IL-2、TNF-α的水平均急剧上升,较移植前显著升高(P<0.01)。④各治疗组移植物见成片的胰岛细胞团,未见淋巴细胞浸润,转染组移植物可见胰岛素和CTLA4Ig的表达。结论 CTLA4Ig基因修饰骨BMSCs可抑制异种胰岛移植排斥反应,延长胰岛移植物的存活时间。

蛋白酪氨酸磷酸酶LAR:潜在的治疗靶点

白细胞共同抗原相关蛋白 (leukocyteantigen relatedprotein ,LAR)属于受体型蛋白酪氨酸磷酸酶 (proteintyrosinephosphatase ,PTP) ,它具有广泛的组织分布。LAR前体蛋白在翻译后水平由蛋白水解酶切割成为两个非共价连接的亚基 ,胞外亚基和磷酸酯酶亚基。胞外亚基的结构类似于细胞粘附分子 ,由 3个免疫球蛋白样结构和 8个Ⅲ型纤粘连蛋白样结构组成 ;磷酸酯酶亚基含有一个短的胞外结构域、一个转膜区域和两个连续的胞内酪氨酸磷酸酯酶催化结构域。现有证据表明LAR可与钙粘着蛋白 连环蛋白复合物结合 ,使β 连环蛋白去磷酸化 ,稳定钙粘着蛋白 连环蛋白复合物 ,在细胞通讯中发挥重要作用。LAR也定位于粘着斑 ,参与细胞与胞外基质的粘着 ;有证据表明LAR通过与α LIP相关蛋白 (α liprin)结合 ,参与神经系统发育过程中轴突的延伸。大量的证据表明 ,LAR能够负向调节胰岛素信号通路 ;从临床角度分析 ,抑制LAR可能会改善抗胰岛素作用 ,提高Ⅱ型糖尿病病人对胰岛素的敏感性。鉴于LAR参与多种信号通路 。