C-型凝集素域家族11成员A促进胰岛素分泌改善脂毒性诱导胰岛损伤的研究

目的探讨脂毒性对胰岛C-型凝集素域家族11成员A(Clec11a)表达的影响,重组Clec11a(rClec11a)蛋白对小鼠胰岛、小鼠胰岛β细胞系MIN6细胞及人胰岛β细胞系EndoC-βH1细胞胰岛素分泌的影响。方法免疫荧光染色检测正常小鼠(Con)及高脂饲料喂养的肥胖小鼠(DIO)胰岛Clec11a与胰岛素表达。采用棕榈酸(PA)干预正常小鼠胰岛及MIN6细胞不同时间,Western blot检测Clec11a蛋白表达。将分离的正常小鼠胰岛分为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组及不同浓度rClec11a处理组,检测胰岛素刺激指数(SI)。将分离的正常小鼠胰岛分为载体对照组(Con-Veh组)、Con-PA组和Con-PA+rClec11a组,检测胰岛素SI。将EndoC-βH1细胞分为PBS对照组(EndoC-βH1-PBS组)与rClec11a干预组(EndoC-βH1-rClec11a组)及siRNA-Negtive Con组与siRNA-Clec11a干预组,分别检测高糖刺激后胰岛素分泌。结果DIO小鼠胰岛Clec11a表达低于正常小鼠。小鼠胰岛及MIN6细胞内Clec11a蛋白表达随PA培养时间延长呈先升高后降低趋势(P<0.05)。与Con-PBS组比较,Con 10 rClec11a、Con 100 rClec11a、Con 1000 rClec11a组SI升高(P<0.05)。与Con-Veh组比较,Con-PA组SI降低(P<0.05)。与Con-PA组比较,Con-PA+rClec11a组SI升高(P<0.05)。20 mmol/L高糖刺激30 min后,EndoC-βH1-rClec11a组胰岛素分泌高于EndoC-βH1-PBS组(P<0.05),siRNA-Clec11a组胰岛素分泌低于siRNA-Negtive Con组(P<0.05)。结论高脂培养下胰岛Clec11a表达降低,Clec11a通过促进胰岛β细胞分泌胰岛素,对脂毒性诱导的胰岛损伤发挥保护作用。

基于生物信息学筛查CLEC3B蛋白及其在脓毒症诊断中的作用

目的:研究正常人与脓毒症患者血清差异表达蛋白中C-型凝集素域家族3成员B(CLEC3B)蛋白,探讨目标CLEC3B蛋白作为脓毒症分子标志物的可能性。方法:收集10名健康志愿者(健康组)和18例脓毒症患者(脓毒症组)外周血,利用数据独立采集法对外周血清蛋白数据进行采集,数据上传至i DEP在线平台分析脓毒症患者外周血中差异表达蛋白。并对这些差异蛋白进行生物信息学分析,筛选出脓毒症关键蛋白。酶联免疫吸附法(ELISA)验证并绘制关键蛋白受试者工作特征(ROC)曲线。结果:蛋白质组学分析筛选出138个差异表达蛋白(DEPs),其中34个蛋白显著下调,104个蛋白显著上调。DEPs主要富集在细胞过程、生物调节、生物过程调节、参与绑定、催化活化、分子功能监管、免疫系统、信号转导等。DEPs构建蛋白-蛋白相互作用网络(PPI)筛选出感兴趣的关键蛋白CLEC3B。ELISA实验表明脓毒症组患者CLEC3B蛋白浓度(297.73±22.00)ng/ml显著低于健康组(452.42±191.72)ng/ml,差异具有统计学意义(t=13.13,P=0.000)。CLEC3B蛋白的ROC曲线下面积为0.998,灵敏度为97.73%,特异度为100.0%。结论:CLEC3B蛋白在脓毒症组中显著降低,其灵敏度高,特异度高,可以作为脓毒症潜在的生物学诊断标志物。临床试验注册号中国临床试验注册中心,ChiCTR1900021261。