棕榈酸诱导胰岛素瘤细胞MIN6细胞凋亡

目的探讨蛋白激酶B及其磷酸化在棕榈酸诱导的胰岛素瘤细胞MIN6凋亡中的作用。方法胰岛素瘤细胞MIN6分别在含有不同棕榈酸浓度(0～0.5 mmol/L)的DMEM高糖培养基中孵育,培养基中加或不加PI3K/PKB的阻断剂LY294002;TUNEL法观察凋亡并计数凋亡率;透射电镜观察MIN6细胞超微结构;Western blot检测蛋白激酶B(PKB)及其磷酸化蛋白p-PKB(Ser473)的表达;RT-PCR法检测BAX、BCL-2mRNA的表达。结果MIN6细胞凋亡随着培养基中棕榈酸浓度的增加而增加,LY294002可增强其凋亡程度;棕榈酸抑制MIN6细胞的PKB在473位丝氨酸位点的磷酸化,抑制BCL-2mRNA的表达并促进BAXmRNA的表达。结论棕榈酸可能通过抑制PKB磷酸化的激活而诱导糖尿病时胰岛β细胞的凋亡。

棕榈酸对小鼠胰岛β细胞瘤MIN6细胞凋亡的影响及其机制探讨

目的观察棕榈酸对小鼠胰岛β细胞瘤MIN6细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法培养于含0.5 mM棕榈酸的培养基中的MIN6细胞为实验组,仅含5%BSA的培养基培养的MIN6细胞为对照组,采用流式细胞术和原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测两组MIN6细胞凋亡情况。实验组于培养12(实验1组)、24(实验2组)、36(实验3组)h后,对照组于培养36 h后,采用Western blot法检测MIN6细胞中的凋亡诱导因子(AIF)及survivin。构建survivin过表达载体并转染实验组细胞,36 h后,同前法检测转染及未转染survivin过表达载体的MIN6细胞在含棕榈酸培养基中的凋亡情况。结果培养36 h后实验组MIN6细胞凋亡率为30.27%±3.15%,明显高于对照组的4.61%±0.51%(P<0.01)。实验1、2、3组MIN6细胞核中的AIF的相对表达量高于对照组,sur-vivin相对表达量低于对照组(P均<0.05)。棕榈酸培养36 h后,转染survivin过表达载体的MIN6细胞凋亡率为11.6%±2.09%,低于未转染者的31.27%±2.97%(P<0.01)。结论棕榈酸可诱导小鼠胰岛β细胞瘤MIN6细胞凋亡,可能与下调survivin表达和激活AIF凋亡信号通路有关;survivin表达上调可抑制棕榈酸诱导的MIN6细胞凋亡。

高糖高脂环境下尿石素A对MIN6胰岛β细胞形态活力影响及分子机制初探

目的研究高糖高脂环境下尿石素A(UA)对MIN6胰岛β细胞形态、活力的影响,通过UA与糖尿病靶点蛋白进行分子对接预测其作用机制。方法体外培养小鼠MIN6胰岛β细胞株,分别用高糖(葡萄糖25 mmol/L)、高脂(棕榈酸0.5 mmol/L)、高糖高脂(25 mmol/L葡萄糖联合0.5 mmol/L棕榈酸)处理24 h建立细胞损伤模型,观察不同浓度UA(1.4、2.9、5.8、11.5、23.0μg/mL)对MIN6胰岛β细胞形态活力的影响。将3种模型细胞分别用UA(11.5μg/mL)干预12、24、48、72 h,光学显微镜观察细胞形态变化,CCK8法检测细胞活力。采用Molecular Docking(分子对接)法考察UA与腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、蛋白激酶B(AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶点(mTOR)等糖尿病核心靶点的结合能力。结果与正常组比较,高糖、高脂或高糖高脂干预24 h可引起MIN6胰岛β细胞损伤,细胞活力下降细胞形态改变,差异有统计学意义(P<0.01)。与高糖模型组比较,UA(23.0μg/mL)浓度组细胞活力显著增强,差异有统计学意义(P<0.01)。与高脂模型组比较,UA(5.8、11.5μg/mL)浓度组的细胞活力显著增强,差异有统计学意义(P<0.01)。与高糖高脂模型组比较,UA(5.8、11.5、23.0μg/mL)浓度组细胞活力显著增强,差异有统计学意义(P<0.01)。与正常组比较,高糖处理24、48、72 h,高脂、高糖高脂处理12、24、48、72 h,MIN6胰岛β细胞活力显著下降;11.5μg/mL浓度UA干预在高脂24 h以及高糖高脂24、48 h环境下,可显著提高MIN6胰岛β细胞活力,差异有统计学意义(P<0.01)。分子对接预测显示UA与AMPK、AKT、mTOR结合能分别为:6.42、6.30、6.74。结论高糖高脂环境下UA能减轻MIN6胰岛β细胞损伤,改善细胞生长形态和细胞活力,预测其机制可能是与直接靶向结合作用于糖尿病靶点蛋白AMPK、AKT、mTOR有关。

罗汉果皂苷Ⅴ通过PI3K/Akt通路抑制过氧化氢诱导的MIN6细胞氧化损伤

目的探讨罗汉果皂苷Ⅴ(mogroside V,MV)对过氧化氢(hydrogen peroxide,H_(2)O_(2))诱导的小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞氧化损伤的保护作用,其机制是否与PI3K/Akt信号通路有关。方法MV预处理后,用500μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)处理MIN6细胞,MTT法检测MIN6细胞活力。流式细胞术检测各组活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平及细胞凋亡率。Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、PCNA以及PI3K/Akt信号通路中Akt和p-Akt蛋白表达情况。结果H_(2)O_(2)能够明显抑制MIN6细胞增殖,诱导ROS产生和细胞凋亡,降低Bcl-2、PCNA、Akt和p-Akt的表达。MV预处理后,Bcl-2、PCNA以及Akt和p-Akt的表达增加,MIN6细胞活力增加。此外,MV可部分逆转Akt抑制剂MK2206(5μmol·L^(-1))对MIN6细胞的凋亡和氧化应激作用。结论MV对H_(2)O_(2)诱导的MIN6细胞氧化损伤具有保护作用,其机制是通过激活PI3K/Akt信号通路来实现的。

腺病毒介导的小鼠胰岛细胞细胞周期蛋白A2基因过表达及其对细胞增殖的影响

目的探讨腺病毒介导的小鼠胰岛细胞细胞周期蛋白A2(cyclin A2)基因过表达及其对细胞增殖的影响。方法将对数生长期的小鼠胰岛素瘤MIN6细胞分为实验组、空病毒对照组及空白对照组,实验组及空病毒对照组分别给予腺病毒介导的cyclin A2基因及空腺病毒载体转染MIN6细胞,空白对照组不给予处理。检测3组MIN6细胞cyclin A2mRNA及蛋白的表达情况,以及细胞增殖活性。结果转染后24 h,实验组cyclin A2 mRNA及蛋白表达水平均高于空病毒对照组及空白对照组(P<0.05);转染后24 h、36 h、48 h、60 h及72 h,实验组的吸光度值均高于空病毒对照组及空白对照组(均P<0.05)。结论腺病毒介导的cyclin A2基因成功转染MIN6细胞,并可促进MIN6细胞增殖。

灵菊七水提物的降糖作用及促胰岛素分泌作用研究

目的观察灵菊七水提物的降糖作用及对胰岛细胞分泌胰岛素的影响。方法采用四氧嘧啶(70 mg.kg-1)诱导的糖尿病模型小鼠和正常小鼠,连续给药7 d后,观察灵菊七水提物(2.5 mg.kg-1、5 mg.kg-1和10 mg.kg-1)对血糖、血清胰岛素水平和糖耐量的影响;采用M IN6胰岛细胞株,观察灵菊七水提物对胰岛素分泌的影响。结果在给药7 d后,灵菊七水提物可明显降低糖尿病小鼠的血糖水平,并可明显降低正常小鼠和糖尿病小鼠的糖耐量,促进胰岛素的分泌;灵菊七水提物对葡萄糖(16.7 mmol.L-1)刺激下胰岛素的分泌明显具有促进作用。结论灵菊七水提物可通过促进胰岛素分泌来降低血糖。

尿石素A抗糖脂毒性改善MIN6胰岛β细胞活力机制靶点研究

目的靶点通路预测及细胞实验验证尿石素A(UA)在糖尿病环境下保护胰岛β细胞的作用机制。方法用Cytoscape软件分析成分药效靶点,以基因本体(GO)、京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析信号通路。将MIN6胰岛β细胞分为3组:对照组、高糖脂模型组、给药组(UA,11.5μg·mL^(-1)),干预24 h。CCK-8法测定细胞活力(光密度值),蛋白质印迹法检测蛋白激酶B(Akt)、哺乳动物雷帕霉素蛋白(mTOR)及其相应磷酸化蛋白(p-Akt、p-mTOR)表达水平。自噬抑制剂氯喹(CQ,50μmol·L^(-1))、AMP依赖的蛋白激酶抑制剂(CC,10μmol·L^(-1))进行进一步反证。结果网络预测发现Akt、mTOR为主要靶点,KEGG分析得到34条信号通路(P<0.05),Akt-mTOR是其中一条重要通路。对照组、高糖脂模型组、给药组的细胞活力分别为99.92±1.84, 47.40±2.78和67.07±2.95;p-Akt表达分别为1.00±0.02, 0.61±0.01和0.79±0.01;p-mTOR表达分别为1.00±0.08,0.54±0.02和0.83±0.03。UA联合CQ干预后,p-Akt、p-mTOR表达分别为0.69±0.02和0.66±0.08。UA联合CC干预后,p-Akt、p-mTOR表达分别为0.67±0.03和0.80±0.07。模型组与对照组比较,或给药组与模型组比较,UA联合抑制剂给药组与单独UA给药组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 UA可能通过激活AMPK和自噬靶向Akt/mTOR信号通路改善胰岛β细胞自噬,对抗糖脂毒性损伤,提高胰岛β细胞活力。

增液汤降糖作用实验研究

目的:研究增液汤的降糖作用及其作用途径。方法:采用正常小鼠和四氧嘧啶(70mg·kg-1)诱导的糖尿病模型小鼠,连续给药7d后,观察增液汤水提物(5,10,15mg·kg-1)对血糖、口服糖耐量、血清胰岛素水平和体重的影响;采用MIN6胰岛细胞观察增液汤水提物(12.5,25,50,100μg·mL-1)对胰岛素分泌的影响。结果:增液汤可明显降低糖尿病小鼠的血糖,改善正常小鼠和糖尿病小鼠的糖耐量,促进胰岛素分泌;增液汤水提物在高糖(16.7mmol·L-1)环境下能够明显促进MIN6胰岛细胞分泌胰岛素。结论:增液汤能降低糖尿病小鼠的血糖,改善正常小鼠和糖尿病小鼠的糖耐量,其作用机制可能与促进胰岛素的分泌有关,与磺酰脲类降糖药的作用途径不同。