活性炭吸附法固定猪胰脂酶的初步研究

初步研究了以活性炭为载体的猪胰脂酶吸附固定.吸附pH和吸附量对吸附固定有重要影响.吸附的最适pH在8左右,酶的比活随吸附量的增加而减小.同时固定化酶有比自由酶更好的热稳定性.

乙醇溶液中Tweens对猪胰脂酶的修饰作用

采用Tween系列表面活性剂在乙醇-水溶液体系中对猪胰脂酶进行修饰,以它们催化酯交换的交换量为指标评价修饰的效果,并且对修饰酶与未修饰酶的热稳定性进行了研究。结果表明:40℃下30 min即可完成Tweens对猪胰脂酶的修饰,但不同Tween的最佳条件并不相同。Tween 20修饰脂肪酶的最佳条件是无水乙醇与水的比例为1∶2(v/v),Tween 20用量为5%;Tween 40和Tween 65修饰猪胰脂酶的最佳条件是无水乙醇与水的比例为1∶2(v/v),用量均为15%;Tween 60修饰猪胰脂酶的最佳条件为无水乙醇与水的比例为1∶2(v/v),用量为20%;Tween 80修饰脂肪酶的最佳条件是无水乙醇与水的比例为1∶3(v/v),用量为5%;Tween 85修饰脂肪酶的最佳条件是无水乙醇与水的比例为1∶3(v/v),用量为15%。修饰后酶的热稳定性实验研究表明,在40～80℃间,修饰酶的催化反活性都高于未修饰酶。Tweens修饰猪胰脂酶能有效提高酶的活性及其热稳定性。

无溶剂体系中Span修饰的猪胰脂酶催化茶油与亚油酸酯交换

在无溶剂体系中以Span20、Span80和Span85修饰的猪胰脂酶（Span20-PPL、Span80-PLL和Span85-PPL）催化茶油与亚油酸进行酯交换，以酯交换量为考察指标，研究Span20、Span80和Span85与猪胰脂酶（PPL）的相互作用对其催化油脂酯交换反应的影响．结果表明：30℃下，相同时间内Span20-PPL、Span80-PPL扣Span85-PPL催化酯交换的交换量与PPL催化酯交换的交换量稍小，24h的酯交换量都在4％～7．5％；50℃下，Span20-PPL、Span80-PPL和Span85-PPL催化酯交换的交换量比PPL催化酯交换的酯交换量高，24h的酯交换量分别为19．9％、22．4％、21．2％和15．6％；70℃下，Span20-PPL、Span80-PPL和Span85-PPL催化酯交换的交换量比PPL催化酯交换的交换量低。24h的酯交换量分剐为23．7％、26．8％、22．3％和31．5％．Span20、Span80和Span85与PPL的相互作用对其催化油脂酯交换结合量的影响与表面活性剂的类型和反应温度有关．

乙醇溶液体系中Span修饰猪胰脂酶的研究

在乙醇-水溶液体系中采用Span系列表面活性剂对猪胰脂酶进行了修饰,以其催化酯交换的交换量为指标衡量修饰的效果,并且比较了修饰酶与未修饰酶的热稳定性差异。结果表明:40℃下30min即可完成Span对猪胰脂酶的修饰,但各种表面活性剂修饰的最佳条件并不相同。Span20修饰脂肪酶的最佳条件是水与乙醇的比例为4:1(v/v),Span20用量为25%;Span40修饰猪胰脂酶的最佳条件是水与无水乙醇的比例为2:1(v/v),Span40用量为20%;Span65修饰猪胰脂酶的最佳条件为水与无水乙醇的比例为1:1(v/v),Span65的用量为20%;Span60、Span80和Span85修饰脂肪酶的最佳条件是水与无水乙醇的比例为3:1(v/v),用量均为20%。通过修饰后酶的热稳定性实验可以看出,六种表面活性剂修饰的酶在30～70℃间催化反活性都高于未修饰酶,在40℃下,修饰酶的催化活性基本达到最高,而未修饰酶要70℃才能达到最高催化活性。Span60修饰脂肪酶的效果优于其它五种表面活性剂。

影响猪胰脂酶催化油茶籽油与亚油酸甲酯酯交换过程中酯交换量和酰基位移因素的研究

研究了无溶剂体系下猪胰脂酶催化油茶籽油与亚油酸甲酯酯交换反应过程中酯交换量和酰基位移的变化。结果显示,反应时间、酶的水活度、加酶量和反应温度对酯交换和酰基位移都有影响。加酶量和反应温度对酰基位移和酯交换量有直接影响,反应时间和酶的水活度通过影响酯交换速率来影响酰基位移。对猪胰脂酶来说,酯交换时酶的水活度在0.12~0.55之间,加酶量不大于10.0%,温度在40~45℃之间,控制合适的反应时间可使产物甘三酯的酰基交换程度较高（24%左右）,酰基位移较小（小于5%）。

大孔吸附树脂固定猪胰脂酶的初步研究

目的 :为促进脂肪酶在工业上的应用 ,对以大孔吸附树脂为载体的猪胰脂酶固定进行了研究。方法 :以吸附法固定 ,用单因素法考察了吸附条件对固定的影响。按Eadie -Hofstee法测定了固定化酶及游离酶的表观米氏常数 ,并具体研究了固定化酶的操作稳定性、热稳定性等性质。结果 :固定化酶的比酯交换能力比游离酶上升 6倍 ;最优的吸附条件为 :pH7.0 ,酶加量30 0mg/g,水分含量 2 0 % ;吸附时间 4h ;固定化酶在含水量 10 %时可稳定操作 5批次 ;同时固定化酶有比游离酶有更好的热稳定性。结论 :以大孔吸附树脂为载体对猪胰脂酶进行固定是可行的 ;与游离酶相比 ,所得固定化酶有着更高的比酯交换能力和更好的稳定性 。

反胶束体系中猪胰脂酶水解维生素E醋酸酯的研究

目的探索反胶束体系中维生素E醋酸酯酶促水解规律。方法以Fe2 + 引发的大豆磷脂 庚烷反胶束体系的脂质过氧化为间接检测手段 ,考察温度、含水量、猪胰脂酶浓度及反应时间等对维生素E醋酸酯酶促水解的影响。结果在TritonX 10 0 /环己烷反胶束体系中 ,猪胰脂酶对维生素E醋酸酯具有水解活性。结论发挥水解活性的最佳温度为 35℃ ,最佳含水量W0 为 12 8,且随着猪胰脂酶浓度的增大 ,维生素E醋酸酯水解程度增大。

猪胰脂酶的固定化研究

拓展脂肪酶的工业应用;以硅藻土为载体进行猪胰脂酶的吸附固定;结果表明,猪胰脂酶的固定化最佳条件为:pH 6.5,离子强度0.03 mol/L,固定化时间1 h。以固定化猪胰脂酶为催化剂对花生油进行酯交换,得到的改造油的脂肪酸组成和猪油较为接近,软脂酸、硬脂酸含量较猪油有所提高,油酸的含量有所下降。该工艺制备的固定化脂肪酶可用于油脂的改性加工。

溶剂体系中猪胰脂酶催化醇解过程中脂肪酸选择性的研究

本研究采用猪胰脂酶催化甘油与脂肪酸甲酯反应,分析反应过程中脂肪酸甘油酯的脂肪酸组成,研究醇解过程中脂肪酸的选择性。结果表明,醇解过程软脂酸的选择性要稍好于硬脂酸;对油酸的选择性好于硬脂酸和亚油酸;而对亚油酸和亚麻酸来说,在反应的开始阶段亚油酸的选择性强于亚麻酸,随着反应时间的延长两者的选择性几乎相同。

猪胰脂酶在制备手性合成结构块中的应用

本文对近年来国外成功应用猪胰脂酶制备手性合成结构块的情况作一简要介绍。

中华绒螯蟹胰脂酶基因克隆及表达分析

采用cDNA末端快速扩增技术(RACE)克隆获得了中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)胰脂酶基因(pancreatic lipase, PL)的cDNA序列全长。该序列全长1 970 bp,开放阅读框长度为1 374 bp,编码457个氨基酸,5’和3’非编码区(UTR)长度分别为372 bp和224 bp。理化分析表明其预测分子量为51.066 kD,理论等电点为4.65。其序列中检测到脂肪酶典型的催化三联体结构、'盖子'结构以及'亲核弯'结构。蛋白同源性和进化树分析表明,中华绒螯蟹胰脂酶和其他物种同源性较高(50%左右),且和甲壳动物聚为一支而与脊椎动物相聚较远。组织表达模式分析表明,EsPL基因主要在肝胰腺、肠道、胸神经节表达较高;幼体发育阶段表达模式分析表明,EsPL基因在溞状幼体Ⅰ~Ⅲ期表达量逐渐递增,Ⅳ期显著下降,Ⅴ期较Ⅳ又显著增加,大眼幼体阶段表达最低;同一脂肪水平下,相比于含高不饱和脂肪酸的鱼油而言,植物油如豆油和亚麻油的添加均会增加胰脂酶基因的表达,且亚麻油鱼油混合油组促进效果最显著。上述结果表明饵料脂类显著影响中华绒螯蟹胰脂酶,从而为提高中华绒螯蟹对饵料脂类利用率提供了研究依据。

猪胰脂酶的非离子表面活性剂修饰对酶促酯交换过程的影响

用非离子表面活性剂（Tween40、Tween65、Span60、Span80、S1170和S1670）在乙醇溶液中修饰猪胰脂酶（procine pancreas lipase,PPLipase）,再用修饰的猪胰脂酶催化茶籽油和亚油酸进行酯交换.通过分析酯交换过程中酯交换量、酰基位移和产物中各组分含量的变化,研究非离子表面活性剂的修饰作用对酶促酯交换过程的影响.研究发现,修饰猪胰脂酶催化酯交换的活性都高于猪胰脂酶.反应达平衡前,各修饰酶所催化的反应酰基位移率都低于猪胰脂酶所催化的反应.反应平衡后,PPLipase催化酯交换的酰基位移最小,约为28%;S1670-PPLipase催化反应的酰基位移最高,约为41%;S1170-PPLipase、Tween40-PPLipase、Tween65-PPLipase、Span80-PPLipase和Span60-PPLipase催化反应的酰基位移在28%～41%之间.反应过程中随着酯交换量不断增加,甘三酯含量不断减少;甘二酯含量在反应开始的最初阶段迅速增加,而后基本维持不变;在反应开始的最初阶段未检测到甘一酯,反应接近平衡时含量快速增加.

浅谈春季肉鸡饲养管理要点

肉鸡相对于其他品种的鸡而言,不爱运动,生长速度快,采食量大,饲料回报率高,出栏也快,养殖经济效益高。肉鸡之所以发育快,与其消化系统营养吸收有关。肉鸡从10日龄开始,消化道容量快速增加,酶分泌量快速增多,消化营养吸收功能显著提升。随着肉鸡日龄的增加,其消化系统内的蛋白酶、胰脂酶、淀粉酶的浓度也随之增加。

柿单宁的体外降胆固醇作用

采用分光光度法和气相色谱法研究了柿单宁对胰脂酶活性和胆固醇酯酶活性的抑制作用,以及柿单宁与胆汁酸、胆固醇的结合能力。结果表明:柿单宁对胰脂酶具有显著的抑制效果,其半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)为(0.445±0.021)mg/m L;抑制类型为非竞争性抑制,抑制常数Ki为0.406 mg/m L;柿单宁对胆固醇酯酶也具有显著的抑制作用,其半数抑制浓度IC50为(0.442±0.017)mg/m L,抑制类型为非竞争性抑制,抑制常数Ki为0.488 mg/m L。不同质量浓度的柿单宁对胆酸(cholic acid,CA)、脱氧胆酸(deoxycholic acid,DCA)都有一定的结合能力,10 mg/m L的单宁与CA、DCA的结合率分别为58%和94%;柿单宁对胆固醇胶束化溶液有较强的结合能力,0.20 mg/m L的单宁对其抑制率达到了67%。另外,在不同的p H值下,柿单宁对胆固醇都有一定的结合作用,其中p H 7.0时的结合能力明显强于p H 2.0时的结合能力。总之,柿单宁可抑制胰脂酶活性和胆固醇酯酶活性,并与胆固醇和胆汁酸结合,减少胃肠道对脂肪的吸收,这可能是柿单宁在体内发挥强降胆固醇作用的原因之一。

酶促乌桕脂分子结构调整制类可可脂研究

以中国特有的木本油料油脂乌桕脂为原料，以中国产量很大的动物脂肪酶胰脂酶为催化剂，在己烷体系中与硬脂酸发生酸解反应，从而使产物甘油三酰酯结构近似于天然可可脂。研究表明：反应体系的含水量、反应温度、固定化酶量、反应时间、己烷含量及反应底物之比均对反应结果有一定的影响，在单因素系统研究的基础上，正交试验结果表明，最佳反应条件为：加水量０．１％，反应温度５０℃，加酶量１７０ｍｇ，反应时间１２ｈ，溶剂量４ｍ１，底物比影响较小。还对放大实验产物进行系统的组份、结构和性质分析，结果不仅与天然可可脂相近似，而且与丹麦Ｎｏｖｏ公司的商品微生物固定化酶ＬｉｐｏｚｙｍｅＩＭ改性结果相近似。

甘油三酯脂酶家族中的新成员——内皮源性脂酶

脂酶是一种水溶性的酶,能水解甘油三酯、磷脂和胆固醇酯等一些非水溶性物质中的酯键,对食物中脂肪的吸收、平衡能量和血浆脂蛋白的代谢起着重要的作用。对脂酶的研究已有150多年的历史,到目前已发现多种具有上述功能的酶,这些酶不仅功能相似,而且氨基酸序列和基因结构相近,由于最初发现的酶主要以甘油三酯为作用底物,所以将这些脂酯统称为甘油三酯脂酶基因家族。其成员包括胰脂酶(pancreatic lipase PL)、脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase LPL)和肝脂酶(hepatic lipase HL)、胰脂酶相关蛋白1、胰脂酶相关蛋白2、磷酯酰丝氨酸磷脂酶A1等。新近,这个家族又迎来了一个新的成员,该家族中唯一由内皮细胞合成的脂酶——内皮源性脂酶(endothelial lipase EL)。本文就内皮源性脂酶的基因结构、分布、功能做一综述。

家畜的缺硒症和硒中毒及其防治

据美国俄亥俄州农业研究发展中心的科研报告,近几年许多国家发现缺硒的地区,引起家畜的普遍缺硒症。该中心通过试验证明:给奶牛补饲硒,可以减轻奶牛分娩过程中的胎衣滞留现象。 硒是动物生命活动必需的营养元素之一。硒具有维生素E相似的抗氧化功能。硒在动物体内影响胰脂酶的形成并对酶系统起调节作用,与氧化磷酸化作用有关;硒还是谷胱甘肽过氧化酶的主要成份,能防止细胞膜不受脂类代谢副产物的破坏;此外,硒对畜禽的生长有刺激作用。 动物吸收到的硒大部分首先进入血浆,由此分布到机体所有组织中,包括骨骼、被毛、白细胞和奶中,还可经由胎盘传给胎儿。

脂肪酸在低芥酸菜油甘三酯中的分布模式(R—分布)

关于甘三酯中脂肪酸分布的假说很多,各种假说都只是在一定范围内对一类或几类油脂具有使用意义,对于其它类油脂则没有通用性。R—分布仅适用于低芥酸莱油,利用它可直接由其脂肪酸组成计算甘三酯中脂肪酸的分布及甘三酯的组份,并证实对于低芥酸菜油,R—分布比其它类似分布假设的准确性更好。 国内低芥酸品种正处在发展阶段,R—分布能有效地应用于国产低芥酸菜油,为快速了解其甘三酯结构的信息提供了一条方便的途径,从而代替了复杂的胰脂酶水解的分析过程,这不仅具有一定的理论意义,而且也有一定的经济价值。

脂肪酸碳链长度对甘三酯体外模拟消化的影响

用pH-stat法模拟不同脂肪酸链长甘三酯的人体体外消化过程,从乳化粒径的角度研究脂肪酸碳链长度对甘三酯体外消化速率的影响。结果表明:三辛酸甘油酯(C8)乳化后,平均粒径最小,其他与之碳数相差越多则粒径越大;整体消化过程中三辛酸甘油酯(C8)的消化速率最高,其他与之碳数相差越多则消化速率越小。乳糜微粒的粒径大小与甘三酯的消化速率呈负相关的关系。消化速率的大小顺序为三辛酸甘油酯(C8)>三月桂酸甘油酯(C12)>三乙酸甘油酯(C2)>三硬脂酸甘油酯(C18)。