MiR-217对小鼠胰腺成体干细胞增殖的调控作用

为了进一步研究miR-217在小鼠胰腺成体干细胞生长过程中的调控作用,在培养的胰腺成体干细胞中过表达miR-217,用Western blot和免疫荧光的方法检测miR-217对细胞增殖的影响。结果显示,miR-217能够明显抑制胰腺成体干细胞增殖相关蛋白Cyclin D1和Ki-67的表达。使用生物信息学软件预测miR-217的靶基因,并通过双荧光素酶报告基因的方法验证了miR-217对靶点的靶向性,实验结果表明,miR-217能够抑制PMIR-REPORT-Sirt1-3'UTR荧光素酶活性。进一步在二维培养的胰腺成体干细胞中,过表达miR-217检测Sirt1的表达变化,q PCR和Western blot表明在胰腺成体干细胞中miR-217能够抑制Sirt1的蛋白水平的表达,但对m RNA水平没有影响。在胰腺成体干细胞中分别加入Sirt1的抑制剂尼克酰胺和激动剂白藜芦醇,尼克酰胺能够抑制胰腺成体干细胞的增殖,而白藜芦醇促进了胰腺成体干细胞的增殖。以上结果说明,miR-217通过Sirt1调控胰腺成体干细胞的生长,低表达的miR-217有助于维持胰腺成体干细胞的增殖。

胰岛素样生长因子Ⅱ及雷帕霉素的联合干预在胰腺干细胞分化中的保护机制研究

目的研究免疫抑制剂雷帕霉素抑制新生猪胰腺成体干细胞（porcine neonatal pancreas cell clusters，NPCCs）分化和增殖的机制，探索能有效降低雷帕霉素不良反应的治疗方法。方法雷帕霉素/胰岛素样生长因子Ⅱ（insulin-like growth factor-Ⅱ，IGF-Ⅱ）处理NPCCs，检测caspase-3试验和[^3H]-胸腺嘧啶摄取试验分析细胞凋亡和增生，RT-PCR及Western blot分析胰岛细胞特定基因胰岛素、PDX-1、NeuroD/Beta2以及IGF-Ⅱ下游转录因子Foxo1的表达，评估胰腺成体干细胞的分化能力。结果NPCCs用雷帕霉素处理后，抑制β细胞的增殖、增加细胞凋亡，降低胰岛素分泌能力，抑制胰岛细胞特定基因PDX-1和NeuroD/Beta2的表达，明显降低IGF-Ⅱ的表达，增加Foxol的表达并诱导Foxol从胞质到细胞核的异位。雷帕霉素与IGF-Ⅱ的联合处理降低雷帕霉素的不良反应，抑制β细胞数量及胰岛素含量的减少，修复胰岛素、PDX-1、NeuroD/Beta2的表达，抑制Foxo1的表达及细胞内异位。结论IGF-Ⅱ及Foxol基因的异常表达是雷帕霉素抑制NPCCs的增殖和分化的重要诱因，且IGF-Ⅱ干预能有效降低雷帕霉素对NPCCs分化的不良反应。