MicroRNA-105-5p/PPM1A对胰腺癌PANC-1细胞增殖、迁移及侵袭的机制研究

目的探讨microRNA-105-5p(miR-105-5p)/PPM1A对胰腺癌PANC-1细胞增殖、迁移、侵袭及上皮细胞向间质转化(EMT)进程的影响及其潜在作用机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-105-5p在人胰腺导管上皮细胞hTRET-HPNE和胰腺癌细胞PANC-1、AsPC-1、Bxpc-3中的表达。利用Kaplan-Meier Plotter在线工具探讨miR-105-5p与胰腺癌患者预后的关系。在PANC-1细胞中分别转染mimic NC、miR-105-5p mimic、inhibitor NC、miR-105-5p inhibitor。CCK-8法、划痕实验、Transwell实验分别检测各组细胞的增殖、迁移及侵袭能力;qRT-PCR检测miR-105-5p对E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、ZEB1表达的影响。生物信息学方法预测miR-105-5p的候选靶基因,并对候选靶基因进行GO和KEGG富集分析。双萤光素酶实验检测miR-105-5p与PPM1A的靶向关系。qRT-PCR检测在PANC-1细胞中分别转染mimic NC、miR-105-5p mimic、inhibitor NC、miR-105-5p inhibitor后PPM1A的表达。免疫荧光实验检测PPM1A在人胰腺导管上皮细胞hTRET-HPNE和胰腺癌细胞PANC-1、AsPC-1、Bxpc-3中的表达。在PANC-1细胞中分别转染mimic NC+pcDNA3.1、mimic NC+pcDNA3.1-PPM1A、miR-105-5p mimic+pcDNA3.1-PPM1A后,通过挽救实验进一步研究miR-105-5p inhibitor与PPM1A在胰腺癌细胞中的相互作用关系。结果胰腺癌细胞PANC-1、AsPC-1、Bxpc-3中miR-105-5p mRNA相对表达量高于hTRET-HPNE细胞中miR-105-5p mRNA相对表达量(P<0.05),以PANC-1细胞中的相对表达量最高。miR-105-5p高表达与胰腺癌患者的不良预后有关(P<0.05)。miR-105-5p mimic组细胞增殖、迁移及侵袭能力均高于mimic NC组(P<0.05)。与mimic NC比较,miR-105-5p mimic下调E-cadherin mRNA表达,上调N-cadherin、Vimentin、ZEB1 mRNA表达(P<0.05)。转染miR-105-5p inhibitor后得到相反的结果。双萤光素酶实验证实miR-105-5p与PPM1A存在靶向关系。免疫荧光实验显示在胰腺癌细胞PANC-1、AsPC-1、Bxpc-3中PPM1A的荧光强度低于人胰腺导管上皮细胞hTRET-HPNE(P<0.05)。挽救实验表明miR-105-5p可部分挽救PPM1A对PANC-1细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用(P<0.05)。结论miR-105-5p靶向PPM1A促进胰腺癌PANC-1细胞的增殖、迁移及侵袭。

PPM1A/TGF-β1/Smads轴对胰腺癌PANC-1细胞生物学行为的影响

目的:探讨镁依赖性蛋白磷酸酶1A(PPM1A)/TGF-β1/Smads轴对胰腺癌PANC-1细胞生物学行为的影响及其可能作用机制。方法:①通过组织芯片免疫组织化学染色检测88例胰腺癌组织和14例癌旁正常胰腺组织中PPM1A的表达情况。利用qRT-PCR、免疫荧光实验检测胰腺癌细胞PANC-1、AsPC-1和BxPC-3与正常胰腺导管上皮细胞HPNE中PPM1A的表达情况。②取PANC-1细胞,采用脂质体转染法分4组,分别转染si-NC、si-PPM1A、pcDNA3.1、pcDNA3.1-PPM1A,通过CCK-8和Transwell实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力,Western blot法检测TGF-β1、p-Smad2/Smad2和p-Smad3/Smad3蛋白的表达情况。③取PANC-1细胞,转染si-PPM1A或pcDNA3.1-PPM1A后,再加入TGF-β1信号通路抑制剂SB431542或活化因子TGF-β1,通过CCK-8实验检测细胞增殖能力。结果:①与癌旁正常胰腺组织相比,胰腺癌组织中PPM1A蛋白表达减少(P<0.05)。②与正常胰腺导管上皮细胞HPNE相比,胰腺癌细胞PANC-1、AsPC-1和BxPC-3中PPM1A mRNA和蛋白表达减少(P<0.05)。③与si-NC组相比,si-PPM1A组细胞增殖、迁移和侵袭能力增加,TGF-β1/Smads信号通路中TGF-β1、p-Smad2/Smad2和p-Smad3/Smad3表达水平升高(P<0.05);与pcDNA3.1组相比,pcDNA3.1-PPM1A组细胞上述指标的变化相反(P<0.05)。④SB431542可逆转si-PPM1A对PANC-1细胞增殖的促进作用,TGF-β1可逆转pcDNA3.1-PPM1A对PANC-1细胞增殖的抑制作用(P<0.05)。结论:PPM1A可能通过抑制TGF-β1/Smads信号通路抑制胰腺癌PANC-1细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

过表达lnc-TNFAIP3基因对胰腺癌PANC-1细胞生物学行为的影响

目的:应用慢病毒转染方法构建lnc-TNFAIP3基因过表达的胰腺癌细胞株,并观察其细胞行为学变化。方法:过表达质粒和慢病毒制备,转染进人胰腺癌细胞株PANC-1中,采用CCK-8、平板克隆实验检测其细胞增殖能力,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测蛋白表达,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况。结果:lnc-TNFAIP3基因过表达慢病毒成功转染PANC-1细胞,其细胞增殖、迁移和侵袭能力减弱,细胞周期和细胞凋亡无显著差异,相关蛋白表达无显著差异。结论:转染过表达lnc-TNFAIP3基因的慢病毒构建的人胰腺癌细胞系PANC-1细胞行为发生了变化,提示lnc-TNFAIP3可能是一个有前景的胰腺癌治疗靶点,为lnc-TNFAIP3基因在胰腺癌中的研究提供了理论和实验数据。

茯苓酸对人胰腺癌PANC-1细胞迁移、侵袭和上皮间质转化的抑制作用

目的:探讨茯苓酸(PA)通过上调活化转录因子3(ATF3)和热休克蛋白家族A成员6(HSPA6)表达对胰腺癌PANC-1细胞迁移、侵袭和上皮间质转化(EMT)的作用,并阐明其可能的作用机制。方法:胰腺癌PANC-1细胞分为空白对照组和不同浓度(2、5、10、20、30、40和50μmol·L^(-1))PA处理组,采用CCK-8法检测各组PANC-1细胞的细胞活性。不同浓度(0、10、30和50μmol·L^(-1))PA作用于PANC-1细胞,采用Transwell小室实验检测PANC-1细胞迁移和侵袭能力,Western blotting法检测PANC-1细胞中EMT相关蛋白表达水平。将10只BALB/c nude裸鼠随机分为对照组和PA组,每组5只,裸鼠皮下注射PANC-1细胞,待肿瘤体积达到60 mm3时,PA组裸鼠腹腔注射25 mg·kg^(-1)PA,对照组裸鼠注射等量生理盐水,测量肿瘤体积和瘤质量,免疫组织化学法检测各组裸鼠移植瘤组织中Ki-67表达情况。通过GEO2R软件分析GSE64111数据集中PA处理及未处理胰腺癌细胞的差异表达基因。不同浓度(0和30μmol·L^(-1))PA作用于PANC-1细胞,采用Western blotting法检测PANC-1细胞中HSPA6和ATF3蛋白表达水平。将30μmol·L^(-1)PA处理的PANC-1细胞分为si-NC组和si-ATF3组,分别转染对照siRNA和ATF3siRNA,采用Western blotting法检测各组细胞中HSPA6和ATF3蛋白及EMT相关蛋白表达水平,Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭能力。结果:CCK-8法,与空白对照组比较,不同浓度PA处理组PANC-1细胞的细胞活性呈浓度依赖性降低(P<0.05)。Transwell小室实验,与空白对照组比较,不同浓度PA处理组PANC-1细胞迁移能力和侵袭能力呈浓度依赖性降低(P<0.05)。Western blotting法,与空白对照组比较,不同浓度PA组PANC-1细胞中上皮钙黏素蛋白表达水平升高(P<0.05),神经钙黏素和波形蛋白表达水平降低(P<0.05)。裸鼠成瘤实验,与对照组比较,PA组裸鼠移植瘤体积和瘤质量明显降低(P<0.05);免疫组织化学,与对照组比较,PA组裸鼠移植瘤Ki-67染色较浅。GEO2R软件分析和Western blotting法,与空白对照组比较,PA处理组PANC-1细胞中HSPA6和ATF3蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。Western blotting法,与si-NC组比较,si-ATF3组PANC-1细胞中HSPA6、ATF3和上皮钙黏素蛋白表达水平明显降低(P<0.05),神经钙黏素和波形蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。Transwell小室实验,与si-NC组比较,si-ATF3组PANC-1细胞迁移和侵袭能力明显增加(P<0.05)。结论:PA通过上调HSPA6和ATF3表达抑制胰腺癌细胞迁移、侵袭和EMT,从而发挥抗胰腺癌作用。

吉西他滨联合热疗对胰腺癌PANC-1细胞凋亡的影响及机制研究

目的:探索吉西他滨(GEM)联合热疗对胰腺癌PANC-1细胞凋亡的影响及机制。方法:将人胰腺癌PANC-1细胞随机分为对照组(无任何处理)、GEM组(给予GEM)和热化疗组(给予热疗联合GEM)。比较各组细胞增殖、凋亡、活性氧(ROS)、特异性蛋白1(Sp1)及其下游蛋白表达情况。评估ROS抑制剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)对各组细胞增殖及相关蛋白表达的影响。结果:GEM对PANC-1细胞增殖的抑制作用呈剂量和时间依赖性。30μmol/L GEM对PANC-1细胞增殖的抑制作用高于其他剂量(均P<0.05)。在GEM治疗前热疗1 h细胞存活率显著低于GEM与热疗同时1 h和GEM治疗后热疗1 h(均P<0.05)。与对照组比较,GEM组和热化疗组细胞凋亡率增加,且热化疗组高于GEM组(均P<0.05)。与对照组比较,GEM组和热化疗组ROS升高,且热化疗组高于GEM组(均P<0.05)。与对照组比较,GEM组和热化疗组Sp1、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白表达水平降低,且热化疗组低于GEM组(均P<0.05)。与GEM组比较,热化疗组环氧合酶-2(Cox-2)蛋白表达水平降低(P<0.05)。加入NAC后热化疗组细胞存活率较加入前升高,30μmol/L NAC对PANC-1细胞增殖的影响更显著(均P<0.05)。30μmol/L NAC显著恢复了Sp1及其下游Cox-2和Bcl-2蛋白的表达(均P<0.05)。结论:GEM联合热疗通过诱导ROS的产生抑制胰腺癌PANC-1细胞增殖,促进细胞凋亡,进而抑制Sp1及其下游相关蛋白的表达。

CXXC4调控胰腺癌PANC-1细胞迁移和侵袭的实验研究

目的探究CXXC指蛋白4(CXXC4)对胰腺癌PANC-1细胞迁移、侵袭及上皮-间充质转化(EMT)进程的影响。方法组织芯片免疫组织化学染色实验检测14份癌旁胰腺组织和87份胰腺癌组织中CXXC4表达情况。采用免疫荧光实验检测人正常胰腺导管上皮细胞HPNE及人胰腺癌细胞PANC-1、AsPC-1和BxPC-3中CXXC4蛋白的表达水平。采用Western blot实验检测CXXC4敲降和过表达的转染有效性,划痕和Transwell实验分析敲降或过表达CXXC4对PANC-1细胞迁移、侵袭的影响。采用Western blot和免疫荧光实验检测细胞EMT标志物E-cadherin、Vimentin和ZEB2的表达水平。通过STRING网站预测与CXCC4有相互作用的蛋白,筛选出的蛋白进行GO和KEGG富集分析。结果免疫组化分析结果表明,CXXC4在胰腺癌组织中的表达水平低于癌旁胰腺组织(P<0.05)。免疫荧光实验结果显示,与HPNE细胞相比,CXXC4在PANC-1、AsPC-1和BxPC-3中的荧光强度均显著降低(均P<0.05)。划痕和Transwell实验结果显示,与si-NC组相比,si-CXXC4组PANC-1细胞迁移和侵袭能力增强(P<0.05);与pcDNA3.1组相比,pcDNA3.1-CXXC4组PANC-1细胞迁移和侵袭能力减弱(P<0.05)。Western blot和免疫荧光实验结果显示,与si-NC组(结果标准化为1)相比,si-CXXC4组PANC-1细胞上皮样细胞标志物E-cadherin蛋白表达(0.48±0.10)降低(P<0.05),而间充质样标志物Vimentin(1.42±0.06)和ZEB2(1.86±0.06)的表达升高(P<0.05);与pcDNA3.1组(结果标准化为1)相比,pcDNA3.1-CXXC4组PANC-1细胞上皮样细胞标志物E-cadherin蛋白表达(2.21±0.42)升高(P<0.05),而间充质样标志物Vimentin(0.54±0.05)和ZEB2(0.39±0.02)蛋白表达降低(P<0.05)。STRING网站预测出9个蛋白与CXXC4有密切的作用。结论CXXC4抑制胰腺癌PANC-1细胞迁移、侵袭及EMT进程。

华蟾素联合健择对人胰腺癌PANC-1细胞增殖及细胞周期的影响

目的观察华蟾素联合健择对人胰腺癌PANC-1细胞增殖及细胞周期的影响。方法①采用MTT法检测华蟾素联合健择对人胰腺癌PANC-1细胞的增殖作用;采用流式细胞仪检测不同浓度华蟾素对人胰腺癌细胞PANC-1的细胞周期的影响;采用Western Blot检测PANC-1细胞pRb和Bax的蛋白表达水平。②将人胰腺癌PANC-1移植瘤裸小鼠随机分为对照组、健择组、华蟾素组、华蟾素加健择组,予药物干预后观察移植瘤生长情况,计算各组的抑瘤率。结果人胰腺癌细胞株PACN-1预先给予浓度为0.5 U/ml的华蟾素2 h后,再加入不同浓度的健择后的IC50为0.00 275μg/ml;随着华蟾素浓度的增加,细胞周期停滞于S期;pRb的蛋白表达逐渐增强,而Bax的蛋白表达变化不显著。健择组、华蟾素组、华蟾素加健择组的抑瘤率分别是59.79%、64.96%,65.75%;华蟾素联合健择组与健择组、对照组之间有显著性差异(P<0.05)。结论华蟾素联合健择对人胰腺癌细胞PANC-1增殖有明显抑制作用,效果优于单纯健择组;华蟾素可使PANC-1细胞中的pRb高表达,将细胞周期阻滞于S期,这是其协同作用的机制之一。

β-榄香烯对人胰腺癌Panc-1细胞凋亡的影响

目的观察β-榄香烯对人胰腺癌Panc-1细胞凋亡的影响,探讨其作用机制。方法β-榄香烯浓度设置为10、20、40、80、160μg/m L,作用于体外培养的Panc-1细胞24、48、72 h。台盼蓝拒染法检测Panc-1细胞抑制率;TUNEL法检测Panc-1细胞凋亡;Hoechst33258荧光染色观察Panc-1细胞核变化;ELISA检测Panc-1细胞Caspase-3、8、9活性;Western blot检测Panc-1细胞Fas、Fas L、细胞色素C(Cyt c)、凋亡诱导因子(AIF)蛋白表达。结果与对照组比较,β-榄香烯作用Panc-1细胞24、48、72 h,Panc-1细胞抑制率明显增加(P<0.05,P<0.01),细胞凋亡率明显增加(P<0.01,P<0.001),并呈时间/浓度依赖性;β-榄香烯作用Panc-1细胞72 h,Panc-1细胞核可见明显碎裂,染色质浓缩,呈强蓝色荧光,形成凋亡小体;β-榄香烯作用Panc-1细胞48 h,Caspase-3、8、9活性明显增加(P<0.05,P<0.01),Fas、Fas L、Cyt c及AIF蛋白表达明显增强(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论β-榄香烯能够抑制Panc-1细胞增殖、诱导细胞凋亡,其可能激活细胞内死亡受体途径及线粒体凋亡途径发挥抗肿瘤作用。

蛹虫草菌丝体与冬虫夏草抑制人胰腺癌PANC-1细胞株增殖作用的比较研究

目的比较人工培养的蛹虫草菌丝体与天然冬虫夏草抑制人胰腺癌PANC-1细胞株增殖的活性,并探讨其作用机制。方法 MTT法分析蛹虫草菌丝体和天然冬虫夏草对PANC-1细胞的增殖抑制作用,Hoechst33258染色检测细胞凋亡,Western blot分析细胞凋亡和自噬相关蛋白变化。结果蛹虫草菌丝体和天然冬虫夏草都能通过诱导细胞自噬而非凋亡途径,呈浓度依赖地降低胰腺癌PANC-1细胞的存活率。癌基因STAT3的总蛋白和磷酸化水平均明显降低。蛹虫草菌丝体处理后PANC-1细胞促存活蛋白Mcl-1和Survivin的表达水平明显降低,而冬虫夏草并无此作用。结论人工培养的蛹虫草菌丝体与天然冬虫夏草相比,具有相似或更强的体外抗胰腺癌细胞增殖活性。

人参皂苷CK联合5-氟尿嘧啶对人胰腺癌PANC-1细胞的增殖、凋亡及上皮间质转化的影响

目的:研究人参皂苷CK联合5-氟尿嘧啶(5-FU)对人胰腺癌PANC-1细胞的增殖、凋亡及上皮间质转化(EMT)的影响。方法:将对数生长期的PANC-1细胞分为空白对照组、人参皂苷CK组(30 mg/L)、5-FU组(25 mg/L)和联用组(人参皂苷CK 30 mg/L+5-FU 25 mg/L)。采用MTT法检测各组细胞作用24、48、72 h后的细胞增殖抑制率,流式细胞术检测作用48 h后的细胞凋亡率,酶联免疫吸附法检测作用24、48、72、96 h后细胞中纤连蛋白表达,Western blot法检测作用48 h后细胞中波形蛋白、N-钙黏蛋白、E-钙黏蛋白、蛋白激酶(Akt)及磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达。结果:人参皂苷CK、5-FU及其二者联用对细胞的增殖均有抑制作用;与空白对照组比较,人参皂苷CK组、5-FU组和联用组各作用时间点的早期和晚期凋亡率、E-钙黏蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),纤连蛋白、波形蛋白、N-钙黏蛋白表达水平和p-Akt/Akt水平均明显降低(P<0.05),其中联用组上述指标效果均优于人参皂苷CK组和5-FU组(P<0.05)。结论:人参皂苷CK和5-FU均可抑制PANC-1细胞增殖、诱导细胞凋亡、抑制EMT,该作用可能与抑制磷脂酰肌醇3-激酶/Akt通路有关;且二者联用效果更好。

人胰腺癌PANC-1细胞株中不同亚群放射敏感性的比较分析

目的研究人胰腺癌PANC-1细胞株中干性细胞放射敏感性,并探讨其放射抗拒的可能机制。方法应用流式细胞仪分选CD44+CD24+、CD44-CD24+、CD44+CD24-和CD44-CD24-细胞亚群;照射后,计算放射增敏比;利用流式细胞术检测凋亡及周期分布,并结合DCFH-DA探针检查各亚群活性氧簇(ROS)水平。结果 PANC-1细胞中CD44+细胞比例约为92.0%,CD24+细胞比例约为4.7%。照射前4组凋亡差异无统计学意义(P>0.05);照射后CD44+CD24+的凋亡比例最低(P<0.01)。照射前后CD44+CD24+的G0/G1期比例最高,显著高于其他3组(P<0.01)。照射后CD44+CD24-、CD44-CD24+和CD44-CD24-放射增敏比分别为1.61、1.81、1.94;照射后CD44+CD24+ROS水平最低,平均荧光强度显著低于其他3组(P<0.01)。结论人胰腺癌PANC-1细胞株中干性细胞大多处于静止期,且低ROS水平,因此考虑胰腺癌干性细胞的放射抗拒与此有关。

二氢青蒿素抑制胰腺癌PANC-1细胞GLUT1表达的实验研究

目的研究二氢青蒿素对胰腺癌PANC-1细胞的抑制作用和对GLUT1表达的调节作用及相关的信号通路。方法使用不同浓度的二氢青蒿素(0μM、10μM和60μM)对胰腺癌PANC-1细胞进行干预。在不同时间点(0h、24h和48h)使用MTT法对PANC-1细胞活性进行测定。在干预48h后,使用qPCR对二氢青蒿素干预的PANC-1细胞GLUT1mRNA的表达水平进行测定。使用western blot对二氢青蒿素干预的PANC-1细胞GLUT1蛋白表达水平以及PI3K和Akt磷酸化水平进行测定。结果使用不同浓度二氢青蒿素(0μM、10μM和60μM)对胰腺癌PANC-1细胞进行干预后,细胞活性呈时间依赖性和浓度依赖性下降,差异均有统计学意义(P均<0.05)。二氢青蒿素干预48h后,胰腺癌PANC-1细胞GLUT1mRNA和蛋白的表达水平以及PI3K和Akt磷酸化水平水平呈浓度依赖性的下降,差异均存在统计学意义(P均<0.05)。结论本基础研究提示二氢青蒿素可以通过调控PI3K/Akt信号通路的活化水平下调胰腺癌PANC-1细胞GLUT1mRNA和蛋白的表达,并对肿瘤细胞的增殖有显著抑制作用。该实验结果为进一步二氢青蒿素应用于胰腺癌等肿瘤的临床治疗奠定了一定的基础。

PD98059对胰腺癌Panc-1细胞株及裸鼠荷瘤增殖、凋亡的影响

目的:探讨MAPK/ERK1/2细胞信号通路在胰腺癌演化中的作用和机制.方法:用不同浓度PD98059处理Panc-1细胞及裸鼠,采用MTT法观察其对胰腺癌细胞增殖的影响,利用流式细胞仪检测胰腺癌细胞周期以及细胞凋亡的变化,使用Hoechst33258染色观察凋亡细胞的形态,应用Westernblot检测裸鼠荷瘤MAPK/ERK1/2通路P-ERK1/2蛋白的表达变化.结果:不同浓度的PD98059均可显著抑制胰腺癌Panc-1细胞的增殖(均P<0.05),且随着处理时间的延长,PD98059浓度的增加,其抑制能力逐渐增强.96h50μmol/L的PD98059抑制Panc-1细胞增殖的能力最强,其A490与对照相比具有统计学差异(0.391±0.029vs0.994±0.057,P<0.05).此时Panc-1细胞的凋亡率较对照组明显增加(11.77%±1.33%vs1.13%±0.19%,P<0.05),而20μmol/L的PD98059处理后,细胞凋亡率与对照组无明显增加.PD98059同时可以降低裸鼠荷瘤P-ERK1/2蛋白的表达,其完全抑制浓度(50μmol/L)具有最强的抑制能力.结论:MAPK/ERK1/2信号通路是调控胰腺癌细胞重要的因素之一,其作用机制与磷酸化的ERK1/2蛋白有关.

姜黄素对人胰腺癌PANC-1细胞甲基化转移酶表达影响的体外研究

目的探讨姜黄素对人胰腺癌PANC-1细胞甲基化转移酶(DNMTs)基因表达的影响及其作用机制。方法将体外培养的PANC-1细胞分为对照组、吉西他滨组、姜黄素组和联合组。各组分别干预48 h后,采用CCK8法检测人胰腺癌PANC-1细胞的增殖情况,采用RT-PCR法检测DNMTs mRNA表达情况,采用Western blotting法检测DNMT1和Caspase-3蛋白表达水平。结果 1联合组PANC-l细胞增殖抑制率高于姜黄素组和吉西他滨组(P<0.05)。2吉西他滨组、姜黄素组和联合组DNMT1及DNMT3mRNA表达均较对照组降低(P<0.05);联合组低于吉西他滨组和姜黄素组(P<0.05)。3吉西他滨组、姜黄素组和联合组DNMT1蛋白表达均较对照组明显下调(P<0.05,P<0.01),Caspase-3蛋白表达均较对照组明显上调(P<0.01);联合组与吉西他滨组和姜黄素组比较有显著差异(P<0.05)。结论姜黄素可协同吉西他滨促进胰腺癌细胞的凋亡,其机制与调控胰腺癌PANC-1细胞癌基因的去甲基化作用有关。

丹皮酚对胰腺癌PANC-1细胞凋亡及GRP78/TRAF2信号通路的影响

目的:探讨丹皮酚对胰腺癌PANC-1细胞增殖、迁移、凋亡作用及其对GRP78/TRAF2信号通路的影响。方法:体外培养胰腺癌PANC-1细胞,通过丹皮酚干预,分别处理0h、24h、48h、72h后,采用CCK-8法检测细胞增殖能力,集落试验检测细胞克隆能力,划痕试验检测细胞迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡水平。将PANC-1细胞分为空白对照组、100μg/ml丹皮酚组和200μg/ml丹皮酚组,采用Western blot法检测细胞内质网应激相关蛋白(GRP78和TRAF2)和凋亡相关蛋白(Cleaved Caspase-12、Cleaved Caspase-3和Bax)的表达,并加入内质网应激抑制剂4-PBA(4-phenylbutyric acid)观察蛋白表达的变化。结果:CCK-8法、集落试验、划痕试验结果显示丹皮酚能显著抑制细胞增殖、克隆及迁移能力,流式细胞术结果显示丹皮酚能够诱导细胞凋亡;丹皮酚能够上调GRP78、TRAF2、Cleaved Caspase-12、Cleaved Caspae-3和Bax的表达;与单用丹皮酚组比较,4-PBA联合丹皮酚组会抑制GRP78、TRAF2及Cleaved Caspase-12的上调作用。结论:丹皮酚可抑制细胞增殖和迁移,诱导细胞凋亡;丹皮酚促凋亡机制可能与上调GRP78/TRAF2信号通路相关。

十字孢碱对胰腺癌Panc-1细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨十字孢碱(staurosporine,ST)对人的胰腺癌细胞株Panc-1增殖和凋亡的影响及其机制.方法:采用CCK-8法检测ST对Panc-1细胞的增殖抑制作用;Hoechst 33258荧光染色观察ST对Panc-1细胞凋亡形态的影响;流式细胞术检测不同浓度ST对Panc-1细胞凋亡率和周期分布的影响;蛋白质印迹法检测不同浓度ST对Panc-1细胞周期蛋白cyclin A、cyclin D1、Cdk4和P21表达的影响.结果:ST对Panc-1细胞的增殖有明显抑制作用(P<0.05),并且这种抑制作用呈浓度和时间依赖性.Hoechst 33258荧光染色观察发现,ST能明显诱导Panc-1细胞出现典型的凋亡形态学改变.流式细胞术检测发现,与对照组相比,ST可诱导Panc-1细胞凋亡率明显增加(P<0.05),并引起细胞周期阻滞于G1期(P<0.05).蛋白质印迹法检测结果显示,Panc-1细胞经ST处理后cyclin D1、Cdk4蛋白表达明显降低(P<0.05),P21蛋白表达则明显增加(P<0.05);低浓度ST上调Panc-1细胞中cyclin A的表达,而高浓度ST则下调cyclin A的表达(P<0.05).结论:ST可显著抑制胰腺癌Panc-1细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能是通过阻滞细胞周期于G1期,进而抑制肿瘤细胞生长并促进细胞凋亡.

二脱甲氧基姜黄素对胰腺癌Panc-1细胞抑制作用的体外实验研究

目的:研究二脱甲氧基姜黄素对人胰腺癌细胞Panc-1的体外抑制作用。方法:提取二脱甲氧基姜黄素;将不同浓度二脱甲氧基姜黄素作用于人胰腺癌细胞Panc-1,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测胰腺癌细胞的增殖活性;采用荧光染料吖啶橙观察二脱甲氧基姜黄素诱导胰腺癌细胞凋亡的形态学变化,流式细胞仪分析二脱甲氧基姜黄素诱导胰腺癌细胞的凋亡率。结果:二脱甲氧基姜黄素对Panc-1细胞具有增殖抑制作用,且具有浓度依赖效应,姜黄素<二脱甲氧基姜黄素,统计表明有组间差异(P<0.05);二脱甲氧基姜黄素能诱导人胰腺癌细胞Panc-1凋亡。结论:二脱甲氧基姜黄素能明显抑制人胰腺癌细胞Panc-1的体外增殖。可为临床治疗胰腺癌药物研究提供一种新的方法。

着色性干皮病D组蛋白对胰腺癌PANC-1细胞紫杉醇敏感性的影响

目的研究表明化疗药物耐药和与消化道肿瘤相关的一系列基因分子突变密切相关。文章研究野生型人剪切修复基因XPD转染人胰腺癌PANC-1细胞后对结合型紫杉醇敏感性的影响。方法将空载质粒p EGFP-N_2及重组质粒p EGFP-N_2/XPD通过瞬时转染于人胰腺癌PANC-1细胞。设正常对照组(不作任何处理)、空载质粒转染组(空载质粒p EGFPN_2转染)、重组质粒XPD转染组(重组质粒p EGFP-N_2/XPD转染)。使用RT-PCR和Western blot方法检验转染后XPD mRNA及蛋白表达;MTT实验检测结合型紫杉醇对XPD转染后PANC-1细胞增殖活性的变化;流式细胞仪检测XPD转染后PANC-1细胞在结合型紫杉醇作用下凋亡反应的差异。结果重组质粒XPD转染组中XPD mRNA表达量(9.572±0.345)和蛋白表达量(1.055±0.012)较正常对照组(1.125±0.043,0.302±0.002)及空载质粒转染组(1.273±0.057,0.378±0.004)明显升高(P<0.01);正常对照组与空载质粒转染组XPD mRNA和蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05)。MTT结果显示不同浓度结合型紫杉醇作用PANC-1细胞24 h后,重组质粒XPD转染组的A值均明显低于正常对照组、空载质粒转染组,差异均有统计学意义(P<0.05);正常对照组与空载质粒转染组差异无统计学意义(P>0.05)。流式细胞仪检测结果显示不同浓度结合型紫杉醇作用PANC-1细胞24 h后,重组质粒XPD转染组细胞凋亡率均明显高于正常对照组、空载质粒转染组,差异均有统计学意义(P<0.01);正常对照组与空载质粒转染组差异无统计学意义(P>0.05)。结论通过XPD转染PANC-1细胞可明显增强PANC-1细胞对结合型紫杉醇的化疗敏感性。

siRNA沉默Bmi-1表达对胰腺癌PANC-1细胞增殖的抑制作用

目的:探讨运用RNAi技术沉默Bmi-1基因对人胰腺癌细胞恶性行为的影响,为胰腺癌基因治疗提供新的靶点和思路.方法:构建反义Bmi-1真核表达载体转染人胰腺癌PANC-1细胞,运用荧光显微镜下观察、MTT、Western blot、流式细胞术检测转染效果及细胞周期、凋亡变化.结果:成功构建反义Bmi-1真核表达载体并且转染后细胞Bmi-1表达明显下降(175.39±1.76vs318.54±3.53,P<0.05),实验组细胞与对照组相比,增殖受到抑制,周期出现阻滞(G0/G1:60.480%±1.545%vs40.520%±2.865%;S:12.68%±2.654%vs35.740%±2.074%,均P<0.05),凋亡明显增加(21.670%±2.948%vs7.870%±0.900%,P<0.05).结论:Bmi-1的siRNA能明显抑制Bmi-1的表达,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡.Bmi-1可作为胰腺癌基因治疗的靶点.

FOXQ1介导TGF-β1信号通路调控胰腺癌PANC-1细胞体外血管生成

目的:探讨沉默叉头框蛋白Q1(forkhead box Q1,FOXQ1)基因对胰腺癌PANC-1细胞体外血管生成的影响及其在转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)信号通路中的作用。方法:用FOXQ1-sh RNA重组慢病毒和阴性对照慢病毒(NC-sh RNA)感染PANC-1细胞,流式细胞术检测感染率,实时荧光定量PCR(q PCR)和Western blotting法检测沉默效果。实验设FOXQ1-sh RNA组、NC-sh RNA组与空白对照组,用人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)进行体外血管生成实验,荧光显微镜下观察细胞血管生成能力。用q PCR、Western blotting法检测VEGF-A、MMP-2 m RNA和蛋白的表达水平;用TGF-β1(终质量浓度5 ng/ml)诱导FOXQ1-sh RNA组和NC-sh RNA组细胞,检测诱导前后细胞体外血管生成能力变化与FOXQ1、VEGF-A、MMP-2表达差异。结果:sh RNA慢病毒感染率为90%左右,FOXQ1-sh RNA组PANC-1细胞的体外血管生成数目显著少于NC-sh RNA组[(9.33±2.08)vs(28.67±2.52)条,P<0.05],其VEGF-A、MMP-2表达下调(均P<0.05)。TGF-β1增强各组细胞体外血管生成能力,促进FOXQ1、VEGF-A、MMP-2 m RNA和蛋白的表达水平(均P<0.05)。结论:FOXQ1介导了胰腺癌PANC-1细胞体外血管生成,其机制可能与VEGF-A和MMP-2的下调有关,且可能受TGF-β1通路的调控。