神经元表达发育下调基因9诊断胰腺癌及其对患者预后的预测价值

【目的】探讨神经元表达发育下调基因9(NEDD9)诊断胰腺癌及其预测患者预后的价值。【方法】80例在本院首次就诊并经手术中快速病理活检证实的胰腺癌患者,收集患者胰腺癌组织及癌旁正常组织,采用免疫组化及qPCR技术检测各组织NEDD9的表达情况,分析NEDD9与胰腺癌患者临床特征的关系,探讨NDEE9对胰腺癌患者临床预后的影响。【结果】胰腺癌组织中的NEDD9高表达率为71.25%,显著高于癌旁组织的51.25%(P<0.05),其NEDD9 mRNA水平(0.92±0.17)也显著高于癌旁正常组织(0.33±0.09),差异有统计学意义P<0.05);低表达NEDD9患者的临床分期(Ⅰ~Ⅱ期)、分化程度(高分化)显著优于高表达NEDD9患者,同时淋巴结转移率显著低于高表达患者(均P<0.05);随访结果显示,发生预后不良的患者NEDD9表达水平(1.21±0.31)显著高于预后良好组(0.73±0.25)(P<0.05);二元Logistic回归分析显示,高表达NEDD9是胰腺癌患者预后不佳的独立危险因素,其优势比为2.18(1.16~4.01)。【结论】NEDD9在胰腺癌组织中呈显著高表达,且与患者临床分期及病例分级有相关性,NEDD9高表达是胰腺癌患者预后不佳的独立危险因素。

胰腺癌p16、Bcl-2、Bax和VEGF基因表达及新生血管密度计数的意义

目的 :研究胰腺癌组织中 p16、 Bcl- 2、 Bax和 VEGF基因的表达及新生血管计数的意义。方法 :采用免疫组织化学法及形态半定量方法对 33例胰腺癌和 6例正常胰腺组织进行新生血管密度记数和 p16、Bcl- 2、Bax和 VEGF基因表达检测。结果 :P16蛋白表达 :高、中分化胰腺癌高于低分化 (P<0 .0 5 ) ,生存期长者表达高于生存期短者 (P<0 .0 5 ) ;Bcl- 2表达 :高、中分化者高于低分化者 ;Bax表达 :正常胰腺组织高于胰腺瘤组织 ,高、中分化者高于低分化者 ,生存期≥ 12个月者高于 <12个月者 ;VEGF表达 :有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者 ;MVD记数 :正常胰腺组织低于胰腺瘤组织 ,有淋巴转移者高于无淋巴结转移者 ;MVD与 VEGF表达呈正相关(r=0 .79,P<0 .0 5 ) ;p16基因表达与 VEGF表达和 MVD呈负相关 (r=- 0 .6 9,P<0 .0 5 ;r=- 0 .87,P<0 .0 5 ) ,Bcl- 2表达与其他基因表达结果无相关关系。 Bax表达与 p16表达呈正相关 (r=0 .5 4 ,P<0 .0 5 ) ,与 VEGF表达和 MVD呈负相关 (r=- 0 .6 6 ,P<0 .0 5 )。结论 :综合检测胰腺癌组织中 p16、Bcl- 2、Bax和 VEGF基因的表达及微血管密度对判断胰腺癌恶性程度及估计肿瘤的预后有较大帮助。

抗HIF-1α和survivin基因双靶位miR-RNAi载体的构建及其对胰腺癌细胞的作用

目的:构建抗HIF-1α单靶位(anti-H)、抗Survivin单靶位(anti-S)以及抗HIF-1α和Survivin基因双靶位微小RNA表达载体(anti-H+S),观察和比较这3种载体对胰腺癌Panc-1细胞增殖的影响。方法:设计4组靶向HIF-1α和Survivin基因的寡核苷酸序列,连接至pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR质粒,构建两组共8个载体,依次为anti-H(Ⅰ)、anti-H(Ⅱ)、anti-H(Ⅲ)、anti-H(Ⅳ)和anti-S(Ⅰ)、anti-S(Ⅱ)、anti-S(Ⅲ)、anti-S(Ⅳ)。实时定量RT-PCR检测靶基因mRNA的表达水平,将两组中mRNA下调作用最强的质粒串联,构建anti-H+S。用anti-H+S及mRNA下调作用最强的anti-H和anti-S转染胰腺癌Panc-1细胞,Western blot测定靶蛋白表达情况,MTT法检测细胞增殖活性。结果:经测序鉴定,所有anti-H、anti-S及双靶位质粒anti-H+S装载位点核苷酸序列与设计序列完全相符。anti-H的靶基因mRNA沉默效率依次为48%、2%、44%和30%;anti-S的靶基因mRNA沉默效率依次为72%、75%、58%和59%。由anti-H(Ⅰ)和anti-S(Ⅱ)串联得到双靶位质粒anti-H+S。anti-H+S的靶基因mRNA沉默效率为53%(HIF-1α)和42%(survivin)。anti-H(Ⅰ)、anti-S(Ⅱ)及anti-H+S与对照质粒相比均使靶基因蛋白的表达明显下降,细胞增殖受到明显抑制(P<0.05)。其中anti-H+S对细胞的增殖抑制作用强于anti-H(Ⅰ)和anti-S(Ⅱ),72h后差异有统计学意义(P<0.05)。结论:本研究成功构建了抗HIF-1α和Survivin的单靶位质粒和双靶位质粒;其中,anti-H+S抑制胰腺癌Panc-1细胞增殖作用强于anti-H(Ⅰ)和anti-S(Ⅱ)。

Survivin在胰腺癌中的表达及其与胰腺癌增殖活性的关系

目的探讨Survivin在胰腺癌中的表达及其与胰腺癌增殖活性的关系。方法用RT-PCR法检测6 2例胰腺癌、1 2例慢性胰腺炎和1 0例正常胰腺组织中Survivin mRNA的表达;用免疫组织化学法检测胰腺癌中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,并观察两者的关系。结果Survivin mRNA在胰腺癌中表达率为7 4.2%,在慢性胰腺炎及正常胰腺组织中不表达,前者与后两者差异有显著性(P<0.0 1);与胰腺癌的分化程度、临床分期及淋巴结转移无明显关系(P>0.0 5)。Survivin的表达与胰腺癌增殖活性有关;Survivin阳性肿瘤具有较高的增殖活性,其PCNA指数为(4 6.4±1 5.2)%,明显高于Survivin表达阴性肿瘤者(2 8.4±1 4.8)%(P<0.0 1)。结论Survivin基因在胰腺癌中过表达,并与胰腺癌的高增殖有关。提示该基因对胰腺癌的发生和发展起重要作用。Survivin基因有望成为胰腺癌诊断和治疗的新靶点。

LivinmRNA及Bcl-2,p53蛋白在胰腺癌中的表达

目的探讨凋亡抑制蛋白Livin在胰腺癌组织中的表达及其与Bcl-2和p53蛋白表达的关系。方法采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)法检测52例胰腺癌和12例正常胰腺组织中Livin mRNA的表达;用免疫组织化学法检测胰腺癌组织中Bcl-2和p53蛋白的表达。结果Livin mRNA在胰腺癌中的表达率为71.2%,明显高于正常胰腺组织(P<0.01)。Livin基因表达与胰腺癌的分化程度和淋巴结转移有关(P<0.05)。Livin基因表达与Bcl-2蛋白表达有关,而与p53蛋白无关。结论Livin基因在胰腺癌的发生发展中起重要作用;Livin与Bcl-2的异常表达可能在胰腺癌的发生中起协同作用;Livin基因过表达与抑癌基因p53的失活无关。

胰腺癌的分子生物学研究进展

近年 ,与胰腺癌相关的新的癌基因和抑癌基因不断被克隆和发现 ,为胰腺癌的发病机制的探讨、诊断和治疗提供了许多新的靶点。基于此 ,笔者就胰腺癌的分子发生机制、基因诊断和基因治疗作一综述。

胰腺癌细胞线粒体DNA突变的检测和分析

目的 研究胰腺癌细胞线粒体DNA调控序列（D-loop）区突变情况.方法 用PCR与直接测序相结合的方法,对比分析二株胰腺癌细胞株SW1990,JF-305和1例原代培养的正常胰腺细胞的线粒体DNA D-loop区的突变位点.结果 二株胰腺癌细胞系和正常胰腺细胞的线粒体DNA D-loop区均存在不同程度的点突变,SW1990共检测到8个突变位点,JF-305共检测9个突变位点,其中73位A-G,16223位C-T,16358位C-T这三个突变位点在二株癌细胞和正常胰腺细胞中均检测到,考虑为多态性变化,其中16211位C-T,16311位T-C两个相同的突变位点在二株胰腺癌细胞中均检测到,考虑为特征性突变.结论 胰腺癌细胞线粒体DNA D-loop区具有多态性和突变性,其特征性突变有望成为新的分子标记.