胰腺脱细胞支架MIN6细胞的三维培养

目的研究胰腺脱细胞支架三维(3D)培养对小鼠β细胞系MIN6细胞生长及功能的影响。方法灌注法制备胰腺脱细胞支架,循环灌注培养法在胰腺脱细胞支架中3D培养小鼠MIN6细胞,检测其功能;其结果与2D平面培养比较。将含细胞的胰腺支架移植入糖尿病小鼠背部皮下并检测其功能。结果胰腺脱细胞支架检测未见细胞结构,细胞外基质成分保存完好,血管结构保存完整。支架内剩余DNA定量检测结果为(40.7±2.1)ng/mg,体内种植显示其生物相容性良好。胰岛素基因表达的检测显示,MIN6细胞在胰腺脱细胞支架3D培养后的功能发挥优于2D平面培养(P<0.05),移植后能够较好的控制糖尿病小鼠的血糖水平。结论 MIN6细胞在胰腺脱细胞支架3D培养体系中定植及功能发挥优于传统2D平面培养。

改良灌注法猪全胰腺脱细胞基质支架体外功能的实验研究

目的采用改良灌注法制备猪全胰腺脱细胞基质支架(APB),并评价其生物学特征。方法选取10只新鲜的来自健康4~6月龄体重(20.0±2.5)kg猪的胰腺组织,采用本实验室自行设计的简易灌流装置制备猪APB,观察APB的形态结构,检测其细胞外基质(ECM)的成分以及DNA含量;随后采用移植实验评估APB生物相容性,最后将APB再细胞化观察其促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)的增殖分化状况。结果脱细胞过程结束后APB颜色透明,原有组织轮廓保留完整;形态学检测表明APB保留原有的三维结构,ECM结构及成分保存较好,未见残留的细胞结构及成分;与正常猪胰腺组织相比,APB的ECM含量[胶原:(846.1±280.0)ng/mg干重比(754.7±249.6)ng/mg干重;葡萄糖胺聚糖(433.6±142.6)ng/mg干重比(397.2±98.7)ng/mg干重],差异无统计学意义(均P>0.05);但APB的DNA含量较正常猪胰腺组织降低[(83464.2±27813.4)ng/mg干重比(298.9±96.8)ng/mg干重,t=11.56,P<0.001],差异有统计学意义;APB在皮下埋植后随着时间延长,重塑评分升高,引起有益的重塑反应;再细胞化的APB可促进BMSCs的增殖及分化。结论本研究所制备的APB符合脱细胞标准,维持原有的三维结构,具有良好的生物相容性,有利于种植细胞的增殖分化。