尿羧肽酶B和尿胰蛋白酶原激活肽诊断急性重症胰腺炎的临床价值分析

目的 评估尿液中羧肽酶B激活肽（carboxypeptidase B,CAPAP）水平和尿胰蛋白酶原（trypsinpgen activation peptide,TAP）对急性重症胰腺炎（severe acute pancreatitis,SAP）的临床诊断价值.方法 收集2012年6月～2014年6月因腹痛24～72 h就诊的病人,最终将23例SAP患者和38例急性轻症胰腺炎（mild acute pancreatitis,MAP）患者纳入研究,使用EPS速率法检测血清淀粉酶（amylase,Amy）水平,使用ELISA法检测尿液中TAP水平,使用胶体金法检测尿液中CAPAP水平,分别计算其诊断效能进而确定诊断效能最高的生化指标.结果 研究共纳入61例患者,根据实验结果分析,SAP组尿液中CAPAP和TAP水平较MAP组均明显升高,CAPAP水平SAP组82.61％,MAP组为7.89％（P＜0.05）,TAP水平SAP组为93.62±14.61 nmol/L,MAP组为67.50士6.25 nmol/L,差异有统计学意义（P＜0.01）.血清Amy水平SAP组（744.31±689.64 u/L）与MAP组（549.32±338.33 u/L）差异无统计学意义（P＞0.05）.三项生化指标中,尿CAPAP对SAP最具有诊断价值（敏感度86.4％,特异度89.7％,准确度88.5％,阳性及阴性预测值分别为82.6％和78.8％）.结论 相对于血清Amy和尿TAP,尿CAPAP可作为诊断SAP的一项可靠生化指标,血淀粉酶不适宜作为一项SAP的筛查指标.

胰蛋白酶活性的定量测定方法

对甲苯磺酰基精氨酸甲酯（ＴＡＭＥ）是胰蛋白酶的专一性底物．ＴＡＭＥ经胰蛋白酶水解释放出的对甲苯磺酰基精氨酸与活性测定混合物中的ＮａＯＨ反应，导致溶液ｐＨ值的下降．以酚红为指示剂，通过测定５５５ｎｍ处光吸收值的降低可以监测ｐＨ的变化．在０．００１～０．３μｇ的范围内，胰蛋白酶含量与５５５ｎｍ处光吸收值的降低呈线性关系．

大豆胰蛋白酶抑制子失活方法的研究进展

胰蛋白酶抑制子是大豆食品与饲料的主要抗营养因子，这种抑制子的失活能明显提高大豆食品与饲料的营养价值和食用安全性。大豆胰蛋白酶抑制子的钝化方法有物理、化学、生物还原、酶解、发酵以及天然化合物络合法等。本文介绍了大豆胰蛋白酶抑制子失活诸方法与技术，并对其发展前景作初步探讨。

大豆胰蛋白酶抑制剂失活方法探讨

胰蛋白酶抑制剂是大豆食品与饲料的主要抗营养因子 ,大豆胰蛋白酶抑制剂的失活能明显提高大豆食品与饲料的营养价值和食用安全性。大豆胰蛋白酶抑制剂的钝化方法有物理、化学、生物还原、酶解、发酵以及天然化合物络合法等。文中介绍了大豆胰蛋白酶抑制剂失活诸方法与技术 。

大豆中胰蛋白酶抑制剂的钝化方法研究

[目的]对大豆中胰蛋白酶抑制剂进行钝化处理,降低其活性,提高大豆饲料的营养价值。[方法]采用正交试验设计对大豆中胰蛋白酶抑制剂的化学钝化法(亚硫酸钠法)和物理钝化法(微波法和超声波法)进行比较,确定最优钝化工艺条件。[结果]大豆中胰蛋白酶抑制剂的化学法钝化最优工艺条件为:Na2SO3浓度为0.03 mol/L,温度75℃,钝化时间60 min;物理微波法钝化最优工艺条件为:微波功率240 W,时间90 s,粉碎度为过60目筛;物理超声波钝化法最优工艺条件为:加水量30 ml,时间30 min,粉碎度为过60目筛。[结论]3种钝化方法处理后,大豆中胰蛋白酶抑制剂活性均明显降低。

尿胰蛋白酶原激活肽间接竞争ELISA检测法的建立及方法学评价

目的建立酶联免疫吸附法（ELISA）以检测人尿液中胰蛋白酶原激活肽（TAP）的含量。方法以TAP-BSA交联抗原为包被抗原，TAP为竞争抗原，两者与定量的TAP mAb反应，建立检测TAP的间接竞争ELISA测定法。结果最佳抗原包被浓度为250ng／ml，最佳单抗工作浓度为25μg／ml，HRP-抗小鼠IgG工作浓度为1：4000。可测量最适范围为0．69～1000ng／ml，灵敏度为0．69ng／ml，批内和批间变异系数分别为9．10％和10．33％，平均回收率为97．70％。结论建立了定量测定尿TAP含量的酶联免疫吸附试验。

大豆中抗营养因子——致甲状腺肿素、凝血素、胰蛋白酶抑制剂祛除方法初探

介绍了致甲状腺肿素、凝血素、胰蛋白酶抑制剂这3种大豆中微量含有的抗营养因子,并对其去除方法作初步研究与探讨。

一种简便、快捷的胰蛋白酶抑制剂基因的分离与克隆方法

从 3个豇豆品种幼嫩叶片中分离出核基因组 DNA,参照已知的几种 Bowman-Birk型胰蛋白酶抑制剂基因序列 ,设计合成了 2 7bp,且含有 Bam H I位点的寡核苷酸引物 ,分别以 3种豇豆核基因组 DNA为模板 ,PCR扩增 ,均得到长度约为 3 40 bp的 DNA片段。产物 DNA片段经 DNA序列分析 ,结果表明三者的碱基序列相同 ,与报道的胰蛋白酶抑制剂基因相比 ,同源性为 1 0 0 %和 99.7%。

大豆胰蛋白酶抑制剂失活方法研究进展

胰蛋白酶抑制剂是大豆食品与饲料的主要抗营养因子 ,大豆胰蛋白酶抑制剂的失活能明显提高大豆食品与饲料的营养价值和食用安全性。大豆胰蛋白酶抑制剂的钝化方法有物理、化学、生物还原、酶解、发酵以及天然化合物络合法等。介绍了研究概况 ,大豆胰蛋白酶抑制剂失活诸方法与技术 。

豆制品中胰蛋白酶抑制剂活性测定方法研究

利用紫外分光光度计,对豆制品中胰蛋白酶抑制剂在抑制牛胰蛋白酶活性反应前后的吸光值差异制作差值曲线,从而得出斜率与抑制剂活性之间关系的方法。并通过反复的实验对比,最终可以快速准确地测定大豆制品中胰蛋白酶抑制剂活性。

苦瓜中胰蛋白酶抑制剂活性的测定方法研究

目的用一种改进的测定方法，测定从苦瓜籽中提取分离的胰蛋白酶抑制剂的抑制活性。方法通过稳定性、重复性和专属性实验，分析和考察此测定方法。结果苦瓜籽中的胰蛋白酶抑制剂的相对分子质量1×10^3，比活1153U／mg；配制的抑制剂在2h内测得的活性变化小于2％；RSD2．5％；0．05mg／mL牛血清白蛋白对测定体系没有干扰。结论此方法适用于苦瓜胰蛋白酶抑制剂活性的测定。

豆浆中胰蛋白酶抑制剂活性测定方法的研究

目的在GB/T 21498-2008《大豆制品中胰蛋白酶抑制剂活性的测定》方法的基础上,对影响豆浆中胰蛋白酶抑制剂活性测定的一些关键因素进行研究和改进。方法豆浆样品加水提取并稀释至一定体积后,加入L-BAPA试剂和胰蛋白酶使用液,(37±0.25)℃水浴中保温10 min±5 s后,加入乙酸溶液终止酶反应,并采用分光光度计在410 nm波长下测定其吸光度值,代入公式计算胰蛋白酶抑制剂的活性。结果改进后的方法添加高、中、低3个浓度水平胰蛋白酶抑制剂的回收率分别为113.1%、114.6%、134.9%,平行测定的RSD分别为1.4%、3.6%、7.2%,方法的准确性和重复性能满足实验的需求。结论改进后的方法快速简便,节约了时间和实验成本,方法的准确性和重复性能满足实验的需求。

胰蛋白酶催化罗丹明110双酰胺衍生物荧光酶联免疫吸附方法检测桔青霉素

桔青霉素(citrinin,CIT)是一种广泛污染玉米、大米等农作物,且对人和动物具有肾毒性、致畸性等毒害的真菌毒素。目前的国家标准检测方法中,需要先用免疫亲和柱或固相萃取柱净化,再用配荧光检测器的高效液相色谱仪测定,需要专业的大型仪器和检测场所。因此,有必要开发一种更简便、灵敏的方法用于谷物中CIT的检测。该实验构建了一种胰蛋白酶催化的荧光酶联免疫吸附方法用于玉米中CIT的检测。该方法利用胰蛋白酶催化罗丹明110双酰胺荧光衍生物裂解产生荧光,以及CIT和胰蛋白酶-CIT与CIT抗体的竞争结合关系,通过记录竞争抑制率B_(0)与CIT浓度的变化关系,从而实现对玉米中CIT的定量检测,可用方程y=18.606 lnx-18.713(R^(2)=0.992),定量范围为12.5~400 ng/mL,通过检测4个不同CIT含量(0.22~3.5 mg/kg)的玉米样本,结果显示该方法的加标回收率为90.10%~110.58%,批内、批间的变异系数为3.65%~14.08%,该研究所构建的荧光酶联免疫吸附方法适用于玉米中不同浓度的CIT快速、灵敏定量检测。

低浓度胰蛋白酶原代培养大鼠血管内皮细胞实验方法研究

目的:探索改进一种简单、经济和高纯度的大鼠血管内皮细胞分离培养方法。方法:采用2%戊巴比妥钠麻醉Wistar大鼠,在无菌条件下截取主动脉约3~4 cm,再将主动脉血管外翻使内膜暴露,用丝线结扎动脉两端,以0.125%胰蛋白酶消化18~20 min,在倒置相差显微镜下直接观察细胞生长和细胞形态特征,分别应用免疫组化和免疫荧光方法检测第VIII因子相关抗原抗体结合情况,对培养传代的血管内皮细胞进行鉴定。结果:采用0.125%胰蛋白酶直接消化可获得高纯度的大鼠主动脉血管内皮细胞。经过3~4天培养,细胞呈集落样散在分布于六孔培养板底,到10~12天时,细胞贴壁增长至覆盖大部分培养板底,约85%的细胞汇合成单层,呈现典型的“鹅卵石”样内皮细胞特征;此外,免疫组化和免疫荧光方法检测第VIII因子相关抗原抗体结合情况,发现大多数细胞胞浆呈现棕黄色和绿色荧光的阳性反应,显示分离培养的细胞主要是血管内皮细胞。结论:本改良的细胞培养方法操作简便,只需浓度低至0.125%胰蛋白酶即可获取较高纯度的血管内皮细胞,不需要较昂贵的胶原酶及内皮细胞生长因子,与现有的其他培养方法相比更为经济实用。

大豆胰蛋白酶抑制因子的危害及其检测研究进展

大豆胰蛋白酶抑制因子是大豆中一类主要的抗营养因子,其主要危害表现在致使胰腺增生、肿大以及抑制动物生长等方面。近年来,针对大豆胰蛋白酶抑制因子的检测方法已成为研究热点。文章通过对大豆胰蛋白酶抑制因子的危害和现有的检测方法进行综述,旨在为大豆及其制品中胰蛋白酶抑制因子的监控以及建立大豆胰蛋白酶抑制因子快速、高效的检测方法提供参考。

热处理钝化扁豆液中胰蛋白酶抑制子的研究

本文就要研究热处理钝化扁豆液中胰蛋白酶抑制子的方法。试验表明,高温下(95,120,140℃)热处理所需温度时间较短,但豆液颜色变深。碱性(pH=12.0)中温(50,60,70℃)下,豆液营养效价损失较小,温度每升高6℃,所需热处理时间减少一倍。