复合酶酶解法制备中华草龟皮胶原蛋白肽的工艺优化

该研究探讨了不同种类蛋白酶对中华草龟皮胶原蛋白酶解液的水解度和DPPH自由基清除率的影响,并进一步研究了复合蛋白酶对胶原蛋白的酶解效果。此外,通过正交试验优化了复合酶酶解条件。结果表明,由胰蛋白酶和碱性蛋白酶按1∶1组成的复合酶对龟皮胶原蛋白进行酶解,可显著提高酶解液的水解度和DPPH自由基的清除率(P<0.05);优化的复合酶酶解工艺为复合酶添加量5000 U/g、酶解pH值7.5、酶解温度50℃、酶解时间3 h,在该酶解工艺条件下,水解度达(51.19±2.45)%,DPPH自由基清除率达(51.78±2.21)%。影响复合酶酶解效果的主次顺序为酶添加量>酶解pH值>酶解时间>酶解温度。

碱性条件下酪蛋白的胰蛋白酶酶促水解研究

利用二次旋转回归试验设计较系统地研究了在碱性条件下酪蛋白的胰蛋白酶催化水解，得到了在一定的条件变化范围内酪蛋白水解物的水解度变化规律（回归模型），回归模型所得结果与实际试验结果相符，所以该模型可用于对水解度的预测；二次旋转回归试验设计还可同时用于对酪蛋白的限制水解进行优化条件选择。

赖氨酸C端内切酶/胰蛋白酶顺序酶切在蛋白质组学样本制备中的评估

采用胰蛋白酶(Trypsin)单独酶切与不同酶量的赖氨酸C端内切酶(Lys-C/trypsin)顺序酶切两种方法,对293T细胞全蛋白样本进行酶解消化,系统评估Lys-C/trypsin顺序酶切与Trypsin单一酶切在蛋白质组学样本制备中的差别。实验结果表明,Lys-C/trypsin顺序酶切不仅能显著提高肽段和蛋白质的鉴定数目,同时降低遗漏K酶切位点的数目及比例,而且得到的肽段长度有利于质谱鉴定,蛋白质覆盖率明显提升。通过对酶的用量进行优化对比,最终确定了Lys-C/trypsin顺序酶切时酶的合理用量。本研究结果对提高蛋白质组学样本的制备质量以及蛋白质的序列鉴定覆盖度具有指导意义。

碱性内切蛋白酶水解大豆蛋白的研究

以大豆分离蛋白为底物 ,通过单因素分析、正交试验以及对水解蛋白曲线分析 ,确定了Al calase碱性内切蛋白酶水解大豆蛋白的最佳水解条件 :底物质量浓度为 60 g/L ,pH值为 7.5,水解温度为 60℃ ,酶 底物比为 4.0mL/kg ,反应时间为 1 0h。

碱性蛋白酶和复合蛋白酶双酶水解羊骨粉的工艺研究

[目的]碱性蛋白酶和复合蛋白酶为水解羊骨粉制备胶原多肽效果最好的两种单酶,为进一步提高酶解效果。[方法]以羊骨粉为原料,进行双酶水解,比较同步水解与顺序水解的效果,确定最优水解工艺。[结果]同步水解AB2组合的水解效果最优,各水解评价指标均显著高于单酶水解和顺序水解(P<0.05),与顺序水解相比不显著(P>0.05),但优于顺序水解且大大节省了时间,其水解工艺为:底物浓度9%,碱性蛋白酶和复合蛋白酶的加酶量分别为5.00%和4.25%,起始pH 8.5,50℃水解5h时,水解度达29.79%,氨基酸态氮28.13%,多肽生成量110.43mg·g-1,短肽得率73.88%。[结论]双酶同步水解羊骨粉提高酶解效果的同时,也为充分水解羊骨制备胶原多肽提供了试验支持。

低温β-1,4-内切葡聚糖酶的基因挖掘、异源表达及其酶学性质表征

β-1,4-内切葡聚糖酶在洗涤行业有着广泛的应用价值,其中具有较好的低温和碱性耐受能力是其实现工业应用的重要前提。该论文通过基因挖掘获得一株具有低温耐受能力的Deinococcus cellulosilyticus来源新型β-1,4-内切葡聚糖酶基因EgDC,并将其在大肠杆菌中实现了可溶性表达,其中大部分存在于周质空间,少部分分泌至胞外。对EgDC酶的酶学性质进行了表征,发现该酶的最适温度和最适pH值分别为40℃和pH 6.5,其在20℃能保持70%以上活力,且在pH 8.0和pH 9.0的半衰期分别达到83.43 min和53.79 min。EgDC酶具有较好的催化性质,其比酶活力k_(cat)/K_(m)值分别为(26.38±1.43)U/mg和(520.03±17.07)s^(-1)/mg,且对于金属离子以及表面活性剂均具有较强耐受能力。由此可见,新型β-1,4-内切葡聚糖酶EgDC具有较好的催化能力,且在低温、碱性以及存在表面活性剂环境下较为稳定,因此具有潜在的工业应用价值。

Alcalase 2.4L碱性内切蛋白酶改性大豆蛋白的工艺研究

以大豆分离蛋白为研究对象,采用碱性内切蛋白酶Alcalase 2.4L作为水解大豆分离蛋白的酶制剂,探讨碱性内切蛋白酶Alcalase 2.4L对大豆分离蛋白的影响。本实验以水解度和蛋白质分散性指数为评价指标,确定了Alcalase 2.4L酶解大豆分离蛋白的最佳酶解反应条件:加酶量0.0048 AU/g、pH值为7.4、底物浓度11%、反应温度65℃、酶解时间50min。该条件下大豆分离蛋白的分散性得到显著改善,蛋白质分散指数PDI值达到92.8%。

木瓜蛋白酶复合剂抑制淮山酶促褐变的应用

以淮山、木瓜蛋白酶等为试验材料,研究木瓜蛋白酶复合剂对鲜切淮山的褐变防控效果,探索生物酶法在淮山鲜切加工中的应用。以多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)、褐变度(BD)为考察指标,在木瓜蛋白酶、抗坏血酸、氯化钠以及柠檬酸单一抑制剂对淮山褐变控制效果研究的基础上,采用正交试验,确定复合抑制剂在淮山褐变控制中的最佳组合。结果表明:柠檬酸、抗坏血酸和木瓜蛋白酶单一抑制剂对于防止鲜切淮山的褐变具有较好的效果,而Na Cl溶液对于防止鲜切淮山的褐变效果不明显。采用柠檬酸、抗坏血酸和木瓜蛋白酶进行防褐变正交试验所筛选的最佳浓度组合为0.40%柠檬酸+0.20%木瓜蛋白酶+0.20%抗坏血酸,影响主次顺序为柠檬酸>木瓜蛋白酶>抗坏血酸。验证试验结果表明,BD值为0.194、PPO活性为0.21 U/m L、POD活性为9.2 U/m L的抑制褐变效果优于试验对照组。

胰蛋白酶和糜蛋白酶与抗生素联用的体外抗菌活性研究

[目的]本研究旨在提供蛋白酶治疗奶牛乳房炎的参考数据,了解胰蛋白酶和糜蛋白酶的体外微生物敏感性。[方法]通过测定细菌的A600绘制不同细菌的生长曲线,探讨了0.5C浓度胰糜蛋白复合酶(胰、糜蛋白酶各0.08 mg·m L-1)、1C浓度胰糜蛋白复合酶(胰、糜蛋白酶各0.16 mg·m L-1)、2C浓度胰糜蛋白复合酶(胰、糜蛋白酶各0.32 mg·m L-1)及其与头孢噻呋钠、磷酸替米考星和硫氰酸红霉素联用对5种常见奶牛乳房炎致病菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、巴氏杆菌、无乳链球菌、停乳链球菌)生长的影响。同时,采用电子显微镜扫描技术,观察胰糜蛋白复合酶与头孢噻呋钠协同对大肠杆菌超微结构的影响。[结果]经胰糜蛋白复合酶处理的细菌生长缓慢。1C浓度胰糜蛋白复合酶单独使用时对5种细菌的抑菌效果最佳;2C浓度胰糜蛋白复合酶与各种抗生素配合使用的协同抑菌效果最强。扫描电镜下,胰糜蛋白复合酶对细菌细胞壁结构有明显的损伤,表现为处理组细菌的细胞壁完整程度较差。0.08 mg·m L-1胰糜蛋白复合酶与0.312 5μg·m L-1头孢噻呋钠联用可显著破坏细菌细胞壁结构。[结论]胰糜蛋白复合酶对5种常见奶牛乳房炎致病菌有不同程度的抑菌效果,其与头孢噻呋钠联用后可通过破坏细菌表面结构而发挥协同抑菌作用。

基于镜像酶正交酶切的蛋白质复合物规模化精准分析新方法

蛋白质主要以复合物的形式参与各项生命活动。化学交联质谱(CXMS)技术作为近年来新兴的蛋白质复合物解析技术,不仅可实现蛋白质复合物规模化解析,而且普遍适用于任意相对分子质量和纯度的蛋白质复合物样品,因此已成为X-射线晶体衍射技术、冷冻电镜技术等蛋白质复合物解析经典技术的重要补充。目前,CXMS主要采用胰蛋白酶将交联后的蛋白质复合物进行酶切,并进行质谱鉴定。然而鉴定到的交联肽段谱图中b/y特征碎片离子的鉴定数目不足,且因肽段序列匹配连续性较差导致谱图可信度相对较低,影响了蛋白质复合物交联位点的鉴定精准度。该文基于镜像酶正交切割的互补特性,采用胰蛋白酶镜像酶与胰蛋白酶联合酶切的方法,对交联后的蛋白质复合物分别进行酶切,再利用液相色谱-质谱联用技术对酶解产生的交联肽段进行鉴定,进而实现蛋白质复合物的组成、相互作用和结构位点距离约束的解析。对牛血清白蛋白和大肠杆菌全蛋白的交联肽段的分析结果表明,该方法通过增加交联肽段谱图中特征碎裂离子的数目和连续性,鉴定到的大肠杆菌全蛋白的交联位点,较单一胰蛋白酶酶切,提高了16%。因此,镜像酶正交酶切策略能有效提高交联肽段的鉴定准确度和覆盖度,有望为实现规模化的蛋白质复合物精准解析提供新思路。

超声波法混合蛋白酶水解酪蛋白制备酪蛋白磷酸肽的研究

探索了超声波法利用胰蛋白酶与碱性内切酶合理配比水解酪蛋白制备高得率、低N/P的酪蛋白磷酸肽的最佳工艺条件:超声波功率200 W,超声时间15 min,底物质量浓度100 g/L,酶与底物比0.5%,pH值为8,胰蛋白酶与碱性内切酶1∶1,温度为50℃。

复合酶水解菜籽清蛋白的研究

以菜籽清蛋白为原料 ,选择碱性蛋白酶 (Alcalase)和复合风味酶 (Flavourzyme)分步水解制备菜籽清蛋白水解物。通过单因素实验和响应面法分析 ,确定了碱性蛋白酶 (Alcalase)酶解菜籽清蛋白的最佳水解条件为 :pH8.0、反应温度 5 0 .1℃、酶用量 0 .38AU/g、底物浓度 4 .87%。在此条件下水解 1h ,水解度为 14 .72 %。分步酶解的工艺条件为 :Alcalase酶反应 1h后 ,加入 5 0LAPU/gFlavourzyme酶 ,5 0℃下酶解 2h ,酶解液水解度可达 2 8%。氨基酸分析结果表明 ,菜籽清蛋白水解物可作为优质食品添加剂用于食品工业。

Box-Behnken法优化酸性复合酶与碱性复合酶三段式提取红树莓籽油的研究

为了提高红树莓籽油提取率,以红树莓籽为原料,采用胃蛋白酶、酸性纤维素酶、果胶酶、a-淀粉酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶提取红树莓籽油工艺优化,在单因素实验的基础上,根据酶的理化特性,分别对酸性复合酶与碱性复合酶提取油脂进行研究,采用Box-Behnken法优化两组复合酶提取工艺参数。结果表明:酸性复合酶最佳提取工艺参数:胃蛋白酶添加量0.76%,果胶酶添加量1.51%,酸性纤维素酶添加量1.07%,提油率(86.11±0.09)%;碱性复合酶最佳提取工艺参数:胰蛋白酶添加量1.52%,碱性蛋白酶添加量1.99%,α-淀粉酶添加量2.52%,提油率(88.75±0.08)%。结论:碱性复合酶提油率高于酸性复合酶。

复合酶生产酪蛋白磷酸肽的工艺研究

实验以木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶As1.398、碱性蛋白酶As27094种酶复合水解酪蛋白,生产酪蛋白磷酸肽。设计了木瓜蛋白酶+中性蛋白酶As1.398、木瓜蛋白酶+碱性蛋白酶As2709,胰蛋白酶+中性蛋白酶As1.398、胰蛋白酶+碱性蛋白酶As2709、木瓜蛋白酶+胰蛋白酶+中性蛋白酶As1.398和木瓜蛋白酶+胰蛋白酶+碱性蛋白酶As2709六种试验方案。通过比较水解度、酶促水解速率(酶活力)、得率和N/P比等工艺参数,探索合适的实验工艺条件。我们发现胰蛋白酶+中性蛋白酶As1.398这组的产品综合结果最佳。

碱性淀粉酶菌株的紫外线和He-Ne激光复合诱变及其产酶条件的研究

以嗜碱芽胞杆菌BC -A3 6为出发菌株,通过紫外线(UV)、亚硝基胍(NTG)及激光复合诱变处理,选育出一株目前高产碱性淀粉酶的突变株JG -5 7,在摇瓶发酵培养基上3 5℃培养45h ,测得酶活力稳定在867u/ml左右,为出发菌株酶活力的2 .1倍。该菌株产酶适宜的pH值为9-10。

一株高产碱性内切聚半乳糖醛酸酶生产菌的筛选与鉴定

从碱性土样中经分离筛选得到1株固态发酵产碱性内切聚半乳糖醛酸酶活力较高的菌株。经提酶条件优化得到较优的酶液提取提条件为30倍Na2CO3/NaHCO3缓冲液提取1 h。从形态特征、培养特征、生理生化特征以及分子生物学鉴定结果来看,该菌株属B.gibsonii。

动物蛋白水解复合酶的研究

以酶解牛骨蛋白为对象,研究动物蛋白水解复合酶的配制并考察其适应性。实验结果表明,由中性蛋白酶、胰蛋白酶、风味酶等3种酶按酶活性1∶3∶2组合配制而成的复合酶,其酶解动物蛋白效果高于单一酶。

茶蛋白制备高F值低聚肽的定向酶切工艺研究

研究了以茶蛋白为原料制备高F值低聚肽过程中的酶解工艺,采用两步定向酶切的方式,探讨合适的蛋白酶种类,并通过单因素试验考察相关工艺条件对酶切效果的影响。结果表明:碱性蛋白酶和复合风味蛋白酶联用对茶蛋白的水解效果较好;一级定向酶切的最适工艺条件为:底物浓度5%、加酶量(E/S)4%、反应液pH 9.0、反应温度50℃、反应时间3h,此条件下茶蛋白的水解度达到36.02%;二级定向酶切的最适工艺条件为:加酶量(w/v)0.2%、反应液pH值6.5、反应温度55℃、反应时间2h,此条件下水解液的OD220/OD260值达到2.53。该试验为后续水解液分离纯化制备高F值低聚肽产品奠定了基础。