胰蛋白酶及Ⅱ型胶原酶消化获取关节软骨细胞

背景:近年来,众多研究欲采用体外分离培养的关节软骨细胞作为修复缺损的关节软骨的种子细胞,然而,获得纯化的具有生物活性的关节软骨细胞较为困难。目的:拟运用胰蛋白酶与Ⅱ型胶原酶联合消化获取关节软骨细胞。方法:从SD大鼠的正常股骨及胫骨关节表面获取关节软骨,先后运用0.25%的胰蛋白酶和0.2%Ⅱ型胶原酶消化,显微镜下见大量细胞游离后,弃去大块的未消化的关节软骨碎片,离心,去上清,PBS洗涤2次后,加入软骨细胞原代培养液进行培养、增殖。应用甲苯胺蓝及苏木精-伊红染色方法检验所得细胞是否为关节软骨细胞。结果与结论:在严格掌握酶的浓度及消化时间的前提下,通过0.25%胰蛋白酶和0.2%Ⅱ型胶原酶联合酶解关节软骨的方法,成功从大鼠股骨及胫骨关节软骨内分离培养出细胞,并经过甲苯胺蓝染色及苏木精-伊红染色证实,所得的细胞为具有生物活性的关节软骨细胞。

改良的异位子宫内膜细胞培养方法

目的探讨子宫内膜异位症患者异位内膜细胞原代培养方法，为研究子宫内膜异位症的发病机制提供体外细胞模型。方法通过消化、过滤、沉降等方法，分离培养子宫内膜异位症异位内膜腺上皮细胞和间质细胞，光学显微镜观察离体细胞形态。结果①异位子宫内膜细胞培养的成功率为76．47％（13／17）；②改良的细胞培养方法，即胰蛋白酶-胶原酶共同消化法与胶原酶消化法成功率比较无显著性差异（X2=0．180，P=0．893）；③使用改良的酶消化法消化时间在4．075±0．215分钟，单纯胶原酶法则需14．144±7．624分钟，经比较有统计学意义（t=-13．732，P〈0．05）。结论使用改良的细胞培养方法不仅可以获得充分的细胞，而且可以节省时间和经费。