比较羊水细胞原位培养法和胰酶消化法在产前诊断染色体检查中的应用价值

目的比较载玻片-原位培养法(以下简称原位法)和胰酶消化法在羊水细胞染色体检查中的应用价值。方法选取2020年7—12月来该院进行产前诊断的1105例孕妇的羊水标本,分别采用原位法和胰酶消化法进行培养、收获及制片,成功制片后用GSL-120扫描、捕获核型,对两种方法的羊水细胞培养成功率、培养时间、分裂相、核型结果等进行比较分析。结果1105例羊水标本同时采用原位法、胰酶消化法两种方法进行培养,这两种方法的培养成功率的差异无统计学意义(χ^(2)=0.33,P>0.05)。原位法和胰酶消化法羊水需求量分别为5、10 mL,培养基用量分别为7、8 mL。与胰酶消化法相比,原位法羊水细胞培养时间短,分裂相及优质分裂相数目多,差异均有统计学意义(Z=-31.83,P<0.001;Z=-2.937,P=0.003;Z=-2.943,P=0.003)。两种方法的羊水染色体核型分析均检出972例正常核型、128例异常核型,其中染色体数目异常真嵌合7例,染色体核型结果符合率为100%。结论与胰酶消化法相比,原位法具有培养时间短、培养基用量少、羊水需求量少、操作步骤简单、优质分裂相多,以及可以有效诊断真假嵌合等优点,但胰酶消化法相较于原位法具有制片可重复性相对较高且耗材相对经济的优势,结合原位法和胰酶消化法的优缺点,羊水细胞培养可以采用原位法为主、胰酶消化法为辅的培养模式,提高产前诊断的效率、准确率与成功率。

机械吹打法、胰酶消化法分离新生大鼠脑组织神经干细胞效果观察

目的对比观察机械吹打法、胰酶消化法分离培养新生大鼠脑组织神经干细胞(NSCs)的效果。方法取出生3天的新生SD大鼠大脑皮质,分别用机械吹打法、胰酶消化法分离培养(分别记为机械吹打组和胰酶消化组),通过免疫荧光法对NSCs进行鉴定和诱导分化;分别于培养第2、5、7天计数细胞球直径及数目;通过MTT法检测两组原代及第3亚代细胞的克隆增殖能力;选取第3亚代细胞进行冻存、复苏,计算细胞复苏后的存活率。结果两组均可从新生SD大鼠大脑皮质分离得到NSCs,并均可诱导分化为神经元、神经胶质细胞。培养5、7天时,机械吹打组获得的细胞球数量和直径均高于相同培养时间的胰酶消化组(P均<0.05)。机械吹打组原代细胞培养2、5、7天细胞克隆增殖能力均高于相同培养时间的胰酶消化组(P均<0.05),第3亚代细胞培养2、5天细胞克隆增殖能力均优于相同培养时间的胰酶消化组(P均<0.05)。两组第3亚代细胞冻存、复苏后存活率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论机械吹打法、胰酶消化法均可成功分离培养、诱导分化新生大鼠NSCs,机械吹打法分离培养的NSCs克隆增殖能力高于胰酶消化法。

胰酶消化法培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞

建立胰酶消化法培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞 ,并和其他大鼠胸主动脉平滑肌细胞的培养方法相比较。在无菌条件下分离雄性Wistar大鼠胸主动脉血管中膜 ,剪碎中膜 ,在 37℃用 10mL 0 .2 5 %胰酶消化大约 3.5h。中止消化后 ,在 10 0g条件下离心 5min ,收集细胞种入 2 5cm2 细胞培养瓶。结果发现 ,胸主动脉平滑肌细胞至少可以传 2 0代以上 ,并且细胞形态、生长特点、平滑肌a 肌动蛋白表达不发生明显的改变。结果提示 ,与目前的平滑肌细胞培养方法相比 ,胰酶消化法培养平滑肌细胞的方法重复性好 ,原代培养的平滑肌细胞具有数量多、生长迅速的特点。

胰酶消化法用于TB-DNA扩增的痰标本前处理及结果分析

目的 探讨胰酶对痰的消化作用及用于荧光定量PCR(FQ PCR)检测TB DNA的可行性。方法 用市售胰酶配制悬液 ,确定胰酶浓度、pH、激活剂 ,按 1∶1用量观察胰酶对痰的液化能力、对FQ PCR的影响 ,并与结核培养阳性率进行比较。 结果 5 %的胰酶悬液 (pH8.0、CaCl2 为激活剂 )对痰的消化力明显强于单纯的碱 (2 %NaOH)消化 ,且时间短、稀释小 ;对FQ PCR的扩增无影响 ;阳性率 (33.3% )明显高于培养阳性率 (12 .6 % )。结论 胰酶消化法用于痰标本的前处理是可行的 ,不仅缩短了液化时间 ,提高了阳性率 ,且易于准确定量。

用胰酶消化法分离弓形体虫体

目前，对弓形体病的诊断方法有很多，如皮内变态反应及琼脂扩散反应、间接血凝反应、染色反应法等免疫血清学诊断法。尽管这些方法具有较高的检出率，但没有一种方法比直接分离到虫体更准确而有说服力。

人脐带间充质干细胞生物特性比较:胰酶冷消化和组织块法体外培养

背景:以往采用胰酶冷消化法培养脐带间充质干细胞的研究较少。目的:比较两种方法体外培养人脐带间充质干细胞的生物学特性。方法:采用胰酶冷消化法和组织块法从人脐带中分离、纯化和传代培养人脐带间充质干细胞,记录首次出现贴壁细胞时间及原代培养周期,倒置相差显微镜观察脐带间充质干细胞的形态及生长情况,制作第3代脐带间充质干细胞生长曲线,流式细胞仪分析检测第3代脐带间充质干细胞表面标志的表达,第3代脐带间充质干细胞加入成神经诱导培养基诱导分化第3天行荧光免疫化学染色检测Nestin的表达。结果与结论:使用上述两种方法均可获得脐带间充质干细胞,胰酶冷消化法首次出现贴壁细胞时间早于组织块法(P<0.05);原代培养周期差异无显著性意义(P>0.05)。倒置相差显微镜下细胞均为贴壁生长,形态为成纤维细胞样,但胰酶冷消化法培养的少数原代细胞呈多角形,不规则,细胞的体积较组织块法大。组织块法获得第3代细胞的增殖速率显著快于胰酶冷消化法,在进入对数生长期后各个时间点细胞数量差异有显著性意义(P<0.05)。两种细胞具有均一的细胞表型,均表达CD29,CD105,不表达CD34,CD45。两种方法培养出来的第3代脐带间充质干细胞经诱导后,免疫荧光均显示神经干细胞特征性标志物nestin阳性表达。结果表明胰酶冷消化法与组织块法均能培养出脐带间充质干细胞,但组织块法更适合于此类细胞的培养,对细胞的伤害更低。

乳鼠心肌细胞酶消化培养和贴块培养法的比较

目的探索经济、简单易行的心肌细胞培养方法。方法选用新生乳大鼠心肌细胞进行0.25%胰酶分离培养和贴块培养两种培养方法。结果用0.25%胰酶消化培养可获得大量的单细胞,但是酶对细胞的损伤比较大,酶消化所受的影响因素比较多,此过程获取单细胞所需的时间比较长;贴块培养法简便易行,得到的细胞结构完整、存活率高,且经济实惠、适合长期研究且需细胞量不多的实验。结论酶分离培养和贴块培养各有优劣势,应根据不同的实验目的选用不同的培养方法。

肾活检组织Masson染色方法的改良

目的 通过对传统Masson染色方法的改良,解决肾活检光镜诊断中Masson染色存在的色彩浑浊,定位不清等问题。方法 收集2021-2022年的25例膜性肾病标本,分别采用改良染色法与传统方法,对比染色质量进行评分。结果 25例膜性肾病4种Masson染色结果比较,发现变色酸2R-亮绿+Bouin二次固定+胰酶消化法在色彩鲜明、嗜复红蛋白定位清晰及不易褪色、切片整体评分方面均优于传统方法,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 改良后的Masson的染色方法在色彩对比度、持久度均优于传统方法。

原代培养大鼠颌下腺细胞分离方法的比较研究

目的 探讨体外培养大鼠颌下腺细胞的分离方法并进行比较。方法 取 Wistar大鼠颌下腺分别采用直接分离法与胰酶消化法分离获取颌下腺细胞 ,并进行原代及传代培养 ;相差倒置显微镜观察细胞形态 ,苔盼蓝染色法测细胞成活率 ,MTT法检测培养细胞活性 ,并检测 2 4、4 8、72和 96小时不同时间培养上清液中淀粉酶的含量 ,免疫组织化学鉴定细胞来源及比例。结果 直接分离法获取的细胞活性为 70 % ,活力值为 0 .16± 0 .0 14 ,功能欠佳 ,经胰酶消化法所获取的细胞活性为 85 % ,活力值为 0 .4 5± 0 .0 13,细胞形态完整、贴壁良好 ,且功能强 ;免疫组织化学检测颌下腺细胞α- SMA抗体、CK8.13抗体、keratin抗体呈阳性反应 ,胰酶消化法颌下腺细胞反应强度大于直接分离法。结论 胰酶消化分离获取颌下腺细胞的方法优于直接分离法。

不同培养方法对人脐带间充质干细胞的影响

背景:脐带干细胞培养主要来源于足月儿,常用培养方法包括组织贴块法、胰酶消化法,但是对于不同培养方法对脐带间充质干细胞的分离结果尚存在较大的争议。目的:观察不同培养方法对脐带间充质干细胞的影响。方法:取30例足月妊娠剖宫产健康胎儿脐带,采用组织贴壁法和胶原酶-胰酶消化法进行培养,制备细胞悬液,获得人脐带间充质干细胞进行分离培养,在流式细胞仪上测定细胞生长情况。结果与结论:(1)细胞融合情况:脐带经过组织贴壁法原代培养5 d后,细胞开始从脐带组织分离,呈现梭形,培养10 d后细胞融合达到80%,脐带经胶原酶-胰酶消化法培养5 d后,可见少量形态各异的贴壁细胞分布,纤维样细胞培养2周后培养融合才达到80%;(2)细胞生长情况:两种不同培养方法分离出的脐带间充质干细胞生长情况差异无显著性意义(P>0.05);(3)细胞鉴定结果:两种培养方法培养的细胞CD13,CD29,CD44及CD105标志物表达均为阳性。(4)结果说明:人脐带间充质干细胞采用组织贴壁原代培养法培养成功率高,优于胶原酶-胰酶消化法培养。

胎鼠脊髓神经干细胞分离方法的比较

目的:比较机械法和胰酶消化法对胎鼠脊髓源神经干细胞增殖分化的影响。方法:分别用机械法和胰酶消化法分离胎鼠脊髓组织获得神经干细胞,应用台盼蓝检测细胞成活率,用无血清培养技术培养神经干细胞,应用MTT法检测细胞分裂增殖能力,采用免疫细胞化学法鉴定神经干细胞和分化细胞。结果:机械法获得的细胞数量多于胰酶消化法。细胞经过培养其增殖能力机械法略强于胰酶消化法,但无统计学意义。培养形成的细胞球Nestin阳性,诱导分化后可见NSE和GFAP阳性细胞。结论:运用机械法比胰酶消化法分离胎鼠脊髓组织获得神经干细胞方法简单,容易操作,经过培养细胞增殖能力较强。并可提供健康的细胞来源。

兔视网膜色素上皮细胞培养方法的改进

目的:寻求一种更好的培养兔视网膜色素上皮(RPE)细胞的方法。方法:在无菌滤纸上剪开眼球,固定眼杯,用胰酶直接消化视网膜色素上皮面,收取RPE细胞。将初次换液时间由取材后48 h延长至72 h,记录改变换液时间对细胞数量及细胞形态等的影响。用多巴(DOPA)染色和免疫组织化学对细胞鉴定。结果:采用改进后方法收取的细胞呈分散均匀生长。延长初次换液时间为72 h后获得的细胞增多,原代细胞长至融合状态需要的时间缩短,色素颗粒脱失现象减轻。结论:采用该方法更适于RPE细胞的收获和培养。

猪骨骼肌原代细胞培养方法的优化

猪骨骼肌细胞的原代培养在研究猪骨骼肌的发育和调控机制中发挥重要的作用。试验通过对不同的胰酶消化时间(10min,30min,60min)、离心转速(800r/min,1 000r/min,1 500r/min)以及首次换液时间(24h,36h,48h)分别进行比较和分析,培养适宜时间后观察细胞的形态、个数及贴壁成活率,筛选最佳的培养体系。试验结果显示在37℃下浓度为0.25%的胰酶消化30min,1 000r/min下离心5min,37℃恒温培养箱培养36h后对细胞进行首次换液,细胞贴壁状态和成活率最佳。研究结果为猪原代骨骼肌细胞的培养筛选了最佳的培养体系,并为猪骨骼肌生长发育机制的相关研究提供重要工具。

原代胃癌相关成纤维细胞的分离培养与鉴定方法比较

目的 通过优化人原代胃癌相关成纤维细胞的分离培养方法来提高分离培养细胞的纯度和效率,以期为胃癌的治疗建立相关模型。方法 采用胰酶消化法和组织块消化法相结合,二次筛网过滤、差速贴壁法分离培养人原代胃癌相关成纤维细胞,观察胃癌相关成纤维细胞的形态和生长特点。HE染色和免疫组化鉴别胃癌相关成纤维细胞的表面标志物。结果 0.25%胰酶消化3~4h后,经过筛网过滤,可以得到较少的胃癌相关成纤维细胞,过滤后的组织块继续在培养瓶中培养可以得到较多的胃癌相关成纤维细胞。胰酶消化法得到的细胞在20d后可以铺满瓶底,组织块培养法得到的细胞可以在14d铺满瓶底。结论 胃癌相关成纤维细胞在第5代后的生长速度开始缓慢,并且随着传代次数的增多,细胞的形态发生相应的改变,细胞触角增多,胞体变短。所获得的细胞ɑ-平滑肌肌动蛋白和波形蛋白都是呈阳性表达,角蛋白CK-18呈阴性表达。

不同胰酶消化方法用于制备猴胚肾细胞的评价

为了提高猴胚肾细胞的产量和质量，对生物制品生产中常规使用的四种细胞制备方法进行实验性评价，结果表明热消化法和冷消化法较适合于猴胚肾细胞的制备，冷消化法又优于热消化法，细胞产量高稳定性好，细胞活力强，上述两种方法也适合于幼兔肾和胎猴肺细胞的制备．

基于细胞生物学方法比较5种不同组织来源间充质干细胞的特征

背景:间充质干细胞的来源以及分离方法越来越多样,充分认识到这些间充质干细胞的异同,将有助于间充质干细胞在临床中更加合理规范的应用。目的:比较不同组织来源间充质干细胞的生物学特征。方法:采集剖宫产产妇在生育后脱落的脐带、胎盘以及部分脂肪组织,采用胰酶消化法或组织块贴壁法培养出底蜕膜间充质干细胞、绒毛膜间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、脐带胎盘连接处间充质干细胞、脐带间充质干细胞,所用的干细胞培养基有3 种:含胎牛血清的干细胞培养基、含脐血裂解物的干细胞培养基、含无血清添加物的干细胞培养基。检测不同培养条件下的细胞直径、表面标志物以及多向分化能力,检索GEO数据库分析不同间充质干细胞的基因表达情况。结果与结论:①不同培养条件影响细胞大小和细胞周期,其中无血清培养体系培养的间充质干细胞直径偏小,而脐血裂解物干细胞培养基能够增加胎盘源间充质干细胞的直径;②5 种间充质干细胞有类似的表面标志物,都具有成骨、成软骨和成脂肪分化能力,其中脂肪间充质干细胞成脂肪分化能力更强;③脂肪间充质干细胞相比于与其他4 种干细胞在基因表达上存在较大差异,具有更复杂细胞基质成分。

前列腺基质细胞的原代培养方法

目的:建立一种操作简单、成功率高、重复性好的前列腺增生组织原代基质细胞(PSC)培养方法。方法:采用胶原酶消化法、组织块贴壁法和胰酶消化组织块贴壁法,从70岁及以上男性的良性前列腺增生组织中分离培养PSC,通过显微镜观察比较PSC的数量、形态、培养周期,用免疫荧光染色法鉴定PSC的纯度。结果:胶原酶消化法得到的贴壁细胞少,细胞体积较小且形态无法铺展,增殖能力较弱;组织块贴壁法培养72h后细胞会从组织边缘缓慢爬出,生长周期长;胰酶消化组织块贴壁法,细胞培养7d后基本融合,折光性强,细胞多呈长梭形,通过免疫荧光染色鉴定,基质细胞纯度在95%以上。结论:利用胰酶消化组织块贴壁法建立了一种易行、高效且重复性好的前列腺增生组织基质细胞培养方法。

人脑胶质瘤细胞两种分离方法的对比研究

目的对比人脑胶质瘤细胞的分离纯化方法,并观察其形态学特征。方法取术后人脑胶质瘤新鲜组织,采用冷胰酶消化法和机械分离法分离后结合速差贴壁法纯化处理进行原代培养。采用吉姆萨染色对培养细胞进行形态学观察。结果在细胞产量方面冷胰酶消化法优于机械分离法。结论采用冷胰酶消化法,可以显著降低胰酶对人脑胶质瘤细胞的损害,是可靠的人脑胶质瘤细胞的分离纯化方法。

新生大鼠肝细胞分离及体外培养方法

背景:新生大鼠肝细胞是中度分化细胞,兼具肝祖细胞和成熟肝细胞的特性和功能,是研究肝细胞特性的理想细胞来源。目的:探讨新生大鼠肝细胞分离及体外培养方法。设计、时间及地点:细胞学体外实验,于2008-03/08在解放军总医院普通外科研究所完成。材料:SD新生大鼠,雌雄不限,3月龄。方法:采用组织块-胰酶冷消化法和多步低速离心获取新生大鼠肝细胞,给予含体积分数10%胎牛血清的HepatoZYME-SFM培养基体外二维培养。采用相差显微镜观察、MTT分析、PAS染色和脲酶法对培养的肝细胞生长及功能进行检测和分析。主要观察指标:肝细胞形态、活性,糖原水平,培养上清中的尿素浓度。结果:分离纯化的新生大鼠肝细胞总数1.0×106～2×106/肝,活力在90%以上,光镜下肝细胞呈圆形或卵圆形,核大而圆,胞体较成熟肝细胞小。通过多步低速离心可去除红细胞、其他非实质细胞和死亡的肝细胞,其纯度可达95%以上。肝细胞活性在培养初期即缓慢上升,至第3天时开始快速增殖,第11天时达到高峰,与第1天相比差异有显著性意义(P=0),但随后又缓慢降低,到15天时与第11天相比差异有显著性意义(P=0)培养的肝细胞贴壁生长,并保持肝细胞特异细胞形态。培养至第7天的肝细胞PAS染色呈强阳性,之后阳性细胞逐渐减少,至15d时可见少量阳性细胞。培养上清中尿素在培养初期基本没有变化,培养至第7天时显著下降。结论:组织块-胰酶冷消化法和HepatoZYME-SFM培养基二维培养为种简单有效的新生大鼠肝细胞分离培养方法。

鱼类细胞培养的方法、条件及应用研究概述

鱼类细胞培养主要有组织块法和胰酶消化法,不同的鱼类细胞对培养基、pH以及温度等的要求不同。本文概述鱼类细胞的培养方法、条件以及应用研究进展,为鱼类细胞培养研究提供基本参考资料。