胰酶-EDTA差速消化法纯化原代培养的汗腺细胞

目的：探讨胰酶-EDTA差速消化法纯化原代培养的汗腺细胞的效果.方法：取新鲜的腹部手术患者腹部皮肤,D-Hanks液浸洗去除皮肤中的血液,剪成1 mm×1 mm大小的皮粒,将剪碎的皮粒放入装有5 ml （2 mg/ml） 的Ⅱ型胶原酶的培养皿中,置于37 ℃、5%CO2孵箱中消化8-12 h,倒置相差显微镜直视下吸取游离的汗腺,用汗腺培养基培养5-7 d,观察细胞形态和生长状况,加入胰酶-EDTA混合溶液2 ml（胰蛋白酶0.25,EDTA 0.53 mol/L）消化3 min,成纤维细胞收缩变圆后立即加入胎牛血清5 ml终止消化,吸弃消化液,D-Hanks冲洗2~3次,加入5 ml含10%胎牛血清DMEM培养液继续培养.镜下观察成纤维细胞去除效果,并对纯化后的细胞进行免疫细胞化学鉴定.结果：汗腺分离培养5-7 d后,汗腺细胞呈铺路石样生长,并且汗腺细胞周围生长有大量的成纤维细胞;用胰酶-EDTA消化3 min后,细胞计数显示约有95%以上的成纤维细胞被去除;免疫细胞化学鉴定结果显示纯化后的细胞CEA和CK8染色阳性,而波形蛋白和成纤维细胞特异性蛋白染色阴性.结论：胰酶-EDTA差速消化法能够简单、快速、高效地纯化汗腺细胞.

聚乙二醇和胰蛋白酶用于猪动脉管道去细胞效果比较

目的比较0.05%胰蛋白酶-EDTA脱细胞方法与聚乙二醇(poly ethylene glycol,PEG)脱细胞方法对组织物理特性的影响和脱细胞程度。方法用聚乙二醇和胰酶-EDTA处理猪大动脉动脉管道。结果PEG组去细胞百分率为95.32%,胰酶-EDTA组去细胞百分率为90.35%,两组比较P<0.05,PEG组细胞外基质(ECM)结构保存完整;与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论PEG法处理动脉管道较传统的组织工程去细胞更为有效,优越性明显,细胞外基质保存完整,生物力学特性稳定。

3种小胶质细胞培养方法的比较

目的:建立一种小鼠小胶质细胞的简便高产量的原代培养方法。方法:在常规的神经胶质混合培养后,分别采用MeCarthy-Gulian法、营养丧失法、营养丧失+温和消化法三种方法进行小胶质细胞的分离纯化,通过细胞计数来了解比较培养细胞的产量,针对细胞表面的小胶质细胞的标志性抗原MAC-1进行免疫组织化学染色,观察细胞形态和激活状态,计算培养细胞纯度。结果:营养丧失十温和消化法细胞产量最高,三种方法的细胞培养形态、激活状态、纯度没有显著差异。结论:营养丧失和胰酶-EDTA温和消化均较经典的McCarthy-Gulian法产量高,2种方法结合起来的营养丧失+温和消化法是一种新的简便易行高产量的小胶质细胞培养方法。

一种高产量的小胶质细胞培养及其鉴定方法

目的建立一种简易高产量的原代小胶质细胞体外纯化培养方法。方法在小胶质细胞原代培养过程中以McCarthy等的经典培养方法为基础,通过提高初次接种密度,减少细胞离心过滤过程,进行不换液的营养缺失培养等重要改进,并使用低浓度胰酶EDTA消化法分离纯化小胶质细胞,使用MAC1抗体免疫化学染色标记。结果取得了高纯度和高产量的小胶质细胞。结论小胶质细胞培养过程中联合使用营养缺失法和低浓度胰酶EDTA消化法分离纯化可有效提高培养产量。