高氏盆炎方二号方对慢性盆腔炎大鼠的抗炎抗粘连作用及对ICAM-1和caspase-8表达的影响

目的探讨高氏盆炎方二号方对慢性盆腔炎(CPID)大鼠的抗炎抗粘连作用及对细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和半胱天冬酶-8(caspase-8)表达的影响。方法首先通过体外抑菌试验观察高氏盆炎方二号方药液的最低抑菌浓度(MIC)。将75只雌性SD大鼠随机分为空白组(n=10)和造模组(n=65)。造模10 d后,在造模组随机抽取5只大鼠处死,进行子宫组织HE染色后镜下呈慢性炎症改变,提示造模成功。随后将60只大鼠再随机分为模型组、中药组、中成药组及人胎盘组织液组,其中中药组又分为低、中、高剂量组,每组10只。模型组给予生理盐水2 mL/只灌胃,中药低、中、高剂量组分别给予高氏盆炎方二号方7、14、28 g/kg灌胃,中成药组给予蒲苓盆炎康颗粒3 g/kg灌胃,人胎盘组织液组给予人胎盘组织液1 mL/kg腹腔注射。以上各给药组均每日1次给药,连续给药20 d。末次给药24 h后处死大鼠并取子宫组织称重,计算子宫肿胀度及子宫系数;光镜下观察大鼠子宫组织病理学改变情况;用免疫组化法及Western-blot法检测大鼠子宫组织中ICAM-1和caspase-8蛋白表达水平。结果高氏盆炎方二号方对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌及乙型溶血性链球菌有明显的抑菌作用。与空白组比较,模型组的子宫肿胀度升高,子宫系数降低(P<0.05),提示模型建立成功;与模型组比较,各给药组的子宫肿胀度降低(P<0.05),尤以中药组高、中剂量组及人胎盘组织液组改善显著。与模型组比较,各给药组大鼠子宫组织中的ICAM-1蛋白表达水平降低,caspase-8蛋白表达水平升高(P<0.05),提示给药治疗有效;空白组与中药高剂量组、中药中剂量组及人胎盘组织液组的ICAM-1、caspase-8蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),说明以上三组疗效相当。结论高氏盆炎方二号方具有抑菌的作用,能够有效改善疾病症状、控制宫腔粘连的发展,修复受损的子宫组织形态及结构,其治疗机制可能与ICAM-1表达下调、caspase-8表达上调相关,可促进炎症细胞凋亡,增强机体抵抗力。

抗肿瘤药物新靶点半胱天冬酶-10

细胞凋亡过程是依赖天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白酶(半胱天冬酶)产生的级联反应。半胱天冬酶-10是凋亡途径中关键的启动子,能够通过寡聚而自身切割活化,并能激活下游其他半胱天冬酶,参与细胞凋亡过程。半胱天冬酶-10基因突变及其它表达异常可导致细胞凋亡和增殖失调,从而参与某些肿瘤和免疫系统疾病的发生和发展。半胱天冬酶-10有可能是抗肿瘤药物的新靶点。

马齿苋多糖干预大鼠溃疡性结肠炎Caspase-3 Caspase-8表达的研究

目的:观察大鼠溃疡性结肠炎结肠黏膜上皮细胞凋亡及其凋亡关键酶Caspase-3、Caspase-8的表达,以及马齿苋多糖对上述指标的影响,探讨马齿苋多糖干预溃疡性结肠炎的效应机制。方法:48只雄性SD大鼠按体重随机分为正常组、模型组、治疗组,对照组,每组12只。用5%2,4,6TNBs100mg/kg灌肠建立大鼠UC模型,第3天开始,除正常组外,各组分别给予等剂量0.9%氯化钠、马齿苋多糖,惠迪(美沙拉嗪)处理,连续给药7天后处死动物。应用HE染色结合肉眼评价各组大鼠组织病理学变化;应用TUNEL染色技术检测结肠上皮细胞凋亡率;应用免疫组化染色技术检测Caspase-3、Caspase-8阳性表达。结果:结肠组织形态学评分表明,治疗组与对照组比较,无统计学意义(P>0.05);治疗组与模型组相比,有统计学意义(P<0.01)。治疗组结肠黏膜上皮细胞凋亡呈下降趋势,与模型组比较,有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,无统计学意义(P>0.05)。治疗组Caspase-3、Caspase-8蛋白阳性表达减少,与模型组比较,有统计学意义(P>0.05);与对照组比较,无统计学意义(P>0.05)。结论:马齿苋多糖可能通过下调结肠黏膜上皮细胞凋亡关键调控酶Caspase-3、Caspase-8的表达,延缓肠上皮细胞凋亡,促进肠黏膜屏障修复,发挥缓解溃疡性结肠炎的效应。

Caspase-8和Caspase-3在大鼠急性心肌损伤中的作用及药物预处理对其影响

目的:研究半胱天冬酶-8(caspase-8)、半胱天冬酶-3(caspase-3)在异丙基肾上腺素(isoprena-line,Iso)致大鼠急性心肌损伤心肌细胞凋亡中的作用及碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)预处理对其影响。方法:将Wistar大鼠随机分成三组:对照组、Iso损伤组和bFGF预处理组,光镜观察心肌组织病理变化,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,免疫组化和RT-PCR法检测caspase-8、caspase-3蛋白及mRNA的表达水平,底物降解法测定酶活性。结果:损伤组心肌坏死较重,心肌细胞凋亡显著,且caspase-8、caspase-3蛋白及mRNA的表达水平明显升高,酶活性增加;预处理组心肌坏死明显减轻,细胞凋亡减少,caspase-8、caspase-3蛋白及mRNA的表达水平明显下降,酶活性受抑制。结论:bFGF预处理可能通过抑制caspase-8、caspase-3的表达及酶活性以减少心肌细胞凋亡从而减轻大鼠心肌损伤。

肾透明细胞癌易感性与半胱天冬酶8基因-6526Nins／del多态性的关系

目的探讨中国汉族人群半胱天冬酶8（CASP8）基因-6526Nins／del多态性与肾透明细胞癌（CCRCC）易感性的相关性。方法采用以医院为基础的病例一对照研究，通过问卷调查获取并采用聚合酶链反应．限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）方法检测年龄和性别匹配的中国汉族300例患者和300例正常人群的CASPS-652ins／del基因型。并采用分层分析进一步探讨与罹患CCRCC相关的可能因素。结果与ins／ins基因型携带者比较，ins／del基因型（OR=0．78，95％CI=0．55—1．09）或del／del基因型（0．34，0．14—0．83）携带者发生CCRCC的危险性明显降低。分层分析显示性别、体质量指数及饮酒与CCRCC危险性之间无明显相关，携带ins／del或del／del基因型的年轻非吸烟患者发生CCRCC的危险性明显降低（年龄：0．56，0．35—0．88；非吸烟：0．56，0．37—0．85）。结论CASP8—652ins／del多态性可能与我国汉族人群CCRCC易感性有关，ins／del基因型或del／del基因型携带者发生CCRCC的危险性要明显低于ins／ins基因型携带者。

蓝萼甲素对人肺癌A549细胞的作用及其机制

蓝萼甲素（glaucocalyxinA）是由唇形科香茶菜属植物香茶菜Rabdosia amethystoieds （Benth） Ham中分离提取出的二萜化合物，可抑制SiHa、Hela、HL-60等细胞株增殖。本文研究了蓝萼甲素对人肺腺癌A549细胞增殖的影响，并初步探讨其机制。

可溶性CD40配体对白血病HL-60细胞Caspase-3及Caspase-8表达的影响

目的 Caspase-3和Caspase-8在多种肿瘤中异常表达,与白血病的疗效等密切相关。本研究分析可溶性CD40配体(soluble CD40ligand,sCD40L)对人白血病HL-60细胞Caspase-3及Caspase-8表达的影响,探讨其对HL-60细胞的作用机制。方法 2.0、4.0和6.0mg/L的sCD40L作用HL-60细胞48h,采用流式细胞术检测HL-60细胞凋亡水平及细胞周期,RT-PCR检测HL-60细胞中Caspase-3和Caspase-8基因的表达水平,蛋白质免疫印迹法检测HL-60细胞中Caspase-3和Caspase-8的蛋白表达。结果 2.0、4.0和6.0mg/L的sCD40L作用HL-60细胞48h后,浓度依赖性诱导HL-60细胞的凋亡,凋亡率分别为(48.17±3.22)%、(60.73±5.46)%及(71.26±5.83)%,与对照组(36.42±2.75)%比较,差异有统计学意义,F=36.373,P=0.003。sCD40L阻滞HL-60细胞在G0/G1期,RT-PCR结果显示,Caspase-3和Caspase-8 mRNA的表达上调;蛋白质印迹法结果显示,Caspase-3和Caspase-8蛋白表达增强。结论 sCD40L在体外能够以浓度依赖性促进HL-60细胞凋亡,阻滞细胞在G0/G1期,其可能机制是通过激活Caspase-3和Caspase-8。

Fas通路在扇贝多肽抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡中的作用

目的从凋亡相关分子Fas(CD95)、Fas相关死亡结构域(Fas associated protein with death domain,FADD)及半胱天冬酶-8(caspase-8)的角度,研究扇贝多肽(polypeptide from Chlamys farreri,PCF)抑制紫外线B(Ultraviolet B,UVB)诱导的人角质形成细胞株(immortalized human keratino,HaCaT)细胞凋亡的作用机制。方法实验设计为6组:对照组、UVB模型组、UVB+5.68mmol·L-1维生素C阳性对照组、UVB+5.69mmol·L-1PCF组、UVB+2.84mmol·L-1PCF组、UVB+1.42mmol·L-1PCF组。以正交实验设计确立UVB诱导的HaCaT细胞凋亡模型;琼脂糖凝胶电泳和荧光染色(Ho-echst33258)分析PCF对UVB诱导的HaCaT细胞凋亡的影响;琼脂糖凝胶电泳分析caspase-8抑制剂(z-IETD-fmk)对UVB诱导的HaCaT细胞凋亡的影响;逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)检测Fas(CD95)mRNA的表达;蛋白质印迹法检测FADD及caspase-8蛋白的表达。结果PCF能明显抑制UVB引起的HaCaT细胞凋亡;z-IETD-fmk对UVB诱导的HaCaT细胞凋亡有明显抑制作用;1.42～5.69mmol·L-1内的PCF可剂量依赖性抑制UVB引起的Fas,FADD的表达增加及caspase-8的活化。结论PCF可剂量依赖性抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡,其作用机制与抑制Fas,FADD的表达及caspase-8的活化有关。

中药复方PRD对OLETF大鼠视网膜细胞凋亡的干预作用

目的:探讨中药复方菩人丹(PRD)对OLETF大鼠视网膜中自杀相关因子(fas)和半胱天冬酶-8(caspase-8)表达的干预作用。方法:将24只成模的OLETF大鼠随机分为PRD治疗组、糖尿病模型组,每组均为12只,同周龄12只雄性LETO大鼠为正常对照组,PRD治疗组大鼠连续灌胃PRD,1.8 g/kg,1次/d,2个月。HE染色观察大鼠视网膜的形态结构改变;TUNEL法检测OLETF大鼠视网膜神经细胞的凋亡情况;免疫组化法和Western Blot方法检测OLETF大鼠视网膜fas和caspase-8表达的蛋白;RT-PCR方法检测各组大鼠视网膜中fas和caspase-8 mRNA的表达情况。结果:与正常对照组LETO大鼠相比,OLETF模型组的大鼠视网膜出现了明显的病理变化,神经细胞的凋亡指数、fas、caspase-8的蛋白及mRNA表达明显升高(P<0.01)。与模型组大鼠相比,PRD治疗组大鼠视网膜的病理变化明显减轻,神经细胞的凋亡指数、fas、caspase-8蛋白及mRNA表达明显降低(P<0.01)。结论:PRD可通过抑制fas、caspase-8的表达,减少糖尿病大鼠视网膜神经细胞的凋亡,从而起到保护糖尿病视网膜神经组织的作用。

全脑缺血再灌注大鼠海马Caspase-3、8表达及HWTX-I神经保护机制的研究

为观察虎纹捕鸟蜘蛛毒素-I(HWTX-I)对全脑缺血再灌注大鼠海马组织凋亡相关因子Caspase-3、Cas-pase-8mRNA及蛋白表达的影响。将SD大鼠随机分为假手术组、生理盐水组及用药组;采用改良的Pulsinelli"四血管阻断"法制备全脑缺血损伤模型并结合蛛网膜下腔置管术;免疫组织化学法检测Caspase-3、Caspase-8蛋白水平的表达;RT-PCR法检测凋亡相关因子Caspase-3、Caspase-8mRNA表达变化。免疫组织化学法检测结果显示,HWTX-I能显著降低全脑缺血再灌注大鼠海马组织CA1区Caspase-3、Caspase-8蛋白水平的表达(P<0.05);RT-PCR结果显示,HWTX-I能显著降低全脑缺血及再灌注大鼠海马组织Caspase-3、Caspase-8核酸水平的表达(P<0.05)。提示:HWTX-I蛛网膜下腔用药对全脑缺血再灌注SD大鼠海马组织的保护作用可能通过抑制凋亡相关因子Caspase-3、Caspase-8mRNA和蛋白表达,从而发挥其抗脑缺血再灌注损伤的保护作用。

Caspase-3,-8,-9在铜诱导大鼠原代皮层神经元凋亡中的作用研究

目的通过建立体外铜诱导神经元模型,观察醋酸铜对大鼠原代皮层神经元凋亡及活化caspase-3,caspase-8和caspase-9蛋白表达的影响,探索高浓度铜导致大鼠神经元损伤的作用机制。方法采用不同浓度(20,40,80μM)醋酸铜诱导体外培养72h的大鼠原代皮层神经元;MTT法检测神经元活力,Hoechst33258染色和流式Annexin-V/PI法检测神经元凋亡,Western blot法检测不同浓度和时间点活化的caspase-3、caspase-8和caspase-9蛋白表达。结果体外培养的原代皮层神经元经醋酸铜诱导48h后,凋亡率上升,细胞活力呈浓度梯度下降,活化的caspase-8和caspase-9在铜诱导4h20μM组开始升高,48h各浓度组表达最高,呈时间与浓度梯度依赖;活化caspase-3在铜诱导24h20μM组才开始升高,激活的时间晚于caspase-8和caspase-9,48h各浓度组表达最高。结论过量铜可导致体外培养大鼠原代皮层神经元发生凋亡,caspase-3、caspase-8和caspase-9级联反应在铜诱导皮层神经元凋亡过程中发挥重要调控作用。

血管内皮生长因子对乙醇诱发大鼠肝窦内皮细胞凋亡的作用

目的研究乙醇引起肝窦内皮细胞(SEC)死亡的类型和血管内皮生长因子(VEGF)对这种死亡的作用,以及涉及 Ets-1和半胱氨酸蛋白水解酶(Caspase)-8的作用机制。方法按照 Braet等的方法并作改进,从 Wistar 雄性大鼠分离和培养 SEC。然后,将 SEC 与乙醇(25～100 mmol/L)和VEGF(20～30 ng/ml)共同孵育6 h,采用缺口末端标记(TUNEL)技术检测 SEC 凋亡。以 Western 印迹法测定 Ets-1蛋白表达和 FLICE/Caspase-8比色蛋白酶检测试剂盒测定 Caspase-8活性的变化。结果相差显微镜下,培养3 d 的SEC 呈纺锤状并基本融合。而与乙醇孵育的过程中 SEC 趋于皱缩和死亡。荧光显微镜下,对照 SEC 绝大多数呈 TUNEL 染色阴性;添加乙醇(100 mmol/L)2 h 后TUNEL 染色阳性细胞开始增加,6 h 后约75%细胞呈 TUNEL 染色阳性;并且,SEC 与乙醇(25～100 mmol/L)共同孵育6 h,TUNEL 染色阳性的 SEC 增加呈明显剂量依赖性关系(均 P<0.05)。VEGF(20～30 ng/ml)明显抑制100 mmol/L 的乙醇引起 SEC 凋亡,呈明显剂量依赖性关系(P<0.05);加入 VEGF(30 ng/ml)以后引起的 TUNEL 染色阳性细胞数只是单纯与乙醇孵育的71%(P<0.05)。加入100 mmol/L 乙醇培养6 h 后,SEC 的 Ets-1蛋白表达明显减少,VEGF(30 ng/ml)防止乙醇(100 mmol/L)引起 SEC 表达 Ets-1蛋白减少。SEC 与乙醇(100 mmol/L)孵育2 h 时 Caspase-8活性明显增加至44.9±14.3;VEGF(20和30 ng/ml)防止乙醇(100 mmol/L)引起 SEC 表达 Caspase-8活性增加(分别为30.4±2.0和25.2±2.2,均 P<0.05)。结论 VEGF 防止乙醇诱导的 SEC 凋亡,至少部分可能是通过抑制乙醇下调 SEC 表达 Ets-1蛋白和乙醇上调 Caspase-8活性表达。

四藤方对人胃癌裸鼠皮下移植瘤生长及凋亡作用

目的:观察清热解毒中药四藤方对人胃癌SGC-7901细胞裸鼠移植瘤生长及凋亡影响。方法:人胃癌SGC-7901细胞BALB/C裸小鼠皮下移植瘤模型,随机分为对照组、四藤方组、5-Fu组3组,每组10只;对照组予0.9%氯化钠溶液0.3mL灌胃,1次/d;四藤方组予四藤方煎剂0.3mL灌胃,1次/d;5-Fu组予5-Fu 1mg腹腔注射,每周1次,每次1mg;观察各组裸小鼠移植瘤生长情况。TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组织化学法检测肿瘤组织凋亡相关蛋白半胱天冬酶-8(Caspase-8)、Caspase-9表达情况。结果:四藤方组、5-Fu组肿瘤生长变缓,裸小鼠移植瘤体积、质量与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);TUNEL检测显示四藤方组、5-Fu组移植瘤细胞凋亡率高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);四藤方组与5-Fu组治疗后移植瘤组织Caspase-8、9蛋白表达升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:四藤方可以抑制SGC-7901胃癌肿瘤生长,可能与促进细胞凋亡,上调凋亡相关蛋白Caspsse-8、9表达相关。