胱天蛋白酶募集域蛋白9介导心肌缺血再灌注损伤发生发展的机制研究进展

及时血运重建恢复冠状动脉血流是心肌梗死患者治疗的关键,但再灌注同时可能对缺血心肌造成二次损伤,即心肌缺血再灌注损伤。胱天蛋白酶募集域蛋白9(CARD9)是主要在骨髓细胞表达的重要衔接蛋白,在心肌缺血再灌注损伤中能够介导心肌细胞炎症反应、凋亡及自噬,可在炎症及免疫反应中充当调节器,从而参与心肌缺血再灌注损伤的发生发展。深入了解CARD9介导心肌缺血再灌注损伤的相关机制,或可为心肌缺血再灌注损伤的治疗提供新思路。

胱天蛋白酶募集域蛋白9的可溶性表达及纯化

目的 制备可溶性TrxA-CARD9蛋白及其临床突变型。方法 将构建好的原核系统表达质粒转化至大肠杆菌感受态细胞后,通过不同诱导条件筛选合适的表达条件。使用精氨酸辅助目的蛋白进行非变性溶解,并通过聚乙烯亚胺和硫酸铵沉淀法去除核酸和杂蛋白,最终利用阴离子交换和肝素亲和色谱柱纯化融合蛋白。结果 成功构建表达质粒并纯化融合蛋白,酶切去除TrxA标签后通过质谱鉴定其为可溶性CARD9蛋白。结论 成功实现了全长CARD9序列在原核系统中的高可溶性表达,为研究CARD9蛋白生物结构和功能提供了基础,并为寻找治疗真菌感染的潜在靶点和治疗方法提供新思路。

动态观察胱天蛋白酶募集域蛋白9在心肌梗死后表达的基础研究

目的:探讨心肌梗死后小鼠胱天蛋白酶募集域蛋白9(caspase recruitment domain-containingprotein 9,CARD9)的表达及其与炎症的关系。方法:选择野生型小鼠和CARD9敲除小鼠各26只,分为野生型对照组、野生型心肌梗死组、CARD9敲除对照组和CARD9敲除心肌梗死组共4组,每组13只。心肌梗死模型组是通过结扎冠状动脉前降支复制心肌梗死模型,而对照组仅穿线不结扎。于模型复制后第1天,从每组随机抽取3只小鼠处死并行氯化三苯四氮唑(TTC)染色,观察模型是否复制成功;于第3天和第28天,每组分别随机各抽取3只小鼠,处死后取心肌组织行石蜡切片,苏木素伊红(HE)染色和免疫组化染色观察炎症细胞浸润,免疫组化染色和蛋白定量观察CARD9表达。结果:TTC证实心肌梗死模型复制成功;免疫组化染色和蛋白印迹证实,与野生型对照组比较,野生型心肌梗死组3d及28d时梗死区域CARD9表达均增高(P<0.05)与野生型心肌梗死组比较,3 d时CARD9敲除组心肌梗死组巨噬细胞浸润增加(P<0.05)。结论:心肌梗死后CARD9表达上调,而CARD9敲除炎症细胞浸润增加,提示CARD9参与心肌梗死并对早期炎症可能有一定抑制作用。

胱天蛋白酶募集域蛋白9在中重度缺血性脑卒中发病早期阶段的作用

目的观察胱天蛋白酶募集域蛋白9(CARD9)在急性中重度缺血性脑卒中发病早期阶段的作用,探讨脑卒中炎症的发病机制。方法入选36例美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分> 5分的急性中度及以上缺血性脑卒中患者为病例组;入选20例年龄、高血压、糖尿病等基础病与病例组差异无统计学意义的志愿者作为对照组。采集病例组发病第1、3、7天及对照组第1天外周血单个核细胞(PBMC)。Western blot检测CARD9表达水平及核转录因子-κB(NF-κB)活性(p-p65/p65水平);RT-PCR检测炎症因子肿瘤坏死因子-ɑ(TNF-ɑ)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6) mRNA的表达水平;病例组第1、3、7天使用NIHSS评分评估脑缺血损伤程度。结果 Western blot结果表明,入院第1、3、7天时,病例组CARD9表达及NF-κB活性与对照组比较显著升高(CARD9:1.17±0.14、1.08±0.15、0.97±0.16 vs. 0.34±0.02,NF-κB:1.78±0.06、1.70±0.07、1.46±0.04 vs. 1.21±0.12,P均<0.05);RT-PCR结果表明,入院第1、3、7天时,病例组TNF-αmRNA表达与对照组比较显著升高(5.34±0.14、4.57±0.15、3.58±0.19 vs. 1.00±0.08,P均<0.01),病例组IL-1βmRNA表达与对照组比较显著升高(6.49±0.12、4.85±0.23、3.38±0.31 vs. 1.00±0.11,P均<0.01),病例组IL-6 mRNA表达与对照组比较显著升高(10.29±0.55、7.32±0.44、4.56±0.33 vs. 1.00±0.07,P均<0.01)。Pearson相关分析表明,脑卒中患者PBMC中NF-κB活化、TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA及NIHSS评分与CARD9表达呈正相关(r值分别为0.971、0.974、0.970、0.982、0.891,P均<0.01)。结论 CARD9在早期中重度缺血性脑卒中患者PBMC中的表达增高,可能通过NF-κB信号通路介导缺血性脑损伤炎症反应。

胱天蛋白酶募集域蛋白9?麦芽糖结合蛋白融合蛋白的原核表达及纯化

目的胱天蛋白酶募集域蛋白9(CARD9)可激活核因子?κB(NF?κB)、丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)等通路参与免疫,但其作用机制至今尚未阐明。为进行相关体外实验,构建CARD9?麦芽糖结合蛋白(MBP)融合蛋白的原核表达载体,并对融合蛋白进行表达鉴定及纯化。方法利用PCR技术分别扩增CARD9和MBP基因的编码序列,将两者正确插入pET?30a(+)载体中得到重组质粒,后转化至大肠埃希菌DH5α感受态细胞中,并进行PCR和酶切鉴定以及基因测序。将正确的重组质粒转化至大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,筛选不同条件进行IPTG诱导表达,通过SDS?PAGE电泳检测目的蛋白质的相对分子质量。通过MBP麦芽糖层析柱和分子筛层析柱对CARD9?MBP融合蛋白进行纯化,用HRV3C蛋白酶酶切去除MBP标签后进行MALDI?TOF质谱鉴定。结果成功构建CARD9?MBP融合蛋白的原核表达载体,PCR和酶切鉴定为阳性且基因测序结果与目的序列一致。SDS?PAGE电泳显示,在大肠埃希菌BL21(DE3)中成功诱导表达出相对分子质量约为105 000的目的蛋白。通过MBP麦芽糖层析柱的初步纯化后,可得到相对较纯的融合目的蛋白,经HRV3C蛋白酶酶切去除MBP标签后行MALDI?TOF质谱鉴定其确为CARD9蛋白。后期通过分子筛层析柱进一步纯化得到了更纯的CARD9?MBP融合蛋白。结论成功构建了重组CARD9?MBP融合蛋白的原核表达载体,并进行了大量可溶性表达。通过MBP麦芽糖层析柱和分子筛层析柱的纯化,可得到较纯的目的蛋白。

胱天蛋白酶募集域蛋白9在非感染性炎症疾病中的研究进展

胱天蛋白酶募集域蛋白9（CARD9）是一种重要的衔接蛋白，通过蛋白-蛋白的相互作用，调节细胞内信号传递。近年来研究发现，CARD9在感染性疾病中发挥重要作用，在非感染性炎症疾病中亦明显表达，其可能参与非感染性炎症疾病的发生、发展，在其发病机制中发挥调控作用。本文简要介绍CARD9的结构及其与机体炎症信号通路的关联，重点就CARD9在心血管系统、消化系统及自身免疫系统等非感染性炎症疾病中的作用及机制的研究进展进行综述。

炎症小体Nod样受体蛋白3及胱天蛋白酶募集域蛋白8基因多态性与急性冠脉综合征的相关性

目的 探讨Nod样受体蛋白3（NLRP3）rs10754558位点C〉G和胱天蛋白酶募集域蛋白8（CARD8）rs2043211位点A〉T多态性与急性冠脉综合征（ACS）发病的关系。方法 入选450例ACS患者和380例对照组人群,使用ABI Snapshot方法分析NLRP3rs10754558位点和CARD8rs2043211位点多态性;冠状动脉造影后以Gensini评分评价冠脉狭窄程度;Elisa测定血清白细胞介素-1β（IL-1β）浓度。结果 NLRP3rs10754558位点对照组和ACS组基因型频率比较差异有统计学意义（χ~2=7.64,P=0.022）,NLRP3rs10754558位点G等位基因与ACS发病相关（AOR=1.334,95%CI=1.085~1.642,P=0.006）。而CARD8rs2043211位点两组间基因型频率比较差异无统计学意义（χ~2=1.08,P=0.582）,且与ACS发病无明显关系（AOR=1.168,95%CI=0.942~1.449,P=0.156）。ACS患者NLRP3rs10754558位点GG基因型Gensini评分高于CC基因型（74.07±2.13 vs.42.91±1.80,P〈0.001）;IL-1β质量浓度GG基因型显著高于CC基因型[（3.21±2.68）pg/mL vs.（1.37±1.36）pg/mL,P〈0.001]。结论NLRP3rs10754558位点C〉G基因多态性与中国汉族人群ACS发病及冠状动脉狭窄程度有关;G等位基因是ACS发病的危险等位基因,其作用与IL-1β浓度升高有关。

胱天蛋白酶募集域蛋白9在乳腺癌患者组织及癌旁组织中的表达与其相关生物学行为的关联性分析

目的探讨胱天蛋白酶募集域蛋白9(CARD9)在乳腺癌患者组织、癌旁组织中的表达与其相关生物学行为的关联性。方法选取2018年5月至2019年12月本院乳腺癌患者104例为研究对象,手术治疗时均取乳腺癌组织及配对癌旁组织(距肿瘤边缘>5 cm处),分别采用免疫组化法检测乳腺癌组织及癌旁组织CARD9表达水平,并对比不同生物学行为乳腺癌CARD9阳性表达率。结果乳腺癌组织CARD9阳性表达率为70.19%,高于癌旁组织29.81%,差异有统计学意义(P<0.05);肿瘤直径≥5 cm、雌激素受体(ER)阳性者CARD9阳性表达率分别为81.25%、81.54%,均高于肿瘤直径<5 cm、ER阴性者33.33%、51.28%,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论CARD9在乳腺癌中呈异常高表达,能特异性促进乳腺癌细胞增殖,临床有望将调控CARD9表达作为治疗乳腺癌的新靶点。

胱天蛋白酶募集域蛋白家族在心血管疾病中的作用研究进展

近年来关于胱天蛋白酶募集域蛋白(caspase recruitment domain protein,CARD)的研究较多,主要发现其与免疫、炎症及细胞凋亡的调节有关。有研究表明,CARD家族在心血管疾病的发生、发展中起着重要作用,参与了心肌肥厚、心肌纤维化和心肌梗死等的病理、生理过程。压力超负荷、缺血缺氧、交感神经激活等各种刺激因素均可显著影响CARD家族成员活性,进而通过调控核转录因子κB、丝裂原活化蛋白激酶等多种信号通路的表达影响心血管疾病的发生与发展。深入探讨CARD家族成员的调控机制,有望为心血管疾病的防治提供新的线索。结合国内外研究进展,本文就CARD家族成员在心血管系统生理、病理过程中的作用予以综述。

Nod样受体蛋白3和胱天蛋白酶募集域蛋白8基因多态性与克罗恩病的相关性

目的 探讨Nod样受体蛋白3(NLRP3)和胱天蛋白酶募集域蛋白8(CARD8)基因多态性与克罗恩病(CD)的相关性.方法 收集130例CD患者和144名正常对照者,采用改良多重高温连接酶检测反应技术检测NLRP3(rs10754558)和CARD8(rs2043211)2个单核苷酸多态性(SNP).结果 CD组与对照组比较,NLRP3(rs10754558)和CARD8(rs2043211)2个SNP位点的突变等位基因和基因型频率差异均无统计学意义(P>0.05).分层分析显示,与结肠型CD比较,回肠病变CD患者CARD8(rs2043211)位点的突变等位基因(T)和基因型(TT)频率均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 NLRP3(rs10754558)和CARD8(rs2043211)基因多态性与CD的易感性无关,而CARD8(rs2043211)基因突变可能影响CD患者的疾病部位.

CARD9蛋白与先天性免疫

先天性免疫是机体防御病原体感染的第一道防线,在宿主防御体系中发挥重要作用。新近发现的胱天蛋白酶募集域蛋白9(caspase recruitment domain protein9,CARD9)在先天性免疫机制中作为一个重要的衔接蛋白,调节着其下游信号的激活。该文介绍CARD9分子结构、细胞组织分布及其在先天性免疫中的作用。

血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白在AP患者中的变化及其意义

目的探讨血尿淀粉酶、C反应蛋白(CRP)、胱天蛋白酶募集域蛋白9(Card9)在急性胰腺炎(AP)患者中的表达及其意义。方法选取本院2014年6月至2016年12月确诊的128例AP患者(AP组)、年龄及性别相匹配的健康自愿者64例(对照组),采用全自动生化法检测两组的血尿淀粉酶、血清CRP水平,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测两组外周血单核细胞中Card9蛋白表达水平,并根据AP患者病情分为轻症AP、重症AP进行分层分析。结果AP组患者的血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白水平均显著的高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);重症AP组患者的血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白水平均显著的高于轻症AP组患者,差异具有统计学意义(P<0.05);AP组患者的血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白水平与Ranson评分均呈显著的正相关关系(P<0.05)。结论AP患者血尿淀粉酶、CRP、Card9蛋白水平升高显著,并且与病情的严重程度具有一定的相关性。

直肠癌患者的血清C型凝集素受体及其下游效应分子CARD9表达与临床病理特征和预后的关系

目的探究直肠癌患者的血清C型凝集素受体(CLR)及其下游效应分子胱天蛋白酶募集域蛋白9(CARD9)表达与临床病理特征和预后的关系。方法选择2018年3月至2020年3月国药同煤总医院收治的98例直肠癌患者作为研究对象(设为观察组),另选择45名同期在该院体检的健康志愿者设为对照组。采用ELISA法检测血清可溶性树突状细胞特异性细胞间黏附分子3结合非整合素(sDC-SIGN)和CARD9表达水平,并分析其与直肠癌患者临床病理特征的关系。采用Pearson相关性分析探讨血清sDC-SIGN与CARD9表达的关系。入组直肠癌患者术后均随访3年,计算3年总生存(OS)率。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,分析血清sDC-SIGN和CARD9表达与直肠癌患者预后的关系。采用多因素Cox回归分析探讨直肠癌患者预后的影响因素。采用ROC曲线分析血清sDC-SIGN和CARD9对直肠癌患者术后生存情况的预测价值。结果与对照组相比,观察组的血清sDC-SIGN表达水平降低,血清CARD9表达水平升高,2组的差异均有统计学意义(P均<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,直肠癌患者的血清sDC-SIGN与CARD9表达呈显著负相关(r=-0.743,P<0.05)。与无淋巴结转移的直肠癌患者相比,有淋巴结转移的患者的血清sDC-SIGN表达水平显著降低,而血清CARD9表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。sDC-SIGN低表达组的3年OS率显著低于sDC-SIGN高表达组,CARD9高表达组的3年OS率显著低于CARD9低表达组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示,分化程度、TNM分期、淋巴结转移、血清sDC-SIGN和CARD9均是影响直肠癌患者预后的独立危险因素(P均<0.05)。血清sDC-SIGN和CARD9联合预测直肠癌患者术后3年生存情况的ROC曲线下面积(AUC)为0.896,均大于两者单独预测的AUC(P均<0.05)。结论血清sDC-SIGN和CARD9表达水平均与直肠癌发生密切相关,且血清sDC-SIGN低表达及血清CARD9高表达均提示直肠癌患者术后预后较差,其可能成为直肠癌诊断和预后预测的新血清学标志物。

CARD9蛋白与乳腺癌患者特征及癌细胞增殖、凋亡、侵袭的影响

目的探讨胱天蛋白酶募集域蛋白9(caspase recruitment domain containing protein 9,CARD9)与乳腺癌患者临床特征关系及对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、凋亡、侵袭的影响。方法选取2018年1月至2019年9月咸宁市中心医院保存的乳腺癌标本90例,同时选取癌旁组织作为对照,采用Western印迹检测CARD9蛋白表达,组间差异比较采用t检验;选取人类乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞,分为对照组、空白转染组和阳性转染组,其中空白转染组转染空白质粒,阳性转染组转染CARD9表达质粒,采用CCK8试验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell试验检测细胞侵袭,组间差异比较采用F检验。结果乳腺癌组织CARD9蛋白相对表达量为(1.03±0.22),明显高于癌旁组织(P<0.05);肿瘤直径>5 cm、TNM分期Ⅲ期、ER表达阳性组织CARD9蛋白相对表达量分别为(1.12±0.20)、(1.27±0.21)和(1.12±0.19),明显高于肿瘤直径≤5 cm、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、ER表达阴性组织(P<0.05);阳性转染组细胞培养24、48和72 h时A值分别为(0.487±0.102)、(0.702±0.107)和(0.972±0.106),明显高于对照组和空白转染组(P<0.05);阳性转染组、空白转染组和对照组细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.05);阳性转染组细胞侵袭数为(101.2±11.4)个,明显多于空白转染组和对照组(P<0.05)。结论乳腺癌组织CARD9蛋白表达上调,与肿瘤直径、TNM分期及ER表达有一定关系;CARD9表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及侵袭能力有一定影响,对细胞凋亡无明显影响。

胱天蛋白酶募集域蛋白9基因多态性与急性胰腺炎易感性的相关性研究

目的探讨胱天蛋白酶募集域蛋白9(Card 9)基因多态性与AP患病风险的相关性。方法收集2019年6月至2020年2月间上海市松江区中心医院收治的70例AP患者的临床资料,同时选取70例健康体检者作为对照组。采用TaqMan探针法检测所有受试者Card 9基因rs10870077 C>G、rs4077515 A>G、rs10781499 A>G、rs141992399 C>G、rs139265120 A>G突变。应用实时荧光定量PCR检测血清Card 9 mRNA表达,电化学发光法分别检测血清IL-6、降钙素原水平,散色比浊法检测CRP水平。结果AP患者Card 9基因rs10870077 C>G突变(CG基因型)占比显著高于对照组(50.0%比31.4%),差异有统计学意义(P<0.05)。rs4077515AG、rs10781499AG基因型占比与对照组差异无统计学意义。rs141992399 C>G、rs139265120 A>G突变率特别低。rs10870077 CG基因型AP患者血清Card 9 mRNA表达量显著高于对照组(6.20±2.82比3.90±1.96),差异有统计学意义(P<0.05),而rs4077515AG、rs10781499AG基因型AP患者血清Card 9 mRNA水平与对照组差异无统计学意义。rs10870077 CG基因型AP患者血清IL-6水平较rs10870077 CC、GG基因型显著升高[(614.7±1531.8)ng/L比(372.5±1127.9)、(385.5±598.7)ng/L],而CRP水平较GG基因型显著降低[(34.84±50.64)mg/L比(55.30±87.02)mg/L],降钙素原水平较GG基因型显著升高[(1.98±4.70)μg/L比(0.77±1.12)μg/L],差异均有统计学意义(P值均<0.05)。结论Card 9基因rs10870077 C>G突变可上调Card 9 mRNA表达,增加血清IL-6水平,该突变可能是AP发生的高风险因素。

胱天蛋白酶募集域蛋白9基因多态性与急性胰腺炎及生长抑素临床疗效的关系

目的探讨胱天蛋白酶募集域蛋白9(caspase recruitment domain protein 9,Card9)基因多态性与急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)及生长抑素临床疗效的关系。方法选取2019年6月至2020年5月上海市松江区中心医院就诊的86例AP患者为研究对象,同期选择健康志愿者81名为对照组,进行前瞻性队列研究。查阅国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)核苷酸数据库,筛选Card9的10个常见单核苷酸多态性位点。SNapShot微测序法检测Card9单核苷酸多态性位点。AP患者均给予生长抑素治疗,观察Card9单核苷酸多态性与AP患者临床症状、辅助检查指标的关系。正态分布的计量资料两组间比较采用独立样本t检验;非正态分布计量资料以M(Q1,Q3)表示,组间比较应用秩和检验。计数资料组间比较采用χ^(2)检验。结果AP组患者Card9 rs10870077 C>G单核苷酸多态性位点频率较健康对照组显著增加,差异有统计学意义(OR=1.934,95%CI=1.011~3.700,P=0.046)。与CC基因型相比,Card9 rs10870077 C>G中重症AP患者生长抑素治疗组腹痛腹胀消失时间明显延长[(5.64±2.06)d与(3.76±1.23)d,t=2.98,P=0.006],Card9 rs10870077 C>G重症AP患者生长抑素治疗组住院时间增加[(13.25±5.31)d与(9.00±3.68)d,t=1.51,P=0.170]。结论Card9 rs10870077 C>G是AP的易感因素,与重症AP生长抑素临床疗效的个体差异存在一定相关性。

胱天蛋白酶募集域蛋白9在胰腺腺泡细胞导管组织转化中的作用

目的探讨巨噬细胞胱天蛋白酶募集域蛋白9(card9)在胰腺腺泡细胞导管组织转化中的作用。方法构建3条靶向card9的小分子干扰RNA(siRNA-card9),荧光显微镜下观察转染巨噬细胞的荧光强度,采用实时定量PCR法检测巨噬细胞card9 mRNA表达量,筛选巨噬细胞的最佳转染效率。将5×10^(5)巨噬细胞和100μg/mlβ葡聚糖体外常规培养12、24 h后,分成阳性细胞组(巨噬细胞)、β葡聚糖刺激阳性细胞组、阴性细胞组(card9^(-/-)巨噬细胞)、β葡聚糖刺激阴性细胞组,采用蛋白质免疫印迹法检测各组巨噬细胞card9蛋白表达水平。取1×10^(5)巨噬细胞、1×10^(5)胰腺腺泡细胞加入Transwell小室上下层共培养120 h后,分为阳性细胞组(巨噬细胞+腺泡细胞)、100和500μg/mlβ葡聚糖刺激阳性细胞组、阴性细胞组(card9^(-/-)巨噬细胞+腺泡细胞)、100和500μg/mlβ葡聚糖刺激阴性细胞组,取下室的胰腺腺泡细胞,采用免疫荧光化学染色法检测腺泡细胞导管组织转化标志物CK19蛋白表达。结果siRNA-card9转染巨噬细胞24 h荧光强度最强,浓度为200 nmol/L时抑制效率最高。阳性细胞组、β葡聚糖刺激阳性细胞组、阴性细胞组、β葡聚糖刺激阴性细胞组培养24 h后,巨噬细胞card9蛋白表达量分别为0.81±0.05、1.46±0.05、0.42±0.06、0.46±0.06,β葡聚糖刺激阳性细胞组较阳性细胞组显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。100和500μg/mlβ葡聚糖刺激阳性细胞组腺泡细胞内CK19绿色荧光较阳性细胞组明显增强,且呈β葡聚糖剂量依赖性;而阴性细胞组、100和500μg/mlβ葡聚糖刺激阴性细胞组腺泡细胞内CK19绿色荧光强度均较阳性细胞组显著降低。结论巨噬细胞card9表达水平升高可诱导腺泡细胞导管组织转化,提示可能存在card9介导的胰腺癌发病机制。

胱天蛋白酶募集域蛋白9基因相关侵袭性念珠菌病一例并文献复习

目的总结胱天蛋白酶募集域蛋白9(CARD9)基因相关侵袭性念珠菌病的临床特点、诊断及治疗,并报道该基因的一种新突变。方法描述1例2018年12月底于首都儿科研究所附属儿童医院收入院的以中枢神经系统感染及腹膜后肿物为主要临床表现的侵袭性念珠菌病患儿的临床特征、辅助检查和治疗经过及随访结果,对患儿及其父母进行全基因外显子组检测及一代测序验证从而明确诊断;并以"CARD9""invasive candidiasis""侵袭性念珠菌病"为关键词在PubMed数据库、万方数据库、中国知网数据库检索自建库至2020年5月的相关文献,进行文献复习。结果患儿男性,10岁,既往健康,亚急性病程,以腹泻症状起病,2个月余后病情进展迅速,相继出现头痛、呕吐、抽搐、意识障碍等神经系统受累症状,脑脊液及血液中多次培养出白色念珠菌,大便中找到类酵母样真菌,头部磁共振成像提示梗阻性脑积水,腹部CT可见腹膜后肿物及肠管壁增厚。对患儿及其父母核心家系采血行全基因外显子组检测及一代测序验证,结果发现患儿CARD9基因存在c.952-12956delinsAG纯合变异,为未报道的致病变异。经静脉联合抗真菌药物治疗症状无明显缓解,行侧脑室引流手术及侧脑室给予抗真菌药物治疗9周,临床症状及脑脊液常规生化改善,培养转阴,腹膜后肿物缩小出院。出院后继续口服联合抗真菌药物治疗4个月,患儿无特殊不适感,体力稍差,脑脊液白细胞及蛋白仍偏高,头部磁共振成像仍可见脑积水及脑室旁白质异常信号,腹部CT可见腹膜后肿物较前缩小。共检索到文献15篇,全世界共报道了21例CARD9基因相关侵袭性念珠菌病患者(不含本例),中枢神经系统感染常见。结论CARD9基因缺陷患者选择性地对真菌易感,发生侵袭性念珠菌病常累及中枢神经系统,病情重。应予全身足量、长疗程的抗真菌药物治疗,并发脑积水者则需外科治疗。本次报道的新突变丰富了CARD9基因的变异多样性。对不明原因的侵袭性念珠菌病患者,建议行基因检测,关注CARD9基因缺陷等先天性免疫缺陷病。

胱天蛋白酶募集域蛋白9与小鼠缺血性脑损伤炎症反应的相关性研究

目的研究缺血性脑损伤小鼠脑组织中胱天蛋白酶募集域蛋白9(caspase recruitment domain protein 9,CARD9)与炎症反应的关系。方法取24只SPF级BALB/c雄性小鼠随机(随机数字法)分成4组,即假手术组、缺血3 h组、缺血6 h组、缺血12 h组,每组6只。缺血组小鼠采用线栓栓塞法构建永久性大脑中动脉阻塞(permanant middle cerebral artery occlusion,pMCAO)模型,各组于术后预定时间点处死小鼠。通过Western blot检测患侧脑组织中CARD9水平和NF-κB的活化,RT-PCR和ELISA分别检测患侧脑组织中炎症因子TNF-α、IL-lβ、IL-6 mRNA及蛋白表达量。采用SPSS 21.0软件进行统计分析,每两组间计量资料比较采用独立样本t检验,采用Pearson相关分析比较CARD9与炎症因子之间的相关性。结果与假手术组相比,缺血3 h、6 h和12 h组脑组织CARD9表达均增加[(0.325±0.011)vs(0.462±0.019),P=0.036;(0.735±0.036),P=0.003;(0.903±0.024),P=0.001];与假手术组相比,缺血3 h、6 h和12 h组缺血脑组织NF-κB的活化均升高[(0.227±0.016)vs(0.316±0.017),P=0.041;(0.445±0.021),P=0.016;(0.671±0.039),P=0.008]。与假手术组相比,缺血3 h、6 h和12 h组脑组织TNF-ɑ表达均增加[(0.53±0.06)vs(1.06±0.10),P=0.009;(1.47±0.15),P=0.004;(2.78±0.18),P=0.001];与假手术组相比,缺血3 h、6 h和12 h组脑组织IL-lβ表达均增加[(0.55±0.07)vs(1.01±0.11),P=0.009;(2.13±0.16),P=0.003;(3.09±0.18),P=0.001];与假手术组相比,缺血3 h、6 h和12 h组脑组织IL-6表达均增加[(1.99±0.18)vs(4.10±0.41),P=0.006;(8.54±0.84),P=0.002;(11.56±0.96),P=0.001]。Pearson相关分析显示CARD9与NF-κB活性、TNF-α、IL-1β、IL-6均存在正相关(r=0.894,P=0.001;r=0.747,P=0.008;r=0.810,P=0.001,r=0.773,P=0.007)。结论小鼠缺血性脑损伤早期脑组织中CARD9与炎症反应存在正相关。

胱天蛋白酶募集域蛋白9在急性胰腺炎中的表达及临床价值分析

[目的]讨论胱天蛋白酶募集域蛋白9(caspase recruitment domain-containing protein 9,CARD9)在急性胰腺炎(AP)中的表达及临床价值。[方法]选择AP患者62例,其中重症AP(SAP)29例(SAP组),轻症AP(MAP)33例(MAP组);选择同期进行体检的健康者32例(对照组)。通过实时荧光定量PCR检测3组CARD9 mRNA水平,用WB法检测CARD9蛋白表达;采用干式生化法检测3组血淀粉酶(s-Amy)水平,采用竞争性酶联免疫吸附法检测3组尿胰蛋白酶原激活肽(TAP)水平;分析CARD9、S-Amy、TAP分别在AP中的诊断效能。[结果]SAP组及MAP组患者CARD9 mRNA及蛋白表达水平,S-Amy、TAP水平均明显高于对照组(P<0.05);且SAP组患者CARD9 mRNA及蛋白表达、TAP水平均明显高于MAP组患者(P<0.05)。AP患者CARD9 mRNA表达水平与S-Amy水平无明显相关性(r=0.185),与TAP水平呈正相关(r=0.550);ROC曲线可以看出,CARD9 mRNA表达水平的AUC为0.901,S-Amy的AUC为0.698,TAP的AUC为0.819;CARD9 mRNA表达水平诊断AP的敏感性虽略低于TAP,但特异性高于S-Amy和TAP。[结论]AP患者CARD9高表达,且与患者疾病严重程度具有一定关系,可作为AP早期诊断的预测指标。