胱天蛋白酶11(caspase-11)介导的非典型炎性体信号通路研究进展

非典型炎性体(non-canonical inflammasome)是宿主细胞在感受细胞质内脂多糖(LPS)时在胞内形成的的大分子蛋白复合物,在抵御Gram阴性病原菌入侵以及维持机体免疫系统的稳定中起重要作用。在小鼠体内非典型炎性体是指前体胱天蛋白酶11(pro-caspase-11)和LPS组成的复合物。在胞内前体caspase-11可以直接与LPS结合,然后发生寡聚化激活caspase-11,激活的caspase-11可剪切gasdermin-D(GSDMD),产生的N端片段通过在细胞膜表面形成10~20 nm的孔径破坏细胞膜完整性而促进细胞发生炎性细胞死亡即焦亡(pyroptosis),同时caspase-11也可激活NLRP3炎性体,通过caspase-1促进成熟白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18的分泌。目前该信号通路中仍存在很多问题还不清楚,我们对caspase-11介导的非典型炎性体的激活以及在多种疾病中的作用进行了总结。

miRNA-181a、胱天蛋白酶富集域家族成员11、核因子κB在弥漫大B细胞淋巴瘤患者中的表达及临床意义

目的探讨微小RNA-181a(miRNA-181a)、胱天蛋白酶富集域家族成员11(CARD11)、核因子κB(NF-κB)在弥漫大B细胞淋巴瘤患者中的表达及临床意义。方法选取85例弥漫大B细胞淋巴瘤患者和60例增生性淋巴结炎患者,分别作为观察组和对照组,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测miRNA-181a、CARD11 mRNA、NF-κB mRNA相对表达量。比较不同临床特征弥漫大B细胞淋巴瘤患者miRNA-181a、CARD11 m RNA、NF-κB mRNA相对表达量,比较Ⅰ~Ⅱ期、Ⅲ~Ⅳ期观察组和对照组患者miRNA-181a、CARD11 mRNA、NF-κB mRNA相对表达量,比较不同疗效弥漫大B细胞淋巴瘤患者miRNA-181a、CARD11mRNA、NF-κB mRNA相对表达量。采用受试者工作特征(ROC)曲线及曲线下面积(AUC)分析miRNA-181a、CARD11、NF-κB单独及联合检测对弥漫大B细胞淋巴瘤患者临床分期的诊断价值及对疗效的预测价值。结果Ann Arbor分期为Ⅲ~Ⅳ期、国际预后指数(IPI)评分为3~5分弥漫大B细胞淋巴瘤患者miRNA-181a相对表达量分别明显高于Ann Arbor分期为Ⅰ~Ⅱ期、IPI评分为0~2分的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。结外累及数目﹥1个、Ann Arbor分期为Ⅲ~Ⅳ期、IPI评分为3~5分弥漫大B细胞淋巴瘤患者CARD11 mRNA、NF-κB mRNA相对表达量均明显高于结外累及数目≤1个、Ann Arbor分期为Ⅰ~Ⅱ期、IPI评分为0~2分的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。Ⅰ~Ⅱ期、Ⅲ~Ⅳ期弥漫大B细胞淋巴瘤患者miRNA-181a、CARD11 mRNA、NF-κB mRNA相对表达量均高于对照组,Ⅲ~Ⅳ期弥漫大B细胞淋巴瘤患者miRNA-181a、CARD11 mRNA、NF-κB mRNA相对表达量均高于Ⅰ~Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。疗效为完全缓解(CR)/部分缓解(PR)/疾病稳定(SD)弥漫大B细胞淋巴瘤患者miRNA-181a、CARD11 mRNA、NF-κB mRNA相对表达量均低于疗效为疾病进展(PD)的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。ROC曲线显示,miRNA-181a、CARD11、NF-κB联合检测诊断弥漫大B细胞淋巴瘤患者临床分期的AUC为0.968,高于三者单独检测的0.852、0.841、0.830;miRNA-181a、CARD11、NF-κB联合检测预测弥漫大B细胞淋巴瘤患者疗效的AUC为0.953,高于三者单独检测的0.847、0.684、0.816。结论miRNA-181a、CARD11、NF-κB可作为弥漫大B细胞淋巴瘤患者病情监测和预后预测指标,其表达水平升高提示患者病情可能加重,三者联合检测对弥漫大B细胞淋巴瘤的诊断价值较高,且对预后的预测价值较高。

胱天蛋白酶1(caspase-1)抑制剂AC-YVAD-CMK抑制鲍曼不动杆菌诱导骨髓来源巨噬细胞IL-1β的分泌

目的探讨胱天蛋白酶1(caspase-1)特异性抑制剂AC-YVAD-CMK对鲍曼不动杆菌(A.baumannii)刺激骨髓来源巨噬细胞(BMDM)分泌白细胞介素1β(IL-1β)的影响。方法从C57BL/6小鼠分离培养BMDM,使用(1×103、1×105、1×107)菌落形成单位(CFU)/mL的A.baumannii刺激BMDM,ELISA检测培养上清中IL-1β的水平;分别利用实时定量PCR检测IL-1β前体(pro-IL-1β)的mRNA水平,Western blot法检测pro-IL-1β蛋白水平;使用AC-YVAD-CMK阻断caspase-1活性并检测培养上清中IL-1β的水平;使用A.baumannii接种预先给予环磷酰胺处理的小鼠,制备A.baumannii感染模型,给予AC-YVADCMK处理,ELISA检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-1β的水平;HE染色观察A.baumannii感染小鼠肺组织损伤情况。结果A.baumannii刺激BMDM后,培养上清中IL-1β的水平增加,pro-IL-1βmRNA和蛋白表达无明显变化;使用AC-YVAD-CMK阻断caspase-1活性后,BMDM分泌IL-1β减少,A.baumannii接种的小鼠腹腔给予AC-YVAD-CMK处理,BALF中IL-1β的水平下降,其肺组织损伤程度减轻。结论 AC-YVAD-CMK通过减少A.baumannii感染BMDM分泌IL-1β减轻肺的病理损伤。

胱天蛋白酶Caspaes-3在子宫内膜癌中的表达及意义

目的研究胱天蛋白酶Caspase-3在子宫内膜癌中的表达,探讨子宫内膜癌的病因及发病机制。方法选取子宫内膜癌组织(组织学分级G1组16例、G2组27例、G3组8例),子宫内膜非典型增生组织21例,正常子宫内膜组织10例。用免疫组化S-P法检测Caspase-3在子宫内膜癌组、子宫内膜非典型增生组和正常子宫内膜组中的表达。结果 Caspase-3在子宫内膜癌组和子宫内膜非典型增生组的表达明显低于正常子宫内膜组(P<0.01),在子宫内膜癌中G2、G3组的表达低于G1组,差异有显著意义(P<0.05,P<0.01)。结论 Caspase-3的低表达可能促使细胞抗凋亡能力增强,导致细胞凋亡不足增殖过度,可能是子宫内膜癌发病机制之一。

解耦联蛋白2对脓毒症腹腔感染大鼠心肌细胞凋亡、氧化应激及PKR/Caspase-11蛋白的影响

目的探究解耦连蛋白(UCP)2对脓毒症腹腔感染大鼠心肌细胞凋亡、氧化应激及链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)/含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-11蛋白的影响。方法按照数字随机法将80只大鼠分为假手术(Sham)组、盲肠结扎穿孔术(CLP)致脓毒症模型(CLP)组、单纯腺相关病毒(AAV)组、UCP2过表达手术(UCP2)组各20只。比较各组UCP2、PKR、Caspase-11蛋白表达、心肌组织病理学形态变化、心肌细胞凋亡指数、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果与Sham组相比,CLP组、AAV组和UCP2组心肌组织中UCP2、Caspase-11、MDA表达明显升高,心肌组织中PKR蛋白表达、SOD活性明显减少(P<0.05);与CLP和AAV组相比,UCP2组心肌组织中PKR蛋白表达、SOD活性得到明显升高,Caspase-11蛋白MDA含量显著降低(P<0.05)。Sham组心肌仅有少数视野偶见个别凋亡细胞,CLP组和AAV组细胞的凋亡指数明显增加(P<0.05);与CLP组相比,UCP2组心肌细胞凋亡指数明显降低(P<0.05)。结论过表达UCP2可抑制脓毒症腹腔感染大鼠心肌细胞凋亡,调控体内氧化应激平衡,同时对PKR/Caspase-11蛋白有一定的调控作用,增加PKR表达,抑制Caspase-11的表达。

凋亡相关斑点样蛋白和胱天蛋白酶1在皮肤鳞状细胞癌和基底细胞癌中的表达及意义

凋亡相关斑点样蛋白（ASC）是多种炎症小体，如NLRP1、NLRP3、NLRC4、AIM2等所共有的接头蛋白，通过诱导胱天蛋白酶（caspase）-1自活化引起下游炎症因子的产生［1］。ASC在健康人角质形成细胞高表达。而在肿瘤组织中，ASC和caspase-1具有双重作用，即通过诱导炎症微环境而促进肿瘤和通过诱导细胞程序性死亡、维持细胞自稳态而抑制肿瘤，且这种双重作用依赖于不同的细胞类型［1，2］。我们观察了ASC和caspase-1在皮肤鳞状细胞癌（SCC）和基底细胞癌（BCC）中的表达，探讨其可能的作用和意义。

周期性张应力下成肌细胞中半胱天冬氨酸蛋白酶9参与力学信号传导

背景:功能矫形使面颌部肌肉发生适应性改建,以纠正错颌畸形。成肌细胞是适应性改建的主要体现者,周期性牵张应力导致成肌细胞凋亡,而半胱天冬氨酸蛋白酶9是线粒体凋亡通路中的重要因子。目的:明确半胱天冬氨酸蛋白酶9在不同时间周期性张应力作用下的表达变化。方法:以大鼠L6成肌细胞为实验对象,在成功构建成肌细胞体外培养-力学刺激模型的基础上,通过多通道细胞牵张应力加载系统,分别对待测细胞持续施加1,6,12,24 h的周期性张应力,不加力组为对照组。倒置相差显微镜下观察成肌细胞的形态学改变和生长状况;运用RT-PCR和Western Blot技术检测周期性张应力作用下半胱天冬氨酸蛋白酶9的mRNA和蛋白含量变化。结果与结论:倒置相差显微镜观察结果显示成肌细胞施加周期性张应力后贴壁生长情况良好,细胞无变性并且脱落率极低,说明成功构建了成肌细胞体外培养-力学刺激模型。RT-PCR和Western Blot检测结果显示,随着加力时间的延长,半胱天冬氨酸蛋白酶9 mRNA含量和活化型半胱天冬氨酸蛋白酶9的蛋白含量均显著增加,而半胱天冬氨酸蛋白酶9前体蛋白含量随着加力时间的延长均显著降低。可见半胱天冬氨酸蛋白酶9参与了周期性张应力作用下的力学信号传导。

沉默驱动蛋白KIF11影响caspase-1介导的细胞死亡方式

目的:探讨驱动蛋白家族成员11(KIF11)通过影响胱天蛋白酶1(caspase-1)介导的细胞死亡方式调控肿瘤发展的机制。方法:采用生物信息学分析KIF11在不同肿瘤中的表达及其与caspase-1和消皮素D(GSDMD)的相关性,以及对肿瘤患者生存预后的影响;构建受体相互作用蛋白激酶2(RIPK2)/GFP和caspase-1质粒,以及共转染的野生型、KIF11低表达和KIF11过表达的人肾透明细胞癌786-O细胞系,探讨KIF11在caspase-1介导细胞死亡中的作用;活细胞成像观察细胞形态变化;免疫组化测定肾癌和癌旁组织中KIF11的表达;Western blot测定细胞焦亡通路相关蛋白水平。结果:生物信息学分析结果显示,KIF11在大多数恶性肿瘤中高表达;免疫组化发现,KIF11在肾癌中的表达高于正常组织。同时,KIF11与肾透明细胞癌中caspase-1和GSDMD表达呈正相关。活细胞成像显示,野生型和KIF11过表达的细胞大量起泡,随后释放凋亡小体(绳珠状细胞凋亡结构)。相比之下,KIF11低表达的细胞变圆和肿胀,呈现细胞焦亡的典型特征,体积明显比野生型和KIF11过表达细胞大,细胞核和细胞质丢失,乳酸脱氢酶释放增加。同时,免疫荧光结果显示,caspase-1介导的细胞死亡有cleaved GSDMD表达。Western blot结果表明,转染RIPK2/caspase-1能够激活细胞焦亡通路,上调caspase-1 p20、GSDMD-NT和cleaved IL-1β蛋白水平。进一步通过PI和Hoechst染色,发现野生型细胞中91%的细胞凋亡,9%发生细胞焦亡;而在KIF11低表达细胞中,22%细胞发生凋亡,78%细胞发生焦亡。结论:KIF11作为一个致癌基因,在肿瘤组织中高表达;沉默KIF11可影响caspase-1介导的细胞死亡方式,以细胞焦亡为主。

补肾止颤方对帕金森病大鼠Caspase-4/11表达的影响

目的探讨补肾止颤方对帕金森病(Parkinson′s disease,PD)大鼠Caspase-4/11表达的影响。方法采用蛋白酶抑制因子注射法建立慢性PD大鼠模型,将造模成功的大鼠分为模型组、多巴丝肼组(2 g·kg^(-1)·d^(-1)),补肾止颤方低、中、高剂量组(15、30、60 g·kg^(-1)·d^(-1)),假手术组采用等量的70%乙醇溶液注射。假手术组、模型组给予10 mL·kg^(-1)·d^(-1)生理盐水;其余各组给予相应药物;连续灌胃3周。观察大鼠的一般情况,于灌药前1周及灌药后第3周进行悬挂实验并评分。采用HE染色、透射电镜观察中脑黑质区神经元病理改变,qPCR技术检测中脑黑质区α-syn、TH、IL-1β、GSDMD、Caspase-4/11的mRNA表达变化。结果补肾止颤方能增加悬挂实验时间及评分,减轻神经元病理损伤,明显抑制α-syn、IL-1β、GSDMD、Caspase-4/11表达,增加TH表达。结论补肾止颤方可有效改善PD模型大鼠的行为障碍、减轻神经元病理损伤,可能通过下调Caspase-4/11,抑制GSDMD蛋白的表达,减少α-syn、IL-1β分泌,从而减轻细胞焦亡,达到神经元保护作用。

基于脂多糖介导的炎症疾病caspase-11靶点药物的研究进展

目的对近年来脂多糖介导的炎症疾病含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶11(cysteinyl aspartate specific proteinase-11,caspase-11)靶点药物进行综述。方法利用PubMed、中国知网等检索平台,检索脂多糖介导的不同炎症疾病中caspase-11靶向药物并进行了归纳汇总。结果根据文献查阅发现,若caspase-11激活,可诱发白介素1β、白介素18相关的炎症反应及Gasdermin D介导的细胞焦亡,从而导致大量炎症因子释放到胞外,引发强烈的炎症反应。caspase-11介导的炎症反应在帕金森病、阿尔兹海默症、肺纤维化、内毒素血症、脓毒症等疾病的发生发展中发挥了重要作用。结论对caspase-11靶点药物的探索,可能是未来脂多糖介导的相关炎症疾病药物研究的新方向。

蛋白酶Caspase-6在腰椎间盘髓核组织中表达的研究

目的探讨凋亡相关蛋白酶Caspase-6在腰椎间盘退变中的作用。方法将45例腰椎间盘突出症病人作为手术组,并分为:青年组;中年组;老年组。5例青少年型特发性脊柱侧弯病人作为对照组。对照组标本均为术中所取出L2/3新鲜椎间盘髓核组织;手术组标本均为术中所取出L4/5新鲜椎间盘髓核组织;采用TUNEL法和免疫组织化学S-P法,分别检测腰椎间盘髓核中的凋亡阳性细胞率及Caspase-6的表达情况。结果青年、中年、老年手术组髓核内TUNEL阳性细胞率分别为(45.71±2.05)%、(53.65±2.93)%、(68.39±4.33)%。对照组髓核内TUNEL阳性细胞率为(17.80±0.62)%。四个组两两之间差异均有统计学意义(P<0.05)。髓核内TUNEL阳性细胞率与年龄呈正相关(P<0.01)。青年、中年、老年手术组髓核内Caspase-6染色阳性细胞率分别为(38.58±1.80)%、(53.19±2.67)%、(62.72±4.65)%。对照组髓核内Caspase-6染色阳性细胞率为(19.32±1.49)%。四个组两两之间差异均有统计学意义(P<0.05)。髓核内Caspase-6染色阳性细胞率与TUNEL阳性细胞率和年龄之间均呈正相关(P<0.01)。结论细胞凋亡参与了腰椎间盘退变过程,年龄是细胞凋亡的重要影响因素;腰椎间盘组织细胞凋亡过程有Caspase-6蛋白酶参与调节,Caspase-6的表达上调可能在腰椎间盘退行性变发生和发展中发挥重要作用。

大鼠局灶性脑缺血-再灌注后caspase-8和caspase-9 mRNA及蛋白质表达

1994年MacManus等首先报告大鼠全脑缺血后存在神经元凋亡。近10年来，关于脑缺血后细胞凋亡机制的研究取得了巨大进展。已知脑缺血后可有多种基因被诱导表达，这些基因编码的蛋白质产物直接或间接参与了凋亡的调控。天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶家族（cysteinyl aspartate specific protease，caspase），是细胞凋亡过程中最重要的蛋白酶，细胞凋亡的最后实施是通过caspase的激活而实现的。迄今为止，已知的家族成员共14个，其中caspase-8和caspase-9在细胞凋亡启动过程中具有重要作用。在本实验中，我们观察了大鼠局灶性脑缺血-再灌注后神经元凋亡及caspase-8、caspase-9 mRNA和蛋白质表达的变化，以探讨脑缺血-再灌注后神经元凋亡的信号转导机制。

丹芍化纤方对体外大鼠肝细胞增生、Caspase-3mRNA及白蛋白合成的影响

目的:探讨丹芍化纤方抗肝纤维化的作用机制方法:采用Ⅳ型胶原酶消化及Ficoll密度梯度离心的方法, 分离、培养大鼠肝细胞,加入5%、10%、20%药物血清干预体外培养的肝细胞,用MTT法测定肝细胞的增生,荧光实时定量PT-PCR(Real Time RT—PCR)法检测肝细胞内天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)mRNA表达,并检测培养上清中的白蛋白. 结果:丹芍化纤方药物血清对肝细胞的增生及白蛋白合成有促进作用,能显著下调肝细胞内caspase-3mRNA的表达, 其表达水平与正常大鼠血清组比较有显著性差异,呈明显的浓度依赖关系. 结论:丹芍化纤方发挥抗肝纤维化作用与其促进肝细胞增生、蛋白合成功能,抑制肝细胞凋亡有关.

补骨脂素加长波紫外线的光化学疗法诱导NB4细胞凋亡及对Caspase-8、3蛋白表达的影响

目的研究补骨脂素(psoralen,PSO)加长波紫外线(ultravioletA,UVA)的光化学疗法(PUVA)对人白血病NB4细胞凋亡和细胞凋亡信号通路的影响。方法体外培养NB4细胞,利用流式细胞术检测不同浓度的PSO(0、5、10、20、40μL)、在不同照射时间(0、5min)、波长为360nm的UVA干预后的细胞凋亡率;利用透射电镜检测细胞超微结构的改变;采用免疫细胞化学法(ICC)检测凋亡信号通路中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-8(Caspase-8)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达情况。结果不同浓度的PSO经0、5min UVA照射后,NB4细胞的凋亡率呈剂量与时间依赖性的增加,而于40μg/mL浓度的PSO联合5min UVA照射时达峰值,且二者呈现交互作用(P<0.01)。PUVA处理后的NB4细胞超微结构出现明显的凋亡形态学的改变。PSO、UVA及PUVA均上调Caspase-8、Caspase-3蛋白的表达,但PUVA上调Caspase-3的作用于12h显著强于前两者(P<0.01),呈时间依赖性,PSO浓度与时间呈现交互作用(P<0.01)。结论 PU-VA的最佳方案组合为40μg/mL浓度的PSO联合5min UVA照射,PUVA可体外激活Caspase-8、Caspase-3基因,具有诱导NB4细胞凋亡作用。

贝伐珠单抗对复发性卵巢癌Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达情况及临床治疗效果的影响

目的观察贝伐珠单抗治疗复发性卵巢癌效果及B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达情况。方法选取2014年2月至2017年10月148例复发性卵巢癌患者,按照奇偶法,将纳入患者分为观察组和对照组(每组74例)。观察组采用贝伐珠单抗联合常规化疗方法、对照组采用常规化疗方法。观察和比较两组患者治疗前后实体瘤大小、血清糖类癌胚抗原125(CA125)、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达和不良事件及分级。结果按照实体瘤标准,观察组治疗完全缓解率13.51%、总有效率70.27%,均高于对照组的5.41%、52.70%,差异具有统计学意义(P<0.05)。按照CA125标准,观察组治疗完全缓解率17.57%、总有效率85.14%,均高于对照组的9.46%、68.92%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组Bcl-2表达(0.25±0.08)低于对照组的(0.56±0.12),Bax(1.08±0.04)、Caspase-3蛋白表达(1.59±0.10)均高于对照组的(分别为0.58±0.06、1.00±0.07),差异具有统计学意义(P<0.05)。观察组不良反应构成比64.86%,与对照组的62.16%比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论贝伐珠单抗治疗复发性卵巢癌疗效显著、安全可靠,且能有效调节Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达抑制肿瘤发生与发展,丰富了复发性卵巢癌发生与发展机制学说,为临床治疗提供了一定参考依据。

棕榈酸对转化生长因子β1刺激的肝星状细胞增殖、凋亡及Caspase-12蛋白表达的影响

目的研究棕榈酸对转化生长因子β_1(TGF-β_1)刺激的肝星状细胞(HSC)增殖、凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(caspase-12)蛋白表达的影响。方法将液氮保存下的肝星状细胞株,于37℃、5%CO2孵箱中进行复苏传代培养,同步化后将细胞分为5组:空白组、TGF-β_1(5 ng/ml)组、TGF-β_1+低、中、高剂量棕榈酸组,即5 ng/ml TGF-β1刺激24 h,再分别加入50、100及200μmol/L不同剂量棕榈酸作用24 h后,用MTT比色法检测细胞增殖、流式细胞仪检测细胞凋亡率、免疫细胞化学法测定Caspase-12蛋白表达。结果不同浓度棕榈酸均能抑制细胞增殖(P<0.05),且随着剂量的增加,细胞相对增殖率(RGR)降低,低、中、高剂量组分别为76.56%、60.93%和34.37%,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。透视电镜发现,不同剂量棕榈酸组出现细胞核变小,细胞出现大量线粒体空泡,染色质边集等典型凋亡表现。空白组、TGF-β_1组、TGF-β_1+低、中、高剂量棕榈酸组凋亡率分别为(3.32±0.29)%、(1.70±0.14)%、(7.26±0.46)%、(11.24±0.52)%及(15.55±0.31)%,组间两两比较差异有统计学意义(P<0.05);随着棕榈酸剂量的增加,细胞Caspase-12蛋白表达增加(P<0.05)。结论棕榈酸能抑制细胞增殖,增加Caspase-12蛋白表达,促进HSC凋亡。

当归补血汤含药血清对顺铂损伤大鼠卵巢颗粒细胞Caspase-3蛋白表达的影响

目的:探讨当归补血汤对顺铂损伤大鼠卵巢颗粒细胞凋亡蛋白以及氧化损伤的影响。方法:以不同剂量的当归补血汤含药血清作用于5μg/m L顺铂(Cisplatin,CDDP)抑制的体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞,用MTS[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium]法检测各组颗粒细胞24 h、4 8 h、72 h增殖情况,及培养液中丙二醛(Malondialdehyde,MDA)和胱天蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达情况。结果:CDDP对大鼠卵巢颗粒细胞有明显抑制作用,凋亡率可以达到70.50%。当归补血汤含药血清对颗粒细胞增殖有促进作用,2.5%当归补血汤含药血清作用4 8 h组最为显著(P<0.01);同时MDA和caspase-3蛋白也逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.01)。与当归补血汤低、高剂量治疗组比较,当归补血汤中剂量治疗组效果最明显,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:当归补血汤对顺铂损伤大鼠卵巢颗粒细胞增殖有促进作用,可能机制是抑制细胞氧自由基的产生,抑制Caspase-3蛋白表达,促进细胞增殖。

亚低温对心肺复苏大鼠海马神经细胞活性氧及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和自噬相关蛋白轻链3的影响

目的：观察亚低温（MH）对心肺复苏（CPR）后海马神经细胞活性氧（ROS）产生量和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase-3） mRNA和自噬相关蛋白轻链3（LC3）表达的影响。方法65只健康成年雄性SD大鼠随机数字法随机分为2组：空白对照组（BC，n＝5）；CPR组（n＝60）。CPR组制作窒息法心肺复苏模型，在自主循环恢复（ROSC）后再随机分为2组：常温CPR组（NT）和低温CPR组（HT）。NT组在ROSC后保持37℃恒温，HT组在ROSC后立即行低温32℃干预4 h。根据观察时点的不同，再将两组CPR组随机分2个亚组：即 ROSC后12 h和24 h组（NT-12，NT24，HT-12，HT-24）。到达观察时点先对存活大鼠进行神经功能缺损评分（NDS），然后立即取双侧海马组织，应用流式法检测大鼠海马单细胞悬液ROS水平。利用透射电镜观察海马神经细胞细胞核和线粒体的超微结构形态学变化。利用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术测定海马神经细胞caspase-3mRNA的表达水平；蛋白免疫印迹法（WB）测定海马神经细胞LC3蛋白水平。应用SPSS 19.0软件包，计量数据以均数±标准差（x ±s）表示，两组间均数比较用成组t检验，多组间比较采用单因素方差分析。结果60只大鼠中有44只（73％）成功ROSC，存活到观察时点的有33只大鼠（55％）。NT和HT组各时点的NDS明显低于BC组（F＝8.107，P＜0.05），HT-12和HT-24组的NDS与相同时点的NT组比较有显著提高（t＝9.692，P＜0.01；t＝14.374，P＜0.01）。NT和HT组各时点的ROS产生量明显高于BC组（F＝16.824，P＜0.05），而HT-12和HT-24组的升高程度则明显低于相同时点的NT组大鼠（t＝9.836，P＜0.01；t＝7.499，P＜0.01）。NT和HT组各时点的caspase-3mRNA表达量明显高于BC组（F＝24.527，P＜0.05），而HT-12和 HT-24组的升高程度则明显低于相同时点的 NT 组大鼠（t ＝6.935，P＜0.01；t＝4.317，P＜0.01）。NT 和 HT 组各时点的 LC3B-Ⅱ/Ⅰ的表达量明显高于 BC 组（F＝6.584，P＜0.05），而 HT-12和 HT-24组的升高程度则明显低于相同时点的 NT 组大鼠（t＝10.836，P＜0.001；t＝2.653，P＝0.02）。NT组海马神经细胞核和线粒体的形态学变化较BC组有明显改变，HT组海马神经细胞核和线粒体与相同时点NT组比较损伤有所减轻。结论 MH能减轻ROSC后大鼠脑神经细胞损伤并提高其神经功能，其机制之一是减少了CPR后大鼠神经细胞ROS的产生，并通过抑制caspase-3和LC3的表达使神经细胞凋亡和自噬减少。

瘢痕疙瘩组织中Livin、Smac、Caspase-3的表达及其相关性

背景:目前临床治疗瘢痕疙瘩效果较差、常易复发。瘢痕疙瘩的发病机制仍不完全清楚,而关于成纤维细胞增殖及凋亡的研究为研究的热点。目的:分析瘢痕疙瘩组织中Livin、Smac、Caspase-3的表达的相关性,初步探讨3种因子在瘢痕疙瘩组织发病机制中的作用。方法:采用RT-PCR和免疫组织化学分别检测Livin、Smac、Caspase-3的mR NA和蛋白在20例瘢痕疙瘩组织和20例正常皮肤组织中的表达,并进行相关性分析结果与结论:瘢痕疙瘩组织中Livin的m RNA表达水平和蛋白的阳性表达率显著高于正常皮肤组织(P<0.05),瘢痕疙瘩组织中Smac和Caspase-3的mR NA表达水平和蛋白的阳性表达率低于正常皮肤组织(P<0.05)。瘢痕疙瘩组织中Livin和Smac、Caspase-3蛋白的表达呈负关联。结果提示Livin基因高表达可能抑制了Smac、Caspase-3基因表达从而导致了瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的失衡,最终导致了瘢痕疙瘩的形成。

Caspase-3:治疗神经退行性疾病的新靶点

Caspase 3是caspases家族 (一类天冬氨酸特异性酶切半胱氨酸蛋白酶 )中的成员 ,是哺乳动物细胞凋亡的关键蛋白酶 .随着研究的深入 ,发现caspase 3在神经退行性疾病的病理过程中起着很重要的角色 .Caspase 3在这些疾病的病理过程中 ,不仅仅是起着凋亡的效应器作用 ,还能直接与老年性痴呆症、帕金森氏症、亨廷顿舞蹈病、脊椎小脑失调等疾病的致病蛋白质分子相互作用 ,参与致病机制 .因此 ,caspase 3是治疗神经退行性疾病的新靶点 ,寻找caspase