罗非鱼谷胱甘肽过氧化物酶1基因的克隆与分析

采用cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术,克隆了罗非鱼(Oreochromis niloticus)谷胱甘肽过氧化物酶1(glutathione peroxidase1,GPx1)基因完整的编码序列(complete coding se-quence,CDS)。GPx1基因全长984bp,5′UTR56bp,CDS576bp,3′UTR352bp,PolyA20bp;第791～885位碱基(位于3′UTR)形成1个硒半胱氨酸插入序列(selenocysteine insertion sequence,SECIS),协助174～176位密码子TGA(UGA)编码1个硒半胱氨酸(Sec)。GPx1包含191个氨基酸,分子量21.8kDa,等电点8.04,无信号肽和潜在的N-糖基化位点。蛋白结构分析表明该基因编码蛋白为非跨膜蛋白。序列比对显示,GPx1单体具有Sec、Trp、Gln和Asn构成的催化四联体。罗非鱼GPx1与其他脊椎动物GPx1相比较,核苷酸序列相似性为43.2%～58.2%,氨基酸序列相似性为58.1%～80.6%。进化分析显示,处在分类学上不同纲的脊椎动物GPx1分别占据了不同分支。利用Swiss-Model预测了罗非鱼GPx1的3D结构,序列分析显示,GPx1可以形成1个同源四聚体。

谷胱甘肽过氧化物酶1基因多态性与川崎病的关联性分析

目的探讨谷胱甘肽过氧化物酶1(GPX-1)基因多态性与中国汉族儿童川崎病(kawasaki disease,KD)并冠状动脉损害(CAL)的相关性。方法采用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性分析(PCR-RFLP)检测92例川崎病患儿及108例健康儿童GPX-1基因的-46C/T位点和599C/T位点多态性。结果川崎病组GPX-1基因-46C/T位点CC、CT、TT基因型分布和C、T等位基因频率与正常对照组比较差异无显著性意义(χ2=0.174和0.166,P均>0.05)。川崎病组GPX-1基因599C/T位点CC、CT、TT基因型分布和C、T等位基因频率与正常对照组比较差异亦无显著性意义(χ2=0.429和0.368,P均>0.05)。川崎病患儿合并CAL组与无冠状动脉损害(NCAL)组GPX-1基因-46C/T位点基因型分布和等位基因频率比较差异亦无显著性意义(χ2=0.507和0.487,P均>0.05)。川崎病患儿合并CAL组与NCAL组GPX-1基因599C/T位点基因型分布和等位基因频率比较差异亦无显著性意义(χ2=0.635和0.535,P均>0.05)。结论尚未发现GPX-1基因-46C/T位点多态性以及599C/T位点多态性与川崎病及其CAL的发生存在明显关联性。

谷胱甘肽过氧化物酶1基因C594T多态性与急性脑梗死的关系

目的探讨谷胱甘肽过氧化物酶1(GPx-1)基因C594T多态性与急性脑梗死的关系。方法用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析法(PCR-RFLP)检测急性脑梗死患者(脑梗死组,128例)和健康体检者(正常对照组,111例)GPx-1基因C594T的基因型和等位基因频率。根据是否存在急性脑梗死的危险因素(高龄,高血压病,2型糖尿病,吸烟史)将脑梗死组分为8个亚组,计算各亚组急性脑梗死的OR值,并与正常对照组比较。结果急性脑梗死组患者GPx-1基因C594T的基因型和等位基因频率与正常对照组相比差异无统计学意义(P=0.24,P=0.28);经分层分析后,脑梗死组各亚组急性脑梗死的OR值与正常对照组相比差异无统计学意义。结论 GPx-1基因C594T多态性与急性脑梗死的发生无相关性。急性脑梗死的相关危险因素(高龄,高血压病,2型糖尿病,吸烟史)与GPx-1 C594T基因多态性共同作用时,对急性脑梗死的发生影响不显著。

谷胱甘肽过氧化物酶1(GPX1)抑制过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡及机制

目的探讨谷胱甘肽过氧化物酶1(GPX1)对过氧化氢(H2O2)氧化损伤的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)的影响及其作用机制。方法将pcDNA 3.1-GPX1表达载体转染至HUVEC并用500μmol/L H2O2处理8h,实时定量PCR检测HUVEC的GPX1 mRNA水平、Western blot法检测GPX1蛋白水平、流式细胞术检测细胞凋亡, 2′, 7′-二氯荧光黄双乙酸酯(DCFH-DA)荧光定量法检测活性氧(ROS)含量、相应试剂盒检测过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果 500μmol/L H2O2处理可抑制HUVEC中GPX1表达并诱导细胞凋亡,降低细胞POD、SOD活力,提高细胞ROS含量。抑制miR-373-5p表达可提高GPX1的表达,降低H2O2诱导的细胞凋亡,增强细胞POD和SOD活力,降低ROS含量。结论GPX1能降低H2O2诱导的HUVEC凋亡,增强细胞POD、SOD的活力及抗ROS的能力。

谷胱甘肽过氧化物酶1基因多态性的研究进展

硒蛋白是人体必需微量元素硒以硒代半胱氨酸的形式参与形成的蛋白质。近年来对硒蛋白的研究越来越多，其在机体内所起的作用也日益受到关注。目前研究较深入的有谷胱甘肽过氧化物酶家族，现从谷胱甘肽过氧化物酶1基因多态性进行综述，以期为硒蛋白及缺硒性地方病的研究提供新的思路。

肾缺血再灌注损伤大鼠肺内谷胱甘肽过氧化物酶1的表达变化

目的观察谷胱甘肽过氧化物酶1(glutathione peroxidase 1,GPX-1)在肾缺血再灌注损伤(renal ischemia reperfusion injury,RIRI)大鼠肺内的表达变化,探讨GPX-1清除过氧化物保护肺脏免遭过氧化损伤的作用。方法切除Wistar大鼠右肾,无损伤动脉夹夹闭左肾动脉,建立大鼠RIRI模型。肾脏血液重新灌注24h后取血、肾脏、肺脏。血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血清肌酐(serum creatinine,SCr)浓度分别采用酶偶联速率法和苦味酸法测定;HE染色法观察大鼠肾形态结构改变;肺组织过氧化氢(hydrogen peroxide,H_2O_2)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量分别采用钼酸比色法和硫代巴比妥酸比色法测定,GPX-1的mRNA和蛋白表达水平分别采用RT-PCR和Western blotting法测定,并对GPX-1表达水平与MDA含量、H_2O_2含量作相关性分析。结果与对照组相比,RIRI组大鼠肾组织形态结构受损明显,BUN和SCr含量、肺组织MDA含量和H_2O_2含量也明显升高;RIRI组大鼠肺组织GPX-1mRNA和蛋白表达水平也明显增强,并与MDA含量、H_2O_2含量均呈正相关。结论 RIRI使肺组织也处于氧化应激状态并遭受过氧化损伤;GPX-1可能通过清除过氧化物,保护肺脏免遭过氧化损伤。

维生素D3通过核因子-κB/谷胱甘肽过氧化物酶1途径抑制肺癌A549细胞的侵袭及迁移

目的观察维生素D3对肺癌A549细胞侵袭及迁移能力的影响,并探讨其机制。方法将维生素D3以60 nmol/L的浓度作用A549细胞5 d,10 nmol/L的BAY11-7082作用A549细胞1 h,由靶向谷胱甘肽过氧化物酶1(GPX1)的小干扰RNA(siRNA)转染A549细胞,通过Transwell法检测A549细胞的侵袭和迁移能力,通过蛋白质印迹法(Western blot)法检测核因子-κB(NF-κB)及GPX1蛋白的表达水平。应用GraphPad Prism进行数据统计分析及制作统计图,采用t检验。结果经维生素D3处理后,A549细胞迁移及侵袭能力明显下降[t=57.842,P(Blank)<0.01;t=10.291,P(AA)<0.05],并且NF-κB、GPX1表达降低。经NF-κB抑制剂BAY11-7082处理后,A549细胞迁移及侵袭能力明显下降(t=43.146,P<0.01),并且观察到NF-κB、GPX1表达降低。用RNA干扰法使GPX1表达降低后,A549细胞迁移及侵袭能力明显下降[t=37.659,P(Blannk)<0.01;t=11.772,P(Scramble)<0.05],但NF-κB无明显变化。结论维生素D3可通过NF-κB/GPX1途径抑制肺癌A549细胞的侵袭及迁移能力。

大菱鲆谷胱甘肽过氧化物酶1基因的克隆及其对鳗弧菌金属蛋白酶胁迫后的响应

为了研究大菱鲆谷胱甘肽过氧化物酶1(GPx1)基因的序列特征以及其对鳗弧菌金属蛋白酶胁迫后的响应。本试验首次采用RACE技术克隆大菱鲆GPx1基因cDNA全长序列,结果表明,该序列全长975 bp,其中5′和3′非编码区分别是200和346 bp,开放阅读框为429 bp,编码142个氨基酸残基组成的蛋白质,预测相对分子质量为16.30 kDa,理论等电点为7.20。同源性分析显示,大菱鲆GPx1氨基酸序列与与棘头梅童鱼同源性最高为85.2%;系统进化分析表明,大菱鲆GPx1与底鳉和攀鲈GPx1聚为一支。荧光定量PCR结果表明,GPx1基因在大菱鲆的心脏、肝脏、肾脏、胃、肌肉、肠和鳃中均有表达,其中在肝脏中表达量最高,在肌肉中表达量最低。注射金属蛋白酶后大菱鲆肝脏中GPx1在6~48 h显著低于对照组(P<0.05),而头肾组织中GPx在3和48 h均显著高于对照组(P<0.05),在12~24 h显著低于对照组(P<0.05);酶活试验结果显示,金属蛋白酶胁迫后大菱鲆肝脏和头肾组织GPx活力分别在6和3 h显著高于对照组(P<0.05),而在12~72 h均显著低于对照组(P<0.05)。脂质过氧化物MDA在肝脏和头肾组织中分别于6~72 h和12~72 h显著高于对照组(P<0.05),上述结果首次表明大菱鲆GPx1基因在鳗弧菌金属蛋白酶胁迫过程中发挥重要作用。

谷胱甘肽过氧化物酶1(GPX1)在肝癌组织中的表达及临床意义

目的观察肝癌组织中检测谷胱甘肽过氧化物酶1(glutathione peroxidase 1,GPX1)异常表达水平,探讨其临床意义。方法选择河南省开封市传染病医院病理科2018年7月—2019年6月存档的77例原发性肝癌患者组织标本蜡块作为观察组,选择同期50例正常肝组织标本作为对照组。采用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)法检测肝癌组织的GPX1表达水平,比较正常肝组织及肝癌组织、不同分期肝癌分组(Ⅰ期34例、Ⅱ期21例、Ⅲ期19例、Ⅳ期3例)、不同性别(男39例、女38例)肝癌分组GPX1表达水平,并分析GPX1表达与肝癌预后相关性(平均总体生存时间(overall survival,OS)以及无复发生存时间(recurrence-free survival,RFS)。结果观察组(肝癌组织)GPX1表达水平明显高于对照组(正常肝组织),差异有统计学意义(P<0.05)。肝癌组织Ⅱ期GPX1表达水平明显高于Ⅲ期、Ⅰ期、Ⅳ期,差异有统计学意义(P<0.05),而Ⅳ期GPX1表达水平明显低于Ⅲ期、Ⅰ期,差异有统计学意义(P<0.05)。肝癌组织男性患者GPX1表达水平明显高于女性患者,差异有统计学意义(P<0.05)。肝癌组织GPX1高表达患者OS、DFS明显低于低表达患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论GPX1高表达水平主要分布于男性、肝癌组织以及Ⅱ期分化程度患者中,GPX1水平表达可以诊断及鉴别肝癌组织分化程度,预测患者预后结局,指导临床规范治疗。

HMGB1对炎症性肠病中氧化应激损伤的调控作用及其机制

目的探究高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)小鼠模型中氧化应激的影响及其机制。方法将小鼠分为对照组、DSS组、HMGB1重组蛋白(rhHMGB1)组和甘草酸组,每组6只。对照组小鼠正常饲养,DSS组小鼠自由饮用5%的DSS溶液6 d诱导IBD模型,rhHMGB1组和甘草酸组小鼠在IBD模型构建前,分别腹腔注射50μg/kg rhHMGB1和50μg/kg甘草酸。HE染色观察小鼠结肠病理形态,qRT-PCR和Western blot检测小鼠结肠组织HMGB1的表达,试剂盒检测小鼠结肠组织中谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量,Western blot检测小鼠结肠组织核因子红细胞相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的蛋白表达。结果与对照组比较,DSS组小鼠结肠出现病理损伤,HMGB1 mRNA和蛋白表达均上调(P<0.01),MDA水平增加(P<0.01),GSH水平下降,Nrf2、HO-1和GPX4表达下调(P<0.01)。与DSS组比较,rhHMGB1组小鼠结肠病理损伤加重,HMGB1 mRNA和蛋白表达上调(P<0.01),MDA水平增加(P<0.01),GSH水平下降,Nrf2、HO-1和GPX4表达下调(P<0.01)。与DSS组和rhHMGB1组比较,甘草酸组小鼠结肠病理损伤减轻,HMGB1 mRNA和蛋白表达下调(P<0.01),MDA水平下降(P<0.01),GSH水平增加,Nrf2、HO-1和GPX4表达上调(P<0.01)。结论HMGB1的表达被抑制后,NRF2/HO-1/GPX4轴激活,进而影响IBD小鼠体内过度的氧化应激反应,减轻结肠病理损伤。

盆底功能障碍疾病患者耻骨宫颈筋膜中谷胱甘肽过氧化物酶-1的表达

目的:探讨盆腔器官脱垂(POP)患者耻骨宫颈筋膜中谷胱甘肽过氧化物酶-1(GPx1)的表达。方法:选取2010年10月至2011年6月盆底器官脱垂患者30例,其中POPⅡ级10例,POPⅢ级10例,POPⅣ级10例,并选取同期10例宫颈上皮内瘤变患者作为对照,采用免疫组化SP法检测耻骨宫颈筋膜中GPx1的表达情况。结果:GPx1在POP患者耻骨宫颈筋膜中的表达显著低于对照组(P<0.05),且其表达与POP-Q分期呈负相关(r=-0.660,P<0.05)。结论:POP的发展与组织中GPx1的含量有相关性。

谷胱甘肽过氧化物酶-1与人子宫内膜癌顺铂抵抗的关系及相关机制研究

目的研究谷胱甘肽过氧化物酶-1(GPX1)对子宫内膜癌细胞顺铂抵抗的影响及相关机制。方法用顺铂间歇浓度梯度递增法制备顺铂抵抗HEC-1-A CR细胞,以等量0.9%Na Cl制备对照HEC-1-A细胞;慢病毒转染过表达载体上调HEC-1-A CR的GPX1表达来制备HEC-1-A CR GPX1细胞,转染空白载体作为HEC-1-A CR对照细胞。以溴化噻唑蓝(MTS)比色法检测细胞顺铂半抑制浓度(IC_(50))值,以荧光定量链式聚合酶反应和蛋白免疫印迹法检测细胞GPX1及HIF-1α的mRNA与蛋白表达。结果 HEC-1-A细胞株与HEC-1-A CR细胞株顺铂的IC50值分别为(2.13±0.24),(7.89±1.17)μg·m L^(-1);HEC-1-A CR对照细胞株与HEC-1-A CR GPX1细胞株顺铂的IC50值分别为(7.91±0.98),(3.87±0.52)μg·m L^(-1)。HEC-1-A细胞株与HEC-1-A CR细胞株的GPX1 mRNA表达量分别为0.14±0.01,0.07±0.01;这2个细胞株的HIF-1αmRNA表达量分别为0.32±0.03,0.72±0.08。HEC-1-A CR对照细胞株与HEC-1-A CR GPX1细胞株GPX1的mRNA表达量分别为0.09±0.02,0.24±0.03;这2个细胞株的HIF-1αmRNA表达量分别为0.76±0.08,0.54±0.05,上述指标在组间比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。GPX1及HIF-1α蛋白水平变化与mRNA水平变化一致。结论 GPX1通过下调HIF-1α的表达,可以促进子宫内膜癌细胞对顺铂敏感性的增强。

GPX1过表达对肺癌BERP35T1细胞DNA氧化损伤和恶性表型的影响

目的:探讨谷胱甘肽过氧化物酶1(GPX1)过表达对α粒子辐射致肺癌BERP35T1细胞DNA氧化损伤和恶性表型的影响。方法:构建pEGFP-GPX1真核表达载体,经PCR、双酶切和测序鉴定后,采用脂质体法将重组质粒及其对照空载体分别转染至BERP35T1细胞中,筛选出具有G418抗性的细胞株,经Western blot法测定GPX1蛋白在细胞株中的表达情况;通过免疫细胞化学法、四甲基噻唑蓝(MTT)法、划痕愈合试验和锚着独立生长试验分别检测GPX1过表达对BERP35T1细胞内DNA氧化损伤产物8-羟化脱氧鸟苷(8-OHdG)水平,细胞增殖、迁移以及锚着独立生长能力的影响。结果:pEGFP-GPX1经PCR、双酶切鉴定和DNA测序证实,GPX1片段的序列完全正确;并获得GPX1稳定表达BERP35T1细胞株BERP35T1-GPX1-6,其GPX1蛋白水平是对照空载体转染细胞的4.01倍(P<0.05);与BERP35T1细胞和对照空载体转染细胞相比,BERP35T1-GPX1-6细胞内8-OHdG水平降低,细胞的增殖、迁移和锚着独立生长能力均减弱(P<0.05)。结论:过表达GPX1可能通过清除细胞内活性氧降低DNA氧化损伤水平,从而抑制BERP35T1细胞增殖、迁移和锚着独立生长能力等恶性表型。

谷胱甘肽过氧化物酶-1在急性髓系白血病中的表达及临床意义

目的通过在线数据库挖掘分析急性髓系白血病(AML)中谷胱甘肽过氧化物酶-1(GPX1)的表达水平并探讨其临床意义。方法通过癌症基因组图谱(TCGA)数据库、基因组织表达(GTEx)数据库及阿拉巴马大学伯明翰分校癌症分析(UALCAN)数据库检索并下载151例AML患者(AML组)和70例正常受试者(正常对照组)的临床资料,以AML患者骨髓细胞中GPX1表达水平的中位数为界,将151例AML患者分为高表达组(76例)和低表达组(75例)。通过数据库收集所有受试者GPX1表达水平及AML组患者的FAB分型、临床资料(性别、年龄、FLT3突变情况、WBC计数、骨髓及外周血原始细胞比例、细胞遗传学中高风险情况)、中位生存时间、1、2、3年生存期及免疫细胞(未成熟树突状细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞、调节性T细胞、辅助性T细胞、记忆T细胞)的单样本基因集富集分析(ssGSEA)评分。采用受试者工作特征(ROC)曲线进行效能诊断。采用单因素和多因素Cox分析探讨影响AML患者预后的因素。采用Kaplan-Meier生存分析曲线比较高表达组和低表达组AML患者的生存时间。采用Spearman相关分析评估不同免疫细胞ssGSEA评分与AML患者GPX1表达水平的相关性。结果AML组患者GPX1表达水平显著高于正常对照组,GPX1在非M3型AML组患者中表达水平显著高于M3型AML组(P<0.001)。ROC曲线分析结果显示,GPX1预测AML的ROC曲线下面积(AUC)为0.987(95%CI 0.976~0.998),GPX1预测M5型AML的AUC为0.713(95%CI 0.543~0.882)。高表达组AML患者WBC计数高于低表达组(P=0.001)。单因素和多因素Cox分析结果显示,年龄、细胞遗传学及GPX1表达水平均为AML患者预后的独立预测因素(P<0.001)。Kaplan-Meier生存分析曲线结果显示,高表达组患者的中位生存时间低于低表达组(P<0.001)。ROC曲线分析结果显示GPX1表达水平预测AML患者1、2、3年生存期的AUC分别为0.669、0.653、0.636。高表达组患者未成熟树突状细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞、调节性T细胞的富集评分均高于低表达组,辅助性T细胞及记忆T细胞的富集评分均低于低表达组(P<0.01)。Spearman相关分析结果显示,GPX1在AML患者中的表达水平与未成熟树突状细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞、调节性T细胞的富集评分均呈显著正相关,而与辅助性T细胞、记忆T细胞的富集评分均呈显著负相关(P<0.05)。结论通过对在线数据库进行挖掘分析发现,GPX1在AML中显著高表达且与患者预后呈负相关,为AML发病机制研究和抗肿瘤治疗提供了理论依据。

PC12细胞转染人GPx-1基因后的抗氧化损伤作用

目的探讨GPx-1高表达在H2O2介导的PC12细胞损伤时的保护作用及分子机制。方法将PC12细胞转染含人GPx-1基因的plncx质粒及空载体plncx质粒,经持续筛选建立起稳定表达人GPx-1基因和空质粒plncx的PC12细胞系。对PC12、GPx-1-PC12、plncx-PC12 3组细胞,分别给予H2O2和亚硒酸钠+H2O2干预方式,GPx活性检测试剂盒检测各组细胞GPx活性;MTT法检测细胞的存活情况;流式细胞仪检测细胞凋亡发生的情况;免疫细胞化学法观察NF-κBp65的表达情况。结果 GPx-1-PC12组细胞GPx活性较对照组明显增高;3组细胞分别给予2种干预后,PC12与plncx-PC12组细胞存活率比较,差异无统计学意义(P>0.05),GPx-1-PC12较PC12、plncx-PC12组细胞存活率明显增高(P<0.01);GPx-1-PC12较PC12、plncx-PC12细胞早期和晚期凋亡率明显下降,存在统计学差异(P<0.01);GPx-1-PC12较PC12细胞NF-κBp65表达明显减少(P<0.01)。结论 GPx-1基因高表达对H2O2所致的PC12细胞氧化损伤有很好的保护作用;GPx-1可抑制PC12细胞氧化损伤时凋亡的发生及NF-κB的表达。

血清PGE1、GPX1及子宫动脉超声参数评估凶险性前置胎盘植入导致的产后出血

目的:探讨血清前列腺素E1(PGE1)、谷胱甘肽过氧化物酶1(GPX1)及子宫动脉超声参数与凶险性前置胎盘植入导致产后出血关系。方法:回顾性收集2019年4月-2022年4月本院治疗的凶险性前置胎盘植入产妇98例临床资料为观察组,凶险性前置胎盘不伴植入产妇80例为对照组,分析两组血清PGE1、GPX1及子宫动脉超声参数阻力指数(RI)、搏动指数(PI)、血管最大血流速度(PSV)和收缩/舒张期速度比值(S/D)等,分析观察组不同临床特征、胎盘植入分类、发生和未发生产后出血产妇上述指标差异,受试者工作特征(ROC)分析上述指标预测产后出血价值。结果:观察组血清PGE1(35.54±9.32pg/ml)和GPX1(30.50±9.14U/L)低于对照组(47.49±9.20 pg/ml、38.38±9.40 U/L)。RI(0.37±0.10)、PI(0.46±0.11)低于对照组(0.44±0.12、0.57±0.10),PSV(44.50±8.12cm/s)和S/D(6.80±1.10)高于对照组(36.61±8.05 cm/s、5.82±1.03)(均P<0.05)。观察组不同年龄、分娩孕周和体质指数产妇血清PGE1、GPX1及子宫动脉超声参数比较无差异(P>0.05),粘连型胎盘植入、植入性胎盘植入、穿透性胎盘植入者RI和PI依次降低,PSV和S/D依次升高,发生产后出血产妇血清PGE1、GPX1、RI和PI均低于未发生产后出血产妇(均P<0.05)。PGE1、GPX1、RI和PI与产后出血量呈负相关(P<0.05)。PGE1、GPX1及RI、PI预测凶险性前置胎盘植入产后出血的ROC曲线下面积分别为0.651、0.668、0.623和0.636。结论:血清PGE1、GPX1及子宫动脉超声参数与凶险性前置胎盘植入的胎盘植入程度、产后出血有关,PGE1、GPX1、RI和PI预测产后出血有一定价值。

银杏素通过抑制Nrf2/HO-1/GPX4信号通路诱导神经胶质瘤细胞铁死亡

目的:探讨银杏素抑制核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)信号通路,对神经胶质瘤细胞铁死亡的影响。方法:以人神经胶质瘤细胞U251为研究对象,分为对照组、银杏素低(银杏素-L,2.5μmol/L)、中(银杏素-M,5μmol/L)、高(银杏素-H,10μmol/L)浓度组、Nrf2激活剂-SFN(莱菔硫烷,20μmol SFN)组、银杏素-H+SFN(10μmol/L银杏素+20μmol SFN)组;流式细胞仪、CCK-8、DCFH-DA、Western blot分别检测U251细胞的细胞凋亡率、增殖水平、活性氧(ROS)含量以及Nrf2/HO-1/GPX4通路蛋白表达水平;铁离子检测试剂检测细胞内铁含量;透射电镜观察细胞超微结构。结果:与对照组相比,银杏素-L、银杏素-M、银杏素-H组线粒体膜厚度及嵴改变,增殖率、Nrf2、HO-1、GPX4蛋白表达均显著下降,凋亡率、ROS及铁含量显著增加(P<0.05);与银杏素-H组相比,银杏素-H+SFN组增殖率、Nrf2、HO-1、GPX4蛋白表达均显著增加,凋亡率、ROS及铁含量显著下降(P<0.05);与SFN组相比,银杏素-H+SFN组增殖率、Nrf2、HO-1、GPX4蛋白表达均显著下降,凋亡率、ROS及铁含量显著增加(P<0.05)。结论:银杏素通过抑制Nrf2/HO-1/GPX4信号通路,可以诱导神经胶质瘤细胞铁死亡,进而发挥抗肿瘤的作用。

藜芦胺对人胶质母细胞瘤细胞U251增殖的影响及机制

目的 探究藜芦胺(VTM)对人胶质母细胞瘤(GBM)细胞U251增殖的影响及其潜在机制。方法 借助网络药理学方法,筛选VTM干预GBM的铁死亡相关交集靶点,并进行基因本体、京都基因和基因组百科全书富集分析。以U251细胞为对象,采用CCK-8法、细胞克隆形成实验、细胞形态变化观察、2′,7′-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针法、FerroOrange荧光探针法、Western blot实验对VTM抑制U251细胞增殖的作用及可能机制进行验证。结果 共筛选出VTM干预GBM的铁死亡相关交集靶点462个,富集于氧化应激、细胞凋亡等生物学过程,胞质囊泡、线粒体膜等细胞成分,影响二价铁离子(Fe^(2+))结合、DNA转录过程等分子功能,以及铁死亡、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路等。40、60、80、100、120、140μmol/L的VTM均可显著降低细胞存活率(P<0.01);40、80、120μmol/L的VTM可使细胞萎缩、细胞核破碎,可显著抑制其克隆形成,显著提高其活性氧(ROS)、Fe^(2+)水平,并可不同程度地上调核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)蛋白的表达,下调谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)。结论 VTM可抑制U251细胞的增殖,促进细胞内ROS和Fe^(2+)的蓄积,从而诱导铁死亡,上述作用可能与调控Nrf2/HO-1/GPX4信号通路有关。

不同剂量硒对小鼠主动脉根部脂质沉积的影响

目的 探究不同剂量硒对小鼠主动脉根部脂质沉积的影响。方法 6~8周龄雄性C57BL/6J和ApoE^(-/-)小鼠各27只,随机分为低硒组(0.02μg·g^(-1))、正常硒组(0.15μg·g^(-1))和补充硒组(0.25μg·g^(-1)),每组9只,其中C57BL/6J小鼠喂含硒普通饲料,ApoE^(-/-)小鼠喂含硒高脂饲料(额外增加0.15%的胆固醇,其他成分与含硒普通饲料相同)。饲养13周后,分别采用还原型辅酶Ⅱ法、噻唑盐法和硫代巴比妥酸法检测小鼠血浆中总谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPx)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活力及丙二醛(malondialdehyde,MDA)的水平;采用RT-qPCR和Western blot法检测主动脉中硒蛋白谷胱甘肽过氧化物酶1(glutathione peroxidase 1,GPX1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)的mRNA和蛋白表达水平;油红O和HE染色法观察主动脉瓣和头臂干动脉内脂质沉积情况。结果 与正常硒组相比,低硒组小鼠血浆中GPx和SOD活力降低、MDA水平升高(P均<0.05);补充硒组小鼠血浆中SOD活力升高、MDA水平降低(P均<0.05),主动脉中GPX1和GPX4 m RNA和蛋白表达水平均升高(P均<0.05),与C57BL/6J小鼠相比,ApoE^(-/-)小鼠主动脉瓣膜和头臂干动脉脂质沉积减少(P<0.05);在ApoE^(-/-)小鼠中,头臂干动脉内有明显斑块形成;与正常硒组相比,低硒组小鼠头臂干动脉内斑块面积增加(P<0.05),补充硒组小鼠头臂干动脉内斑块面积减小(P<0.05)。结论 适当增加饲料中的硒含量可以增强小鼠血浆抗氧化能力,降低ApoE^(-/-)小鼠主动脉根部脂质沉积的程度,其机制可能是通过调节GPX1和GPX4的表达实现的。

小干扰RNA下调GPX1基因对食管鳞癌EC9706细胞增殖及顺铂敏感性的影响

目的探讨靶向下调谷胱甘肽过氧化物酶1(GPX1)对人食管鳞状细胞癌细胞株(EC9706)增殖和顺铂敏感性的影响。方法合成针对GPX1的siRNA,分别用Lipofectamine 2000脂质体瞬时转染人食管鳞状细胞癌细胞株EC9706。Western Blot法检测转染后GPX1蛋白表达,用MTS检测法测定转染后细胞的增殖活力和顺铂敏感性。结果 siRNA干扰EC9706细胞后在36、48、60及72 h对细胞增殖活性较对照组明显抑制(P<0.05)。经siRNA干扰GPX1表达下调,在由不同浓度的顺铂作用后同对照组相比,细胞对顺铂的敏感性明显上升(P<0.05),[IC50(si GPX1)=3.8μmol/L,IC50(阴性对照)=6.1μmol/L,IC50(空白对照)=6.9μmol/L]。结论 siRNA下调GPX1表达可以抑制人食管鳞状细胞癌细胞株EC9706的增殖能力,以及上调其对顺铂的敏感性。