截短人胱硫醚β-合成酶的可溶性表达、纯化及活性鉴定

目的构建截短人胱硫醚β-合成酶(T-hCBS)基因原核表达载体,得到可溶性的T-hCBS蛋白,为同型半胱氨酸检测试剂盒的开发打下基础。方法通过优化T-hCBS基因,克隆并构建重组表达质粒pET15b/T-hCBS,转化大肠埃希菌BL21。使用Ni 2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,再通过HiTrap脱盐柱脱盐,采用比色法检测目的蛋白活性。结果重组蛋白在大肠埃希菌中可以高效表达,产量为44mg/L,比活约1 100U/mg。15%SDS-PAGE显示其相对分子质量为45kD,与预计大小一致。表达菌体超声破碎后上清及纯化的蛋白溶液均呈现红色。结论成功克隆和表达了T-hCBS蛋白,并得到高产高酶活性的可溶性蛋白,对同型半胱氨酸检测试剂盒的开发有一定的潜在应用价值。

胱硫醚β-合成酶基因多态性及血浆同型半胱氨酸与新疆哈萨克族原发性高血压的关系

目的：探讨胱硫醚β-合成酶（Cystathione beta synthase，CBS）基因 T833C、G919A、844ins68多态性及血浆同型半胱氨酸（Homocysteine，Hcy）水平与新疆哈萨克族原发性高血压（Essential Hypertension，EH）的关系。方法选择新疆哈萨克族 EH 患者118例（EH 组）和住院体检者108例（对照组），使用扩增阻滞实变体系法检测 CBS T833C、G919A、844ins68多态性，并采用酶标免疫吸附检测法检测血浆 Hcy 水平，化学发光法检测血浆叶酸、维生素 B12（VitB12）水平。结果EH 组血浆 Hcy 水平均高于对照组（P ＜0．05）。CBS T833C、G919A 纯合型、杂合型血浆 Hcy 水平高于野生型，且差异有统计学意义（P ＜0．05）。EH 组 CBS 基因第833位点 C 等位基因频率、第919位点 A 等位基因频率高于对照组，差异有统计学意义（CBS 833位点 C 等位基因：χ^2＝5．917，P ＝0．015；CBS 919位点 A 等位基因：χ^2＝5．917，P ＝0．020）。通过 Logistic 多元回归去除混杂因素后显示：年龄（OR＝1．120，P ＝0．000，95％ CI 1．077～1．165）、肥胖（OR ＝1．086，P ＝0．040，95％ CI 1．004～1．174）、高同型半胱氨酸血症（OR ＝1．099，P ＝0．039，95％ CI 1．005～1．203）是新疆哈萨克族 EH 的独立危险因素。结论血浆 Hcy水平与新疆哈萨克族 EH 相关。CBS T833C、G919A、844ins68基因多态性可能与新疆哈萨克族 EH 无关。

同型半胱氨酸及胱硫醚β-合成酶基因多态性与2型糖尿病合并冠心病的关系

目的探讨我国北方汉族糖尿病(DM)合并冠心病(CHD)者同型半胱氨酸水平(Hcy)及Hcy代谢相关酶胱硫醚β-合成酶(CBS)的844ins68的基因多态性特点。方法检测104例2型DM合并CHD患者(DM合并CHD)、127例2型DM患者、61例CHD患者和91名健康对照者的Hcy、叶酸、维生素B12、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、载脂蛋白A-I(apo A-I)、载脂蛋白B(apo B)浓度。应用聚合酶链反应(PCR)分析CBS 844ins68基因多态性。结果DM合并CHD组Hcy水平明显高于DM组和对照组,叶酸、维生素B12水平明显低于DM组及对照组(P<0.01)。DM合并CHD组与CHD组Hcy、叶酸、维生素B12水平差异无统计学意义(P>0.05)。DM组与对照组之间Hcy、叶酸、维生素B12水平差异无统计学意义(P>0.05)。4组CBS 844ins68的基因型及等位基因频率差异均无统计学意义(P>0.05)。Lo-gistic回归分析显示高Hcy水平、年龄、TC是CHD发生的独立危险因素,OR值[95%可信区间(CI)]分别为2.117(1.081～4.145)、1.105(1.070～1.142),1.023(1.005～1.042)(P均<0.05)。CBS 844ins68的OR值(95%CI)为1.254(0.229～6.867)(P>0.05)。结论高Hcy水平是我国北方汉族人2型DM合并CHD发生的独立危险因素。CBS 844ins68基因多态性不是2型DM合并CHD的危险因素。

河南汉族深静脉血栓患者胱硫醚β-合成酶基因844ins68多态性检测

目的探讨胱硫醚β-合成酶(CBS)基因844ins68多态性与河南汉族人群深静脉血栓(DVT)形成的关系。方法运用PCR方法,对103例河南汉族DVT患者和250例健康对照进行CBS基因844ins68多态性检测,并进行基因型及等位基因频率分析。结果河南汉族人群CBS844ins68共存在2个等位基因(D和I)和3种基因型(D/D,I/I和I/D)。DVT组与对照组相比,各基因型频率与等位基因频率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论CBS基因844ins68多态尚不能作为河南汉族人群DVT发病的遗传风险因子。

同型半胱氨酸及胱硫醚β-合成酶844ins68基因多态性与急性脑梗死的关系

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)水平及胱硫醚β-合成酶(CBS)844ins68基因多态性与急性脑梗死的相关性。方法运用循环酶法和PCR方法检测300例急性脑梗死患者(病例组)及261例健康对照者(对照组)Hcy水平及CBS 844ins68基因型,并进行测序验证。结果病例组和对照组空腹血浆Hcy水平分别为(19.3±7.2)μmol/L和(15.1±4.9)μmol/L,差异有统计学意义(P<0.05),按卒中类型分层后比较,各卒中类型之间Hcy水平差异无统计学意义(P>0.05);病例组CBS 844ins68 D/D基因型频率为98.7%,I/D型频率为1.3%,对照组分别为97.7%和2.3%,病例组和对照组I等位基因频率分别为0.7%和1.1%,两组基因型和等位基因频率差异均无统计学意义(P>0.05);病例组D/D和I/D基因型相应的Hcy水平分别为(17.3±6.4)、(20.0±13.4)μmol/L,差异无统计学意义(P>0.05)。logistic回归分析结果显示:在调整传统危险因素后,升高的Hcy水平与急性脑梗死发病有关,CBS 844ins68基因突变与脑梗死无关。结论血浆Hcy水平升高是急性脑梗死的独立危险因素;CBS 844ins68基因突变不影响Hcy水平,可能不足以构成急性脑梗死发病中的独立危险因素。

Hcy及胱硫醚β-合成酶844ins68基因多态性与河南汉族脑梗死的关系

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)水平及胱硫醚β-合成酶(CBS 844ins68)基因多态性与河南汉族人群脑梗死的相关性。方法运用循环酶法和PCR方法检测河南汉族300例脑梗死患者及261例健康对照者Hcy水平及CBS 844ins68基因型,并进行测序验证。结果病例组和对照组平均空腹血浆Hcy水平差异有统计学意义(P<0.05);2组基因型和等位基因频率差异均无统计学意义(P>0.05);2组基因型相应的Hcy浓度差异无统计学意义(P>0.05)。Logistic回归分析结果显示,调整传统危险因素后,升高的tHcy水平和脑梗死发病相关,CBS 844ins68基因突变与脑梗死无相关性。结论血浆Hcy浓度升高是河南汉族脑梗死的独立危险因素;CBS 844ins68基因突变不影响Hcy水平,可能不足以构成河南汉族人群中脑梗死发病中的独立危险因素。

胱硫醚β-合成酶G919A基因多态性与原发性高血压关系的meta分析

目的综合评估胱硫醚β-合成酶（CBS）基因 G919A 多态性与原发性高血压（EH）发生风险的关系。方法全面检索 PubMed 、Embase 、Medline 、万方数据库、中国知网（CNKI）、维普资讯，收集 CBS 基因 G919A 多态性与 EH 发生关系的病例对照研究，优势比（OR）及95％可信区间（CI）评估关联强度，应用 RevMan5.3软件对纳入研究进行异质性检验和效应值 OR 合并，漏斗图评价发表性偏倚；敏感度分析过程，分别以固定效应模型和随机效应模型合并 OR 值，以评估结果的稳定性。结果共纳入4篇文献6组病例－对照研究，共累计 EH 组患者1147例，健康对照组1138例，根据异质性检验结果选取固定效应模型或随机效应模型合并数据。 Meta 分析结果显示：CBS 基因919纯合子模型（AA vs GG）、杂合子模型（GA vs GG）、显性模型（AA ＋ GA vs GG）、隐性模型（AA vs GG ＋ GA）和基因频率（A vs G）与 EH 关系的合并 OR（95％ CI）分别为3.03（1.95～4.72）、1.49（1.10～2.02）、1.61（1.23～2.10）、2.65（1.26～5.57）和1.55（1.35～1.79），均 P＜0.01。漏斗图未检测出显著的发表性偏倚。结论目前 Meta 分析表明 CBS 基因 G919A 多态性与 EH 发病相关联，尤其是在中国人群。

亚甲基四氢叶酸还原酶基因突变及胱硫醚β-合成酶基因突变与脑梗死的关系

目的:探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因突变及胱硫醚β-合成酶(CBS)基因突变与脑梗死的关系。方法:分别用聚合酶链反应(PCR)及聚合酶链反应-限制性片段多态性(PCR-RFLP)技术,检测69例脑梗死及67例正常对照的CBS 844ins 68突变频率及MTHFR C 677 T突变频率。结果:MTHFR C 667 T及CBS 844ins 68的各种因型频率在脑梗死组和正常对照组之间无显著性差异(P>0.05)。结论:在本研究人群中,MTHFR C 677 T及CBS844ins 68基因突变可能不是脑梗死的独立危险因素。

河南汉族缺血性脑血管病患者胱硫醚β-合成酶基因844ins68多态性检测

目的探讨胱硫醚β-合成酶(CBS)基因844ins68多态性与缺血性脑血管病的关系。方法运用PCR方法对512例缺血性脑血管病患者及500例健康对照者进行CBS基因844ins68多态性检测。结果缺血性脑血管病患者D/D基因型频率为96.88%,I/D型频率3.13%;对照组分别为97.20%和2.80%;患者组和对照组I等位基因频率分别为1.56%和1.40%。2组基因型和等位基因频率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论CBS844ins68多态性可能不足以构成河南汉族人群缺血性脑血管病发病的一个独立危险因素。

河南汉族缺血性脑血管病患者胱硫醚β-合成酶基因T27796C多态性检测

目的:探讨胱硫醚β-合成酶(CBS)基因T27796C多态性与河南汉族人群缺血性脑血管病的关系。方法:运用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对92例缺血性脑血管病患者(包括血栓性脑梗死、腔隙性脑梗死和短暂性脑缺血发作)及52例对照进行CBS基因T27796C多态性检测。结果:病例组CBS基因T27796CT/T、C/T和C/C基因型频率分别为29.3%、57.6%和13.0%,T和C等位基因频率分别为58.2%和41.8%,对照组T/T、C/T和C/C基因型频率分别为13.5%、61.5%和25.0%,T和C等位基因频率分别为44.2%和55.8%。2组CBS基因T27796CC/C基因型频率相比,差异有统计学意义(χ2=6.344,P=0.012);C等位基因频率相比,差异也有统计学意义(χ2=5.171,P=0.023)。结论:CBS基因T27796C突变可能与缺血性脑血管病有关。

胱硫醚β-合成酶833T/C、919G/A基因多态性与原发性高血压的相关性研究

胱硫醚β-合成酶(CBS)基因多态性与原发性高血压(EH)之间存在着一定的关系,本文从CBS的生物学特性,CBS的基因多态性位点,CBS的基因多态性与CBS表型的关系,CBS的基因多态性与高血压的相关性研究等方面阐述了近年来CBS 833T/C、919G/A基因多态性与EH的相关性研究。

胱硫醚β-合成酶基因多态性与牡丹江地区汉族朝鲜族原发性高血压的相关性

目的探讨胱硫醚β-合成酶(CBS 844ins68)基因多态性与牡丹江地区汉族朝鲜族原发性高血压的相关性研究。方法运用PCR的方法检测牡丹江地区汉族高血压患者107人,汉族正常对照组101人,朝鲜族高血压患者105人,朝鲜族正常对照组96人的血浆Hcy水平及其CBS 844ins68基因型,并进行测序验证。结果未发现CBS 844ins68基因杂合突变型和纯合突变型。结论 CBS 844ins68多态性与本地区汉族、朝鲜族原发性高血压的发生无相关性。

舒泰麻醉对大鼠各脑区内源性H_2S及胱硫醚β-合成酶的影响

为研究舒泰麻醉对大鼠脑内源性H_2S含量及其合成酶CBS的影响,借以探讨内源性硫化氢及其合成酶CBS与麻醉之间的关系。将24只Wistar大鼠随机分为对照组(C组),翻正反射消失组(Z1组)和翻正反射恢复组(Z2组)。各组于相应时间点取脑,使用亚甲蓝染色法和WesternBlot检测各脑区内源性H_2S含量及CBS蛋白表达量。结果显示,Z1组脑干和海马内H_2S含量较C组均显著降低,且脑干和海马内CBS蛋白表达量较C组显著降低,而丘脑内CBS蛋白表达量显著升高(P<0.05);Z2组脑干内H_2S含量较C组显著降低,而丘脑内CBS蛋白表达量较C组显著升高,且海马内H_2S含量与CBS蛋白表达量较其他四个脑区均显著升高(P<0.05)。综合实验结果表明,舒泰与脑中内源性H_2S及CBS的生成具有一定相关性。

同型半胱氨酸代谢酶胱硫醚β-合成酶和N5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与慢性肺源性心脏病的关系

目的了解血浆同型半胱氨酸(Hcy)水平及其代谢酶胱硫醚β-合成酶(CBS)844ins68、N5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T基因多态性与慢性肺源性心脏病(CPHD)的关系。方法选取2014年1月至2016年11月在新乡市第二人民医院住院治疗的CPHD患者230例作为观察组,另选取同期体检健康者235例作为健康对照组,应用肺功能仪进行肺功能检查,记录2组受试者的1秒用力呼气量占预计值百分比(FEV1%pred)、1秒用力呼气量占用力肺活量百分比(FEV1%);观察组患者于入院次日、健康对照组于体检日清晨抽取空腹肘静脉血,检测血浆Hcy、空腹血糖(FBG)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平;并提取全血细胞中的DNA,运用聚合酶链式反应技术进行基因分型,检测CBS 844ins68基因多态性,运用限制性片段长度多态性聚合酶链反应技术检测MTHFR C677T基因多态性。结果观察组患者的FBG水平与健康对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);观察组患者的Hcy、TG、TC和LDL-C均显著高于健康对照组(P<0.05),FEV1%和FEV1%pred均显著低于健康对照组(P<0.05)。观察组患者与健康对照组受试者的CBS 844ins68直接分型均可见2种基因型,其中观察组患者DD和DI基因型频率分别为91.74%和8.26%,D和I的等位基因频率分别为95.87%和4.13%;健康对照组受试者DD和DI基因型频率分别为94.04%和5.96%,D和I的等位基因频率分别为97.02%和2.98%,2组受试者基因型与等位基因频率分布比较差异均无统计学意义(χ~2=0.935、0.901,P>0.05)。观察组患者与健康对照组受试者的MTHFR C677T基因酶切后均可见3种基因型,观察组患者的CC、CT和TT基因型频率分别为21.31%、43.91%和34.78%,C和T的等位基因频率分别为43.26%和56.74%;健康对照组受试者的CC、CT和TT基因型频率分别为27.66%、48.94%和23.40%,C和T的等位基因频率分别为52.13%和47.87%,观察组患者TT基因型与T等位基因频率分布显著高于健康对照组(χ~2=7.730、7.326,P<0.05)。结论 Hcy水平升高可能是CPHD发病的危险因素之一;CBS 844ins68基因多态性可能与CPHD的发生无关;MTHFR C677T基因多态性可能通过影响Hcy代谢水平导致肺源性心脏病的发生,其T等位基因可能是CPHD的风险因子,MTHFRC677T基因可能是CPHD的遗传易感基因。

胱硫醚β-合成酶基因844ins68多态性的检测

目的 了解广东汉族人胱硫醚 β-合成酶基因 84 4ins6 8的分布特点 .方法 PCR扩增 12 4例广东正常人的CBS 84 4ins 6 8基因突变点 ,直接行聚琼脂糖凝胶电泳确定其基因型 .结果 广东汉族人CBS 84 4ins 6 8基因表型频率 :野生型 (D/D) 0 .782 0 ,纯合子突变型 (I/I) 0 .1930 ,杂合子突变型 (D/I) 0 .0 2 5 0 ,CBS 84 4ins 6 8基因频率 :D 0 .8790 ;I0 .12 10 .结论 CBS84 4ins 6 8基因突变存在一定的人种或地域差异 .

胱硫醚-β-合成酶的高效表达及酶学性质研究

以酿酒酵母的cbs基因序列为模板,依据大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)的密码子偏好性进行密码子优化,以pET28a(+)为骨架构建表达质粒pET28a-cbs,并利用Escherichia coli BL21(DE3)进行胱硫醚-β-合成酶(CBS)的表达,同时优化诱导表达条件并分析CBS的酶学性质。结果表明,在诱导温度为16℃、IPTG浓度为0.1 mmol/L、诱导时间为18 h时,CBS浓度最高,为266.67 mg/L。CBS发挥催化作用过程中也受到多种环境因素的影响,在40~55℃时,CBS相对酶活性迅速下降,CBS不适宜长期保存于温度大于40℃的环境中;CBS适宜长期保存于pH为6.5~8.5的缓冲溶液中,不宜保存在过酸或过碱的缓冲溶液中;CBS在温度40℃、pH 8.0条件下,酶活性较高。

胱硫醚β-合成酶基因表达调控研究进展

高同型半胱氨酸血症是心血管疾病独立而重要的危险因子,催化同型半胱氨酸(homocysteine,HCY)转硫代谢的胱硫醚β-合成酶(cystathionine beta-synthase,CBS)基因表达或结构异常是其主要诱因。文章综述了cbs基因的结构特点、调控cbs基因表达的上游顺式反应元件和反式作用因子、CBS蛋白的结构及缺失、突变等方面的研究进展。

新疆维吾尔族、汉族胱硫醚β-合成酶基因多态性及血浆同型半胱氨酸与原发性高血压的相关性

目的探讨胱硫醚β-合成酶（cystathionebetasynthase，CBS）基因T833C、G919A、844ins68多态性以及血浆同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）水平与新疆维吾尔族、汉族原发性高血压（essentialhypertension，EH）的相关性。方法收集EH患者429例，其中维吾尔族211例，汉族218例；健康对照组共410名，其中维吾尔族210名，汉族200名。应用扩增阻滞实变体系（amplification refractorv mutationsystem，ARMS）检测CBS基因T833C、G919A、844ins68多态性，并用酶标免疫吸附检测法检测血浆Hcy水平，用化学发光法检测血浆叶酸、维生素B12水平。结果维吾尔族、汉族EH组血浆Hcy水平均高于对照组（P〈0．05）。维吾尔族、汉族CBS基因T833C、G919A突变基因型血浆Hcy水平高于未突变基因型（野生型），且差异有统计学意义（P〈0．05）。CBS基因G919A多态的频率在维吾尔族及汉族EH组与对照组之间差异有统计学意义（维吾尔族：χ2=10．264，P〈0．01；汉族：χ2=23．075，P〈0．01）；CBS基因T833CSNP分布频率在维吾尔族EH组和对照组有统计学意义（χ2=40．254，P〈0．01）。通过Logistic多元回归去除混杂因素后显示。年龄（OR=1．151，P=0．047，95％CI=1．002-1．323）、T833C（CC）（OR=1．078，=0．003，95％CI=1.043～1．114）、肥胖（OR=1．284，P=0．02l，95％CI=1．038～1．590）、高同型半胱氨酸血症（OR=3．296，P=0．016，95％CI=1．244—8．733）是维吾尔族EH的独立危险因素。年龄（OR=1．162，P=0．007，95％CI=1．042～1．297）、肥胖（OR=3．501，P=0．003，95％CI=1．521～8．060）、高同型半胱氨酸水平（OR=1．046，P=0．03l，95％CI：1．011—1．459）是汉族EH独立危险因素。结论血浆Hcy水平与新疆维吾尔族、汉族EH相关。CBS基因T833CCC基因型可能与新疆维吾尔族EH相关。

胱硫醚-γ-裂解酶和胱硫醚-β-合成酶在高血压大鼠阴茎海绵体中的表达

目的:探讨高血压对大鼠阴茎海绵体组织胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)和胱硫醚-β-合成酶(CBS)表达的影响及与大鼠勃起功能的关系。方法:健康雄性SPF级自发性高血压大鼠(SHR)与对照组WKY(Wistar-Kyoto)大鼠各10只,于12周龄时测定大鼠血清睾酮、阴茎海绵体内压/平均动脉压(ICP/MAP)、血浆和阴茎海绵体内源性H2S的含量,采用免疫组化和Western印迹分析CSE和CBS在阴茎海绵体内的表达。结果:SHR与WKY大鼠的血清睾酮值没有显著差别,SHR的ICP/MAP在0、3和5 V电刺激盆腔神经节(MPG)时均显著低于WKY组(n=10,P<0.05)。SHR血浆H2S含量显著低于WKY大鼠[(10.49±1.35)μmol/Lvs(21.92±2.75)μmol/L,P<0.05],SHR阴茎海绵体组织内源性H2S含量显著低于WKY大鼠[(52.60±3.44)nmol/mg prot vs(87.67±2.12)nmol/mg prot,P<0.05],SHR阴茎海绵体组织内源性H2S生成率也较WKY大鼠显著降低[(1.14±0.07)nmol/(mg·min)vs(4.35±0.32)nmol/(mg·min),P<0.05]。CSE及CBS主要表达在SHR和WKY大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞和血管内皮细胞的胞质,SHR的CSE及CBS蛋白表达量均显著低于WKY大鼠(P<0.05)。ICP/MAP与CSE和CBS表达呈高度正相关(r=0.955、0.977,P均<0.05)。结论:高血压大鼠阴茎海绵体组织中CBS和CSE的表达下降,导致阴茎海绵体内H2S合成减少,可能是高血压引起勃起功能下降的机制之一。

亚甲基四氢叶酸还原酶和胱硫醚-β-合成酶基因多态与唐氏综合征发生的关系

目的探讨母体5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因和胱硫醚-β-合成酶(CβS)基因多态性与唐氏综合征(DS)发生的关系。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测70例DS患儿母亲和117例对照女性的MTHFR两个多态位点(C677T、A1298C),利用SHEsis在线分析软件进行单体型和连锁不平衡分析;PCR法检测CβS 844Ins68基因型。Pearsonχ2检验各基因和基因型频率分布的差异。计算比值比评价相对危险度。结果 MTHFR基因两个多态位点及CβS 844Ins68突变基因频率和基因型频率在病例组和对照组中分布无显著差异(P>0.05)。MTHFR 677T/T/1298(C/C+C/A)联合基因型显著地增加DS发生风险(OR=8.46,95%CI:0.90~79.51,P<0.05)。MTHFR两个多态位点存在连锁不平衡(D’=0.68);677T-1298C单体型与DS发生显著相关(OR=5.22,95%CI:1.37~19.94,P<0.01)。结论 MTHFR两个位点变异联合分析及677T-1298C单体型可能是DS发生的风险因素,不能排除叶酸代谢酶基因多态在DS发生中的作用。