胱硫醚-β-合酶(CBS)基因与冠心病发病机制的研究

目的 :研究冠心病患者血浆同型半胱氨酸(HCY)水平及HCY代谢相关酶胱硫醚 - β-合酶(CBS)基因T833C位点、G919A位点碱基突变与冠心病的关系。方法 :用酶联免疫试剂盒测定血浆HCY水平 ,采用扩增阻滞突变体系法检测CBS基因中T833C和G919A基因型。结果 :冠心病组HCY水平显著高于对照组(P<0.01)。CBS基因T833C冠心病组CC、CT、TT型频率分布及C、T等位基因频率分布 ,G919A冠心病组AA、AG、GG型频率分布及A、G等位基因频率分布 ,均与对照组有非常显著性差异(P<0.05或P<0.01)。T833C、G919A冠心病组中3种基因型的HCY水平有显著性差异(P<0.05)。冠心病组的CC、CT基因型HCY水平显著高于TT型 ,AA、AG基因型HCY水平显著高于GG型。结论 :(1)高HCY血症是冠心病发病的危险因素 ,CBS基因T833C的CC、CT突变和G919A的AA、AG突变是高HCY血症的原因。(2)CBS基因T833C。

冠心病患者胱硫醚β-合酶基因C572T突变频率检测及临床意义

目的探讨胱硫醚β-合酶基因C572T突变与冠心病的相关性。方法采用等位基因特异性扩增(ASA)技术对64例冠心病患者(CHD组)和30例健康者(对照组)CBS C572T基因型进行检测。结果CHD组CBS基因C572T T/T、C/T和C/C型突变频率分别为4.69%、87.50%和7.81%;对照组分别为0、93.33%和6.67%;CHD组C等位基因频率为51.56%、T等位基因频率为48.44%,对照组分别为53.33%和46.67%,两者比较无统计学差异(P(0.05)。结论CBS C572T基因突变与CHD无明显相关性。

冠心病患者胱硫醚β-合酶基因G919A和C572T突变频率

目的:初步探讨胱硫醚β-合酶(CBS)基因G919A和C572T位点突变与冠心病(CHD)的关系.方法:采用等位基因特异性扩增(ASA)技术对广西64例CHD患者和健康30例健康者进行CBS基因G919A和C572T的检测.结果:CBS基因G919A两组间基因型以及A等位基因频率分布差异均有统计学意义(P<0.01).CBS基因C572T两组间基因型以及T等位基因频率分布差异均无统计学意义(P>0.05).但G919A和C572T复合基因型G/A+C/T型与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论:提示CBSG919A突变与广西CHD有重要相关性,而C572T与CHD无明显相关性.

冠心病中医证型与胱硫醚β-合酶基因C572T多态性的关联性分析

目的探讨冠心病患者胱硫醚β-合酶(CBS)基因C572T多态性与中医证型的关联性。方法采用等位基因特异性扩增法检测64例冠心病患者CBS C572T多态性不同基因型,并统计分析各基因型在冠心病中医证型间的分布差异。结果冠心病患者CBS基因C572T产生T/T、C/T和C/C 3种基因型,各基因型在冠心病中医证型间分布无显著性差异(P>0.05),各基因型在冠心病中医证型实证组和虚证组间分布亦无显著性差异(P均>0.05)。结论CBS基因C572T多态性与冠心病中医证型无明显关联性。

广西汉族老年缺血性脑卒中患者胱硫醚β-合酶（CBS）基因C572T突变频率

目的初步探讨同型半胱氨酸（Hey）代谢相关酶胱硫醚β-合酶（CBS）基因C572T基因突变与广西汉族老年缺血性脑卒中发病的相关性。方法采用等位基因特并性扩增技术检测75例广西汉族老年缺血性脑卒中患者和50例正常健康体检者（对照组）CBS基因C572T基因型。结果老年缺血性脑卒中组CBS基因C572TT／T，C／T和C／C基因型频率分别为6．67％，82．67％和10．67％，对照组分别为4％，86％和10oA；老年缺血性脑卒中组C等位基因频率为52％，T等位基因频率为48％，对照组分别为53％扣47％，基因型频率、等位基因频率，两组差异无统计学意义（Χ^2=0．43，Χ^2=0．02，P〉0．05）。结论CBSC572T基因突变与广西汉族老年缺血性脑卒中发病无明显相关性，其基因突变可能不足于构成广西汉族老年缺血性脑卒中发病的独立遗传危险因素。

胱硫醚β-合酶C770T基因多态性与冠心病及其中医证型的相关性

目的探讨同型半胱氨酸代谢关键酶胱硫醚β-合酶基因C770T基因多态性在冠心病(CHD)发病中的意义及其与CHD中医证型的关系。方法采用等位基因特异性扩增法(PCR-ARMS)检测94例CHD患者(CHD组)和经门诊体检的40例健康者(对照组)的CBS C770T基因型,并统计分析各基因型在CHD中医证型间的分布差异。结果 (1)CBS基因C770T产生2种基因型:C/T型和C/C型。CHD组C/T型突变频率为54.3%,对照组为37.5%,C/T基因型对CHD的OR值为1.977,95%CI为0.926～4.218;CHD组C等位基因频率为72.8%,T等位基因频率为27.2%,对照组分别为81.3%和18.7%,T基因型对CHD的OR值为1.613,95%CI为0.845～3.081。两组间C/T、C/C型以及T等位基因频率分布差异无统计学意义(P>0.05)。(2)各基因型在CHD中医证型间分布差异无统计学意义(P>0.05),各基因型在CHD中医证型实证与虚证间分布差异亦无统计学意义(P>0.05)。结论 (1)CBS C770T基因突变与CHD无明显相关性。(2)CBS C770T基因多态性与CHD中医证型无明显关联性。

65例广西籍冠心病患者胱硫醚β-合酶基因9208G>A突变频率

目的探讨胱硫醚β-合酶(CBS)基因9208G>A突变在广西籍冠心病(CHD)发病中的意义。方法采用等位基因特异性扩增(ASA)技术对65例广西籍冠心病患者(CHD组)和65例健康者(对照组)进行CBS9208G>A的检测。结果CHD组的CBS基因A/A,A/G和G/G型突变频率分别为9·32%,29·23%和61·54%,对照组分别为3·08%,15·38%和81·54%。CHD组A等位基因频率为23·8%,G等位基因频率为76·15%,对照组分别为10·76%和89·23%,两组间基因型以及A等位基因频率分布差异均有显著性(P<0·05)。结论CBS9208G>A突变与广西籍CHD有重要相关性。

细胞色素芳香化酶基因及环氧合酶-2基因mRNA在子宫内膜异位症异位与在位内膜的表达

目的探讨细胞色素芳香化酶(P450arom)基因、环氧合酶-2(COX-2)基因mRNA在子宫内膜异位症(内异症)患者异位、在位子宫内膜组织中的表达及其意义。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测内异症患者在位及异位子宫内膜及正常子宫内膜中P450arom mRNA、COX-2 mRNA的表达情况。结果P450arom mRNA在内异症患者异位及在位子宫内膜均有强表达,正常子宫内膜无表达,分泌期、增殖期无差别;COX-2 mRNA在内异症患者异位及在位子宫内膜均有强表达,正常子宫内膜弱表达(P<0.05),且内异症患者在位子宫内膜及正常子宫内膜COX-2 mRNA表达分泌期均略强于增殖期,但差别均无统计学意义(P>0.05),异位内膜分泌期、增殖期无差别。不同rAFS分期内异症子宫内膜P450arom mRNA、COX-2 mRNA的表达无差别。结论子宫内膜P450arom mRNA、COX-2 mRNA的高表达与内异症的发生、发展可能密切相关。

鹌鹑肝组织胱硫醚β-合酶基因RT-PCR的实验研究

[目的]建立一种有效的鹌鹑肝组织胱硫醚β-合酶(CBS)RT-PCR,为实现CBS Real-time PCR提供条件。[方法]采取一步法,改进一步法,异硫氰酸胍法(重复抽提)和异硫氰酸胍法(一步法)四种方法提取总RNA,以CBS cDNA共有序列设计鹌鹑CBS引物,进行CBS RT-PCR引物筛选。[结果]除改进一步法外,其他三种方法提取的总RNA完整性好;除异硫氰酸胍法(一步法)外,其他三种方法提取的总RNA的A260/A280都在1.8以上纯度。异硫氰酸胍法(重复抽提)提取的总RNA极少残留DNA。[结论]四种方法都能较好地扩增CBS片段,一步法最省时。但异硫氰酸胍法(重复抽提)抽提得到的RNA质量较好.

灯盏乙素通过环状GMP-AMP合酶-干扰素基因刺激因子通路抑制BV-2小胶质细胞介导的神经炎症

目的探讨灯盏乙素对脂多糖(LPS)诱导的BV-2小胶质细胞神经炎症的影响。方法培养BV-2小胶质细胞系,将BV-2小胶质细胞分为对照组(Ctrl)、环状GMP-AMP合酶(cGAS)抑制剂RU320521(RU.521)组、LPS组、LPS+RU.521组、LPS+灯盏乙素预处理(LPS+S)组、LPS+S+RU.521组,共6组。Western blotting及免疫荧光双标染色法检测并观察BV-2小胶质细胞中cGAS、干扰素基因刺激因子(STING)、核因子κB(NF-κB)、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)、PYD结构域蛋白3(NLRP3)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达变化(n=3)。结果Western blotting和免疫荧光双标染色均显示,与对照组相比,LPS诱导后,BV-2小胶质细胞中cGAS、STING、p-NF-κB、NLRP3和TNF-α蛋白的表达水平显著升高(P<0.05);与LPS组相比,LPS+S组中cGAS、STING、p-NF-κB、NLRP3和TNF-α蛋白的表达水平显著下降(P<0.05)。使用cGAS通路抑制剂RU.521后显示了与灯盏乙素预处理组相似的作用效果。此外,NF-κB在各组的变化不明显(P>0.05)。结论灯盏乙素干预抑制BV-2小胶质细胞介导的神经炎症反应,可能与cGAS-STING信号通路有关。

同型半胱氨酸及其胱硫醚酶β-合成酶G919A基因多态性与颅内动脉粥样硬化性狭窄的相关性研究

目的探讨胱硫醚酶β-合成酶(CBS)G919A基因多态性与同型半胱氨酸(Hcy)及颅内动脉粥样硬化性狭窄的关系。方法对348例急性脑梗死患者行颅内血管MRA检查。采用PCR-限制片段长度多态性技术和扩增阻滞突变体系法检测患者CBS G919A基因多态性,并使用全自动生化仪采用循环酶法测定其血浆Hcy浓度。结果 348例急性脑梗死患者被纳入研究,其中合并颅内动脉狭窄186例,无颅内动脉狭窄162例。其中CBS G919A基因为纯合突变型(AA)33例(9.4%)、杂合突变型(GA)135例(38.8%)、野生型(GG)180例(51.7%)。纯合突变型患者血浆Hcy水平显著高于杂合突变型及野生型患者(t=9.15,P<0.05;t=8.67,P<0.05);杂合突变型患者血浆Hcy水平显著高于野生型患者(t=6.89,P<0.05)。狭窄组与非狭窄组基因型及等位基因频率差异均无统计学意义(χ^2=1.29,P>0.05;χ^2=0.55,P>0.05)。结论 CBS G919A基因型与血浆Hcy水平相关,但与颅内动脉粥样硬化性狭窄无关。

胱硫醚β-合酶基因C770T基因突变与先天性心脏病的相关性研究

目的初步探讨母亲同型半胱氨酸代谢酶胱硫醚β-合酶(CBS)基因C770T基因突变与子代先天性心脏病(CHD)发生的关系。方法运用等位基因扩增技术检测62对CHD患儿(病例组)及其生物学母亲C770T基因型,并且与62对健康儿童(对照组)及其生物学母亲C770T基因型对比。结果 CBS C770T产生C/C及C/T两种基因型,病例组母亲的C/C及C/T基因型频率分别为45.16%和54.84%,C和T等位基因频率分别为72.58%和27.42%;对照组母亲的C/C型、C/T型、C及T等位基因频率分别为59.68%、40.32%、79.84%及20.16%,两组母亲的基因型频率及等位基因频率分布比较,差异均无统计学意义(P>0.05);此外,病例组C/C型、C/T型和T等位基因频率分别为43.55%、56.45%和28.23%,对照组分别为58.06%、41.94%及29.03%,两组C/C型、C/T型及T等位基因频率分布比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论在广西人群中,母亲CBS C770T基因突变与子代CHD无明显相关性,母亲C770T突变可能不足以构成子代CHD的独立遗传危险因素。

妊娠期高血压疾病患者胱硫醚β-合酶基因突变频率分析

目的初步探讨同型半胱氨酸(Hcy)代谢相关酶胱硫醚β-合酶(CBS)基因C572T基因突变频率在广西河池地区妊娠期高血压疾病(HDP)发病中的作用。方法采用等位基因特异性扩增(ASA)技术检测63例HDP患者(观察组)和32例孕期经过顺利的正常孕妇(对照组)CBS基因C572T基因型。结果HDP组CBS基因C572T T/T、C/T和C/C基因型频率分别为4.76%、84.13%和11.11%;对照组分别为3.13%、87.50%和9.37%;HDP组C等位基因频率为53.17%、T等位基因频率为46.83%,对照组分别为53.13%和46.87%,二者比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论CBS C572T基因突变频率与HDP发病无明显相关性,其基因突变频率可能不足以构成广西河池地区HDP发病的独立遗传危险因素。

丹参酮Ⅱ-A抑制血管合成醛固酮及醛固酮合酶基因CYP11B2信使核糖核酸表达

目的：说明丹参酮ⅡＡ对血管合成血管紧张素Ⅱ及醛固酮的作用。方法：用大鼠肠系膜动脉离体灌注、高效液相色谱法和放射免疫法检测肠系膜动脉中合成的血管紧张素Ⅱ及醛固酮。用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）及ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔ法检测血管中醛固酮合酶基因ＣＹＰ１１Ｂ２信使核糖核酸（ｍＲＮＡ）的表达情况。结果：丹参酮ⅡＡ抑制血管合成醛固酮，但不能抑制血管合成血管紧张素Ⅱ。丹参酮ⅡＡ抑制血管中醛固酮合酶基因ＣＹＰ１１Ｂ２ｍＲＮＡ的表达。结论：丹参酮ⅡＡ治疗心血管疾病的机制可能与其抑制血管合成醛固酮有关。

茶树β-葡萄糖苷酶基因mRNA的表达

采用原位杂交技术对茶树β葡萄糖苷酶基因mRNA的表达进行了研究。结果表明,β葡萄糖苷酶基因mRNA主要在茶树叶片栅栏组织、叶主脉的薄壁组织表达;不同品种之间的表达位置基本相似,但表达信号却有差异,以龙井43号最强,福鼎大白茶、槠叶齐次之,而大叶乌龙、迎霜最弱。结果还显示,不同季节的表达信号以春梢最强,秋梢次之,夏梢最弱。

梨内根-贝壳杉烯合酶基因克隆及表达分析

中矮1号(Pyrus communis)是中国农业科学院果树研究所选育的梨优良矮化砧木,为研究其矮化机理,应用同源克隆的方法从中矮1号叶片总RNA中克隆赤霉素合成过程中的关键酶——内根-贝壳杉烯合酶(KS)基因的cDNA全长序列,并对该基因在不同梨品种中的表达进行分析。结果表明:基于苹果基因组序列设计的特异引物从中矮1号的总RNA中扩增出了1个编码框全长为2214 bp的cDNA序列,其编码737个氨基酸残基,推断分子量为83.63 kD,等电点为5.37。其氨基酸序列与报道的其他植物KS氨基酸序列的相似性为53.61%～72.63%,其中,与板栗(AEF32083.1)的相似性最高,其氨基酸序列中包含植物KS基因所共有的YDTAWVAWVP和DDXXD保守结构域,因此,将分离到的基因命名为PcKS。早酥、锦香和中矮1号等不同梨品种的PcKS基因的cDNA序列仅有个别碱基差异,但编码的氨基酸序列完全一致,品种间不存在结构差异。RT-PCR表达分析结果表明,PcKS基因在早酥中的表达量低于同时期的锦香和中矮1号,与植株高度相反,初步表明该基因的表达有与梨植株生长势呈负相关的趋势。

电针治疗大鼠慢性炎症痛时脊髓环氧合酶-2 mRNA和蛋白的表达变化

目的:观察多次电针对慢性炎症痛大鼠的镇痛作用和局部炎症组织的修复作用,以及对脊髓环氧合-酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)mRNA和蛋白表达的影响。方法:SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组和电针组,在佐剂性关节炎大鼠模型上,电针“阳陵泉”“昆仑”穴(频率2 Hz,强度≤1 mA,连续波,20 min/次,每天治疗1次)。用辐射热测痛法观察电针对慢性炎症痛大鼠辐射热痛敏分数的影响;用HE组织化学染色法观察电针对炎症组织的修复作用;用RT-PCR和免疫组织化学方法观察电针对慢性炎症痛大鼠脊髓COX-2 mRNA和蛋白表达的影响。结果:电针能显著减少慢性炎症痛大鼠痛敏分数的绝对值;电针治疗后大鼠关节腔内炎性渗出和滑膜中性粒细胞浸润基本消失,滑膜水肿减轻,滑膜囊表面修复;电针显著下调了炎症痛引起的大鼠脊髓COX-2 mRNA和蛋白的过度表达。结论:电针对慢性炎症痛大鼠有明显的镇痛作用;电针能较好地缓解局部炎症,促进炎症组织的修复;电针的镇痛作用可能与对脊髓COX-2 mRNA和蛋白表达的调节有关。

苹果α-法尼烯合酶基因组结构和序列的多态性分析

通过设计引物进行PCR扩增、测序、拼接序列,以及与GenBank中的cDNA序列(登录号AY182241)进行比对,获得α-法尼烯合酶基因(AFS)的基因组序列和内含子/外显子结构。获得的AFS基因序列已在GenBank注册(登录号DQ901739),它有6个内含子和7个外显子,编码一个大小为576个氨基酸的蛋白质。间隔外显子的6个内含子相位分别是0、1、2、2、0、0,其大小分别是108、113、>1000、125、220和88bp,7个外显子的推导氨基酸序列大小分别是57、89、127、73、48、83和99。编码的蛋白质中有3个序列模式(motif),RR(X8)W模式的编码基因序列在基因5′端的外显子1上,RxR模式和DDxxD模式的编码基因序列在外显子4上。将获得的AFS基因序列与GenBank中的cDNA序列(登录号AY523409)进行比对,结果发现两序列间有6个单核苷酸多态性,其中4个引起氨基酸突变。有意义的是,1个氨基酸突变(291R→G)发生在RxR模式上,此氨基酸突变以及其它突变是否与苹果α-法尼烯合成能力和虎皮病发生能力有关,值得进一步探讨。