内皮型一氧化氮合酶在运动预适应改善心肌缺血-再灌注损伤中的作用

背景:运动是防治各种心血管疾病并保护心脏免受缺血-再灌注损伤的有效策略,其作用机制有待深入研究。目的:观察有氧运动预适应对心肌缺血-再灌注损伤的影响,并探讨内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)激活(包括偶联和磷酸化)在其间的作用。方法:取80只成年Wistar大鼠,采用随机数字表法分为安静组(n=40)和运动组(n=40),运动组进行8周有氧运动,安静组在鼠笼内安静饲养。8周后进行3项实验:①实验1:末次训练后,检测大鼠心功能、心脏NO代谢物含量及心脏eNOS、磷酸化eNOS-S1177、eNOS二聚体、eNOS单体的蛋白表达量;②实验2:将大鼠分为安静对照组、运动对照组、安静+eNOS抑制剂组、运动+eNOS抑制剂组,均进行体外心肌缺血-再灌注损伤实验,安静+eNOS抑制剂组、运动+eNOS抑制剂组再灌注前10 min持续灌注eNOS抑制剂,再灌注3 h后检测心功能与心肌梗死面积;③实验3:将大鼠分为安静对照组、运动对照组、安静+eNOS偶联剂组和运动+eNOS偶联剂组,均进行体外心肌缺血-再灌注损伤实验,安静+eNOS偶联剂组和运动+eNOS偶联剂组再灌注前10 min持续灌注eNOS偶联剂,再灌注3 h后检测心肌梗死面积、心脏NO代谢物含量及心脏eNOS、磷酸化eNOS-S1177、eNOS二聚体、eNOS单体和3-硝基酪氨酸的蛋白表达量(其中,磷酸化eNOS-S1177/eNOS比值反映eNOS磷酸化/去磷酸化水平,eNOS二聚体/单体比值反映eNOS偶联/解偶联水平)。结果与结论:①实验1:与安静组比较,运动组大鼠心输出量、左心室射血分数升高(P<0.05),亚硝酸盐和S-亚硝基硫醇含量升高(P<0.05),磷酸化eNOS-S1177、eNOS蛋白表达和磷酸化eNOS-S1177/eNOS比值上调(P<0.05),eNOS二聚体蛋白表达和eNOS二聚体/单体比值升高(P<0.05);②实验2:与安静对照组比较,运动对照组左心室发展压升高(P<0.05),心肌梗死面积下降(P<0.05);与运动对照组比较,运动+eNOS抑制剂组左心室发展压降低(P<0.05),心肌梗死面积增加(P<0.05);③实验3:与安静对照组比较,运动对照组左心室发展压升高(P<0.05),心肌梗死面积下降(P<0.05),磷酸化eNOS-S1177/eNOS比值下降(P<0.05),eNOS二聚体/单体比值下降(P<0.05),S-亚硝基硫醇含量增加(P<0.05),3-硝基酪氨酸蛋白表达量下调(P<0.05);与运动对照组比较,运动+eNOS偶联剂组左心室发展压降低(P<0.05),心肌梗死面积增加(P<0.05),磷酸化eNOS-S1177/eNOS比值升高(P<0.05),eNOS二聚体/单体比值升高(P<0.05),3-硝基酪氨酸蛋白表达升高(P<0.05);④结果表明:有氧运动预适应可诱导心脏保护效应,其机制与心脏缺血-再灌注期间eNOS解偶联以及去磷酸化进而抑制NO过度产生并降低硝基-氧化应激有关。

胱硫醚-β-合酶(CBS)基因与冠心病发病机制的研究

目的 :研究冠心病患者血浆同型半胱氨酸(HCY)水平及HCY代谢相关酶胱硫醚 - β-合酶(CBS)基因T833C位点、G919A位点碱基突变与冠心病的关系。方法 :用酶联免疫试剂盒测定血浆HCY水平 ,采用扩增阻滞突变体系法检测CBS基因中T833C和G919A基因型。结果 :冠心病组HCY水平显著高于对照组(P<0.01)。CBS基因T833C冠心病组CC、CT、TT型频率分布及C、T等位基因频率分布 ,G919A冠心病组AA、AG、GG型频率分布及A、G等位基因频率分布 ,均与对照组有非常显著性差异(P<0.05或P<0.01)。T833C、G919A冠心病组中3种基因型的HCY水平有显著性差异(P<0.05)。冠心病组的CC、CT基因型HCY水平显著高于TT型 ,AA、AG基因型HCY水平显著高于GG型。结论 :(1)高HCY血症是冠心病发病的危险因素 ,CBS基因T833C的CC、CT突变和G919A的AA、AG突变是高HCY血症的原因。(2)CBS基因T833C。

高同型半胱氨酸血症与胱硫醚-β-合酶敲除小鼠紫癜性肾炎加重的相关性

目的研究高同型半胱氨酸血症(HHcy)与胱硫醚-β-合酶(CBS)敲除(KO)小鼠紫癜性肾炎(HSPN)加重的相关性。方法选择CBS-野生型(WT)雄性C57BL/6J小鼠、雄性CBS-KO小鼠(C57BL/6J背景)各40只,鼠龄8~10周,体质量18~20 g。CBS-WT小鼠和CBS-KO小鼠均采用印度墨水尾静脉注射联合麦醇溶蛋白灌胃建立HSPN模型,造模过程中给予常规饮食或高蛋氨酸饮食,给予对照溶剂、内质网应激(ERS)激动剂或拮抗剂腹腔注射。检测血清同型半胱氨酸(Hcy)含量、血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、24 h尿蛋白、肾脏病理改变及肾小球内细胞凋亡率、C/EBP同源蛋白(CHOP)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)-12、caspase-3表达水平。结果常规饮食CBS-WT+HSPN组、高蛋氨酸饮食CBS-WT+HSPN组均出现肾脏病理改变,SCr、BUN、24 h尿蛋白水平高于常规饮食CBS-WT组(P<0.05),且常规饮食CBS-WT+HSPN组与高蛋氨酸饮食CBS-WT+HSPN组肾脏病理改变及SCr、BUN、24 h尿蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05);与常规饮食CBS-KO组比较,常规饮食CBS-KO+HSPN组出现肾脏病理改变,SCr、BUN、24 h尿蛋白水平、肾小球内细胞凋亡率、CHOP、caspase-12、caspase-3表达水平升高(P<0.05);与常规饮食CBS-KO+HSPN组比较,高蛋氨酸饮食CBS-KO+HSPN组肾脏病理改变加重,Hcy、SCr、BUN、24 h尿蛋白水平、肾小球内细胞凋亡率、CHOP、caspase-12、caspase-3表达水平升高(P<0.05)。与高蛋氨酸饮食CBS-KO+HSPN+溶剂对照组比较,高蛋氨酸饮食CBS-KO+HSPN+ERS激动剂组肾脏病理改变加重,Hcy、SCr、BUN、24 h尿蛋白水平、肾小球内细胞凋亡率、CHOP、caspase-12、caspase-3表达水平升高;高蛋氨酸饮食CBS-KO+HSPN+ERS拮抗剂组肾脏病理改变减轻,Hcy、SCr、BUN、24 h尿蛋白水平、肾小球内细胞凋亡率、CHOP、caspase-12、caspase-3表达水平降低(P<0.05)。结论HHcy引起CBS-KO的HSPN小鼠肾脏病理改变加重、肾小球细胞凋亡加剧,激活ERS是与HHcy上述作用相关。

石蒜1-氨基环丙烷-1-羧酸合酶基因LrACS的克隆及功能鉴定

为了解1-氨基环丙烷-1-羧酸合酶(ACS)基因在石蒜〔Lycoris radiata(L'Hér.)Herb.〕乙烯合成中的作用,对石蒜ACS基因LrACS进行了克隆,并通过系统进化树和氨基酸序列比对分析明确LrACS与其他同源蛋白的进化关系。利用亚细胞定位分析LrACS在细胞中的定位,对LrACS重组蛋白进行体外活性检测,并利用实时荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)分析不同生长时期LrACS的组织特异性表达。结果显示:LrACS的开放阅读框长度为1473 bp,编码490个氨基酸。LrACS的理论相对分子质量为54954.97,理论等电点为pI 8.21。系统进化树分析结果表明LrACS与忽地笑〔Lycoris aurea(L'Hér.)Herb.〕LaACS的亲缘关系最近,均属于Ⅰ型ACS蛋白。亚细胞定位结果显示LrACS主要定位于细胞质基质。体外活性检测结果证实LrACS重组蛋白能够催化S-腺苷甲硫氨酸(SAM)生成1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)。qRT-PCR分析结果显示:LrACS在花期和叶期的石蒜各组织中均有表达,但其表达具有组织特异性,其中,花期花瓣中LrACS的相对表达量极显著(P<0.01)高于根、鳞茎、花茎,叶期根中LrACS的相对表达量极显著高于鳞茎和叶。综上所述,LrACS主要定位于细胞质基质并在石蒜不同生长时期行使催化SAM生成ACC的功能。

环氧合酶-2抑制剂对佐剂性关节炎大鼠胃黏膜的影响

目的 探究选择性环氧合酶(COX)-2抑制剂是否加重佐剂性关节炎大鼠胃黏膜损伤及其机制。方法 将32只雄性SD大鼠随机分为空白对照组、关节炎组、正常给药组和关节炎给药组,给予选择性COX-2抑制剂塞来昔布灌胃4 w,取大鼠胃组织行苏木素-伊红(HE)染色损伤评分,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测前列腺素(PG)E2,实时荧光定量-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测COX-1、COX-2 mRNA。结果 与空白对照组比较,关节炎组、关节炎给药组胃黏膜PGE2均显著降低(P<0.05),胃黏膜损伤评分均显著增加(P<0.05);正常给药组胃黏膜PGE2、胃黏膜损伤评分与空白对照组比较无显著差异(P>0.05);关节炎组胃黏膜COX-1、COX-2均较空白对照组显著增加(P<0.05),正常给药组胃黏膜COX-1、COX-2与空白对照组相比均无显著差异(P>0.05);与关节炎组比较,关节炎给药组胃黏膜PGE2、COX-1、COX-2及胃黏膜损伤评分均无显著差异(P>0.05)。结论 在治疗剂量下,塞来昔布不会造成正常大鼠胃黏膜损伤,也不会加重佐剂性关节炎大鼠胃黏膜的损伤;佐剂性关节炎大鼠存在胃黏膜损伤;佐剂性关节炎大鼠胃黏膜损伤可能与黏膜局部PGE2下降相关,COX-1、COX-2表达增加可能与关节炎所致全身慢性炎症有关。

铁死亡调控因子花生四烯酸脂氧合酶-15与肿瘤相关性的研究进展

铁死亡(Ferroptosis)是一种铁依赖性的新型的细胞程序性死亡(PCD)方式。花生四烯酸脂氧合酶-15(Arachidonate 15-lipoxygenase,ALOX15)是铁死亡的重要调控因子,它可以催化多不饱和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acid,PUFA)生成脂质氢过氧化物,从而促进铁死亡的发生。ALOX15参与了多种癌症的发生发展,并发挥重要作用。本文对铁死亡的重要调控因子ALOX15与乳腺癌、食管癌、胃癌、结直肠癌以及前列腺癌的相关性进行综述,为相关肿瘤的研究提供参考。

广西汉族老年缺血性脑卒中患者胱硫醚β-合酶（CBS）基因C572T突变频率

目的初步探讨同型半胱氨酸（Hey）代谢相关酶胱硫醚β-合酶（CBS）基因C572T基因突变与广西汉族老年缺血性脑卒中发病的相关性。方法采用等位基因特并性扩增技术检测75例广西汉族老年缺血性脑卒中患者和50例正常健康体检者（对照组）CBS基因C572T基因型。结果老年缺血性脑卒中组CBS基因C572TT／T，C／T和C／C基因型频率分别为6．67％，82．67％和10．67％，对照组分别为4％，86％和10oA；老年缺血性脑卒中组C等位基因频率为52％，T等位基因频率为48％，对照组分别为53％扣47％，基因型频率、等位基因频率，两组差异无统计学意义（Χ^2=0．43，Χ^2=0．02，P〉0．05）。结论CBSC572T基因突变与广西汉族老年缺血性脑卒中发病无明显相关性，其基因突变可能不足于构成广西汉族老年缺血性脑卒中发病的独立遗传危险因素。

胱硫醚-β-合成酶(CBS)基因T833C突变与中国人群出血性脑卒中发病无关

目的 了解胱硫醚 β 合成酶 (CBS)基因T83 3C突变与中国人群出血性脑卒中之间的关系。 方法 利用PCR和分子杂交技术对该位点在中国人群出血性脑卒中患者 ( 2 0 2人 )中的分布进行检测和分析 ,并与无脑血管病变的人群 ( 190人 )进行比较。结果 TT、TC、CC三种基因型在病例组中分布频率分别为 98 5 1%、1 49%和 0 ,对照组中分别为 97 89%、2 11%和 0 ;两组人群 83 3C等位基因频率分别为 0 74%和 1 0 5 % ,均无统计学明显差异。结论 胱硫醚 β 合成酶基因T83

补阳还五汤对脑缺血后12/15-脂氧合酶及相关炎性产物影响

目的观察补阳还五汤对脑缺血再灌注后12/15-脂氧合酶(12/15-LOX)及下游相关代谢产物的影响。方法将雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组和12/15-LOX抑制剂PD146176组。假手术组只分离组织和剥离血管,模型组建立大鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,补阳还五汤组于造模术后给予补阳还五汤16 g·kg-1灌胃,2次/d,PD146176组于造模术前30 min给予PD14617610 mg·kg-1皮下注射(同补阳还五汤组做阳性对照)。缺血再灌注后6 h、24 h、48 h和72 h运用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测脑组织12/15-LOX的表达水平;免疫荧光(IF)法观察大鼠脑组织中12/15-LOX蛋白与神经元标记物(NeuN)、小胶质细胞标记物(Iba1)及星形胶质细胞标记物(GFAP)的共定位;酶联免疫吸附(ELISA)法检测12/15-LOX抗炎代谢产物消退素D1(RvD1)的含量,以及促炎代谢产物12-羟基廿碳四烯酸(12-HETE)和15-羟基廿碳四烯酸(15-HETE)的含量;免疫荧光法检测髓过氧化物酶(MPO)的表达,反映炎症细胞浸润程度。蛋白免疫印迹法检测脑组织白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-10(IL-10)表达水平。结果与假手术组比较,模型组在脑缺血再灌注不同时间点12/15-LOX表达均升高(P<0.01),与模型组比较,补阳还五汤组在脑缺血再灌注后6 h、24 h、48 h、72 h 12/15-LOX表达均降低(P<0.05或P>0.05)。12/15-LOX与NeuN和Iba1共定位重合较多,与GFAP共定位基本无重合。与假手术组比较,模型组RvD1含量降低(P<0.01),12-HETE和15-HETE含量升高(P<0.01),MPO和IL-6表达升高(P<0.01),IL-10表达降低(P<0.01);与模型组比较,PD146176组和补阳还五汤组RvD1含量升高(P<0.05,P<0.01),12-HETE和15-HETE含量降低(P<0.01),MPO表达减少(P<0.01),IL-6蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),补阳还五汤组IL-10蛋白表达升高(P<0.01)。结论补阳还五汤可能通过抑制12/15-LOX表达而增加抗炎产物RvD1,降低促炎产物12-HETE和15-HETE,以减轻脑缺血再灌注后炎症损伤。

黄芪抗癌汤对早期喉癌患者膜联蛋白A2、环氧合酶-2及色素框同源物7水平的影响

目的 探究黄芪抗癌汤对早期喉癌患者膜联蛋白A2(ANXA2)、环氧合酶-2(COX-2)及色素框同源物7(CBX7)水平的影响。方法 选取2019年10月—2021年10月于山东省青州市人民医院和扬州大学附属医院就诊的早期喉癌患者110例,采用随机数字表法分为手术组50例和观察组60例;另选同期于山东省青州市人民医院接受体格检查的健康个体50例作为健康组。健康组不予治疗;手术组进行喉癌CO_(2)激光治疗,术后予银黄含片和参芪颗粒口服治疗5 d;观察组在手术组治疗基础上联合黄芪抗癌汤口服治疗,连续治疗1个月。ELISA检测健康组门诊就诊时、手术组和观察组治疗前后血清ANXA2、COX-2、CBX7水平。结果 与健康组比较,手术组和观察组治疗前血清ANXA2、COX-2水平均明显升高(P<0.05),CBX7水平明显降低(P<0.05);与治疗前比较,手术组和观察组治疗后血清ANXA2、COX-2水平均明显降低(P<0.05),CBX7水平明显升高(P<0.05);与手术治疗后比较,观察组治疗后血清ANXA2、COX-2水平均明显降低(P<0.05),CBX7水平明显升高(P<0.05)。结论 黄芪抗癌汤可改善早期喉癌患者血清ANXA2、COX-2及CBX7的异常水平。

β内啡肽、环氧合酶-2、多巴胺受体D2在右向左分流合并有先兆偏头痛患者血清中的表达及其与焦虑状况的关联性

目的 研究β内啡肽(β-EP)、环氧化酶-2(COX-2)、多巴胺受体D2(DRD2)在右向左分流(RLS)合并有先兆偏头痛患者血清中的表达及其与焦虑状况的关联性。方法 选取2022年7月至2023年7月吉林省一汽总医院收治的214例检查存在RLS的有先兆偏头痛患者,记作RLS偏头痛组,50例检查无RLS的有先兆偏头痛患者作为对照组,比较两组血清β-EP、COX-2、DRD2水平及焦虑自评量表(SAS)评分。另将RLS偏头痛组患者根据检查结果分为少、中、大量RLS偏头痛组(78例),分别为90、46、78例,比较三组血清β-EP、COX-2、DRD2水平及SAS评分。采用Spearman相关系数分析RLS偏头痛组患者血清β-EP、COX-2、DRD2水平与RLS分级、SAS评分的关系。结果 RLS偏头痛组血清β-EP、DRD2水平均低于对照组,COX-2水平及SAS评分高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。中、大量RLS偏头痛组血清β-EP、DRD2水平低于少量RLS偏头痛组,大量RLS偏头痛组低于中量RLS偏头痛组,差异有统计学意义(P<0.05)。中、大量RLS偏头痛组血清COX-2水平、SAS评分高于少量RLS偏头痛组,大量RLS偏头痛组高于中量RLS偏头痛组,差异有统计学意义(P<0.05)。相关性分析结果显示,RLS偏头痛组患者血清β-EP、DRD2水平与RLS分级、SAS评分呈负相关(rs<0,P<0.05),血清COX-2水平与RLS分级、SAS评分呈正相关(rs>0,P<0.05)。结论 随着RLS合并有先兆偏头痛患者RLS分级的升高,其血清β-EP、DRD2表达降低,COX-2表达升高,且三者均与患者的焦虑状态密切相关。

环氧合酶-2、前列腺素E2在前列腺癌组织和细胞中的表达及与细胞生物学行为的关系

目的探究环氧合酶-2(COX-2)、前列腺素E2(PGE2)在前列腺癌组织、PC-3细胞中的表达及与PC-3细胞生物学行为的关系。方法选取2021年1月至2023年1月在长江航运总医院进行手术切除治疗的81例前列腺癌患者作为研究对象,收集其癌组织及癌旁组织。采用免疫组织化学染色法检测组织标本COX-2、PGE2蛋白阳性表达;分析癌组织COX-2、PGE2蛋白表达与临床病理特征的关系。体外培养前列腺癌PC-3细胞和正常前列腺上皮细胞RWPE-1,将PC-3细胞随机分为PC-3组、siRNA-NC组、siRNA-COX-2组,RWPE-1细胞常规培养设为RWPE-1组。检测PC-3、RWPE-1细胞COX-2 mRNA、PGE2水平和PC-3细胞活力、凋亡情况、迁移数目。结果与癌旁组织比较,前列腺癌组织中COX-2、PGE2蛋白阳性表达率显著升高(P<0.05);有淋巴结转移、TNMⅢ期、前列腺特异性抗原(PSA)≥10 ng/mL患者前列腺癌组织中COX-2、PGE2蛋白阳性比例分别高于无淋巴结转移、TNMⅠ~Ⅱ期、PSA<10 ng/mL患者(P<0.05);与RWPE-1组比较,PC-3组PC-3细胞COX-2 mRNA、PGE2水平显著升高(P<0.05);与PC-3组、siRNA-NC组比较,siRNA-COX-2组PC-3细胞COX-2 mRNA、PGE2水平、细胞活力、迁移数目显著降低,凋亡数目显著升高(P<0.05)。结论前列腺癌组织和PC-3细胞中COX-2、PGE2呈高表达,沉默COX-2表达可降低PGE2水平从而抑制前列腺癌PC-3细胞活力和迁移能力,促进PC-3细胞凋亡。

灯盏乙素通过环状GMP-AMP合酶-干扰素基因刺激因子通路抑制BV-2小胶质细胞介导的神经炎症

目的探讨灯盏乙素对脂多糖(LPS)诱导的BV-2小胶质细胞神经炎症的影响。方法培养BV-2小胶质细胞系,将BV-2小胶质细胞分为对照组(Ctrl)、环状GMP-AMP合酶(cGAS)抑制剂RU320521(RU.521)组、LPS组、LPS+RU.521组、LPS+灯盏乙素预处理(LPS+S)组、LPS+S+RU.521组,共6组。Western blotting及免疫荧光双标染色法检测并观察BV-2小胶质细胞中cGAS、干扰素基因刺激因子(STING)、核因子κB(NF-κB)、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)、PYD结构域蛋白3(NLRP3)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达变化(n=3)。结果Western blotting和免疫荧光双标染色均显示,与对照组相比,LPS诱导后,BV-2小胶质细胞中cGAS、STING、p-NF-κB、NLRP3和TNF-α蛋白的表达水平显著升高(P<0.05);与LPS组相比,LPS+S组中cGAS、STING、p-NF-κB、NLRP3和TNF-α蛋白的表达水平显著下降(P<0.05)。使用cGAS通路抑制剂RU.521后显示了与灯盏乙素预处理组相似的作用效果。此外,NF-κB在各组的变化不明显(P>0.05)。结论灯盏乙素干预抑制BV-2小胶质细胞介导的神经炎症反应,可能与cGAS-STING信号通路有关。

大肠息肉中医证型与胃幽门螺杆菌感染、血清胃泌素-17及环氧合酶-2相关性研究

目的:探讨大肠息肉中医证型分布与幽门螺杆菌(Hp)感染及血清胃泌素-17(G-17)、环氧合酶-2(COX-2)表达的相关性。方法:选取2020年1月至2023年3月本院收治的124例大肠息肉患者为研究对象,观察Hp感染情况,比较各证型的分布特点,并分析其与血清G-17及COX-2的相关性。结果:Hp阳性组血清G-17、COX-2水平均高于Hp阴性组(P<0.05),具有统计学意义。中医各证型分布比例从高到低依次为脾虚湿阻证、肠道湿热证、脾虚夹瘀证、气滞血瘀证、中脏虚寒证,其中肠道湿热组Hp感染率最高。Hp阳性各证型间血清G-17、COX-2水平比较,肠道湿热组最高,高于脾虚湿阻组、脾虚夹瘀组、气滞血瘀组及中脏虚寒组,但各证型组比较无统计学意义(P>0.05)。结论:大肠息肉中医证型以肠道湿热证多见,其中Hp阳性导致血清G-17及COX-2的水平增高,诱导大肠息肉发生。

人5-脂氧合酶重组蛋白的纯化及其多克隆抗体的制备

目的:原核表达并纯化人5-脂氧合酶(5LO)△112蛋白,将其免疫新西兰大白兔制备5-LO多克隆抗体。方法:使用DNAMAN设计重组引物,PCR扩增N端缺失112个氨基酸的5-LO截短DNA片段,将其重组到KpnⅠ和EcoRⅠ酶切的pET30a(+)质粒中,重组质粒pET30a-5LO△112转化大肠杆菌Rosetta(DE3),培养至OD_(600)为0.4时加入IPTG以诱导5LO△112重组蛋白表达,目的蛋白经纯化后免疫新西兰大白兔制备其多克隆抗体。结果:使用BugBuster蛋白提取试剂裂解细菌并获得纯度较高的包涵体,包涵体用含6mol/L盐酸胍的溶液变性溶解,再经Ni-NTA agarose亲和纯化得到高纯度的5LO△112重组蛋白。用该蛋白免疫新西兰大白兔获得5-LO的特异性抗体,该抗体的效价为1∶51200。结论:使用6mol/L盐酸胍溶解包涵体蛋白结合Ni-NTA agarose亲和纯化的方法成功获得了纯度较高的5LO△112重组蛋白,并用此蛋白制备了高效价的多克隆抗体。

广西汉族老年缺血性脑梗死患者胱硫醚β-合酶（CBS）基因C770T突变频率观察

目的初步探索胱硫醚争合酶（CBS）基因C770T突变在广西汉族老年缺血性脑梗死发病中的作用。方法用扩增阻滞突变体系法检测61例广西汉族老年缺血性脑梗死患者（病例组）及30例正常老年人（对照组）CBSC770T基因型；采用酶联免疫分析法检测血浆Hcy。结果CBSC770T产生C／C和C／T两种基因型，病例组C／C及C／T型频率分别为45．90％及54．10％，C，T等位基因频率分别为72．95％及27．05％；对照组上述基因型及等位基因频率分别为60％，40％，80％和20％。卡方检验结果显示，两组之间基因型频率以及等位基因频率差异均无统计学显著性意义（矿分别为1．60，1．07，P均〉0．05）；病例组血浆Hcy浓度为（21．82±3．92）umol／L，其中C／C型为（19．29±4．19）umol／L，C／T型为（24．36±4．25）umol／L，对照组血浆Hcy为（13．15±2．11）umol／L，其中C／C型和C／T型分别为（12．71±2．31）umol／L和（13．59±1．91）umol／L，经配对t检验，血浆Hcy在两组之间以及各基因型之间差异均有统计学显著性意义（c值分别为4．79，3．45和4．60，均P〈0．05）。结论CBSC770T基因突变对广西汉族老年缺血性脑梗死发病的作用可能非常有限，该基因位点突变可能不足以构成广西汉族老年缺血性脑梗死发病的独立遗传风险因素。

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨MEBT/MEBO促进慢性难愈合创面愈合的机制

目的 探讨皮肤再生医疗技术/湿润烧伤膏(MEBT/MEBO)影响Wnt/β-catenin信号通路中糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)、Wnt3a表达以促进慢性难愈合创面修复的机制。方法将60只Wistar雄性大鼠随机分为空白组、急性创面组、慢性难愈合创面组、MEBT/MEBO组、贝复济组,每组12只。空白组大鼠不进行损伤性处理;其余组大鼠均在统一部位进行全层皮肤切除建立创面,之后慢性难愈合创面组、MEBT/MEBO组、贝复济组大鼠注射醋酸氢化可的松建立慢性难愈合创面。然后每天进行2次清创换药,MEBT/MEBO组、贝复新组创面分别外敷2层创面大小的MEBO纱条、贝复新浸透纱布,其余组外敷2层创面大小的生理盐水纱布,最后覆盖2层消毒的干纱布。统计各组大鼠换药第3,7,14天的创面愈合率,分别采用RT-PCR和Western blot法检测各组大鼠换药第3,7,14天创面组织中GSK-3β、Wnt3a mRNA和蛋白表达情况,免疫组化染色观察慢性难愈合创面组和MEBT/MEBO组换药第14天创面组织中GSK-3β、Wnt3a阳性表达情况。结果 急性创面组、MEBT/MEBO组、贝复新组各时间点的创面愈合率均明显高于慢性难愈合创面组(P均<0.05);MEBT/MEBO组、贝复新组换药第7天的创面愈合率和MEBT/MEBO组换药第14天的创面愈合率均明显高于急性创面组(P均<0.05)。换药第3天,MEBT/MEBO组和贝复新组创面组织中GSK-3β mRNA和蛋白相对表达量均明显低于慢性难愈合创面组(P均<0.05);换药第7天,MEBT/MEBO组、贝复新组GSK-3β mRNA和蛋白相对表达量与慢性难愈合创面组比较差异均无统计学意义(P均>0.05);换药第14天,MEBT/MEBO组和贝复新组GSK-3β mRNA和蛋白相对表达量均明显高于慢性难愈合创面组(P均<0.05)。换药第3,7天,MEBT/MEBO组、贝复新组Wnt3a mRNA和蛋白相对表达量均明显高于慢性难愈合创面组(P均<0.05);换药第14天,MEBT/MEBO组、贝复新组Wnt3a mRNA和蛋白相对表达量均明显低于慢性难愈合创面组(P均<0.05)。换药第14天,MEBT/MEBO组的细胞形态较完整,存在较多新生血管,GSK-3β蛋白表达分布多于慢性难愈合创面组,Wnt3a蛋白表达分布少于慢性难愈合创面组。结论 MEBT/MEBO可能通过参与调节Wnt/β-catenin信号通路中GSK-3β、Wnt3a表达,从而促进创面愈合。

SGLT-2抑制剂通过Nrf2/HO-1信号通路对2型糖尿病合并高血压大鼠动脉重构的干预作用

目的探究钠-葡萄糖协同转运蛋白(SGLT)-2抑制剂通过核因子-E2相关因子(Nrf)2/血红素氧合酶(HO)-1信号通路对2型糖尿病合并高血压大鼠基底动脉重构的干预作用。方法用自发性高血压大鼠(SHR)高糖高脂饮食联合链脲佐菌素(STZ)建立2型糖尿病合并高血压大鼠模型,造模成功后分为对照组、模型组和试验组各15只,实验组采用1 mg/(kg·d)达格列净灌胃,模型组和对照组给予等量生理盐水灌胃。8 w后血糖仪检测各组血糖水平,苏木素-伊红(HE)染色检测各组基底动脉病理情况,免疫荧光法检测基底动脉核增殖指数(Ki67)表达水平,Western印迹检测点各组基底动脉Nrf2和HO-1蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组血糖显著升高,基底动脉动脉血管壁厚管腔内径管腔外径和中膜面积均明显增加,Ki67表达显著增加,基底动脉平滑肌细胞排列紊乱,出现线粒体空泡化等现象,Nrf2及HO-1表达水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,试验组血糖水平下降,基底动脉动脉血管壁厚管腔内径管腔外径和中膜面积均明显降低,Ki67表达水平显著降低,超微结构病理学结构有所好转,Nrf2及HO-1表达水平显著上升(P<0.05)。结论SGLT-2抑制剂可以对2型糖尿病合并高血压大鼠基底动脉重构发挥干预作用,其机制可能与Nrf2/HO-1信号通路的调控相关。

番茄红素β-环化酶和新黄质合酶功能差异关键氨基酸的发掘

酶是天然存在的高效催化剂,长期的进化过程产生了诸多的同源酶,同源酶的序列相似高却有不同的功能,而导致功能差异的原因也倍受关注。类胡萝卜素合成过程中,番茄红素β-环化酶(lycopene β-cyclase,LCYB)和新黄质合酶(neoxanthin synthase,NSY)序列高度相似但对番茄红素的环化功能不同,且并未有研究报道导致环化差异的原因。因此该研究选用氨基酸序列相似性为88.2%的枸杞来源LyLCYB和番茄来源SoNSY为研究对象,通过将基因soNSY的片段替换为lyLCYB对应位置的片段构建不同的嵌合体基因,并且利用定点突变策略构建差异位点的点突变蛋白,将改造后的基因在大肠杆菌中异源表达,测定其番茄红素环化活性。最终发现了219位点是导致LyLCYB和SoNSY番茄红素β-环化功能差异的关键氨基酸,为进一步探究影响其他来源的LCYB和NSY功能差异提供了理论支持。

如意金黄软膏联合秋水仙碱治疗痛风性膝关节炎效果及对COX-2、DKK-1和关节功能的影响

目的:探讨如意金黄软膏联合秋水仙碱治疗痛风性膝关节炎的效果及对环氧合酶-2(COX-2)、Dickkopf-1(DKK-1)和关节功能的影响。方法:选取本院收治的符合相关标准的痛风性膝关节炎105例,随机分成两组,对照组52例,观察组53例。对照组给予秋水仙碱治疗,观察组在对照组的基础上加用如意金黄软膏治疗。比较两组临床疗效、COX-2、DKK-1、膝关节功能[采用奎森功能演算指数(Lequesne)进行评价]、运动功能[采用Fugl-Meyer运动功能评定量表(FMA)进行评价]、关节症状评分变化情况及不良反应发生情况。结果:治疗后,观察组总有效率高于对照组(P<0.05);两组COX-2、DKK-1均较治疗前降低,且观察组降低更显著(P<0.05);两组Lequesne、滑膜厚度均较治疗前降低,且观察组降低更显著(P<0.05),FMA评分均较治疗前升高,且观察组高于对照组(P<0.05);两组关节症状评分均较治疗前降低,且观察组降低更显著(P<0.05)。结论:如意金黄软膏联合秋水仙碱治疗痛风性膝关节炎有一定的效果,可能与有效改善患者COX-2、DKK-1及关节功能水平有关。