一氧化氮对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞硫化氢/胱硫醚-γ-裂解酶的调节作用

目的研究一氧化氮(NO)对自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞硫化氢(H2S)/胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)的调节作用。方法大鼠主动脉平滑肌细胞分为硝普钠(SNP)实验组和对照组,硫电极法测定培养上清中H2S含量,竞争性RT-PCR法检测细胞中CSE mRNA水平。结果SNP实验组较对照组培养上清H2S含量显著升高[(16.16±3.71)μmol/Lvs(22.71±4.84)μmol/L],但CSE mRNA的水平在SNP组较对照组明显降低[(0.16±0.06)vs(0.12±0.04)]。结论SNP对SHR血管平滑肌细胞中H2S/CSE体系发挥复杂的调节作用。

氧化应激通过抑制胱硫醚-γ-裂解酶介导阿霉素的心肌毒性

目的探讨氧化应激是否通过抑制胱硫醚-γ-裂解酶的表达及活性介导阿霉素的心肌毒性。方法应用阿霉素处理大鼠胚胎H9c2心肌细胞以建立阿霉素心肌毒性的细胞模型。在阿霉素处理前60 min用活性氧清除剂N-乙酰半胱氨酸预处理H9c2心肌细胞以观察氧化应激在阿霉素心肌细胞损伤中的作用。应用CCK-8检测心肌细胞存活率;双氯荧光素酶染色及荧光显微镜照相术检测细胞内活性氧水平;Western blot检测胱硫醚-γ-裂解酶的表达;亚甲基蓝显色法检测胱硫醚-γ-裂解酶活性。结果 5μmol/L阿霉素处理H9c2细胞24 h引起明显的心肌毒性,使细胞存活率降低。阿霉素在促进细胞内活性氧生成的同时,还抑制胱硫醚-γ-裂解酶的表达及活性。N-乙酰半胱氨酸不仅抑制阿霉素对活性氧生成的促进作用,还减弱阿霉素的心肌毒性,并能阻断阿霉素对H9c2心肌细胞胱硫醚-γ-裂解酶表达及活性的抑制作用。结论活性氧可通过抑制心肌细胞胱硫醚-γ-裂解酶的表达及活性介导阿霉素的心肌毒性。

胱硫醚-γ-裂解酶和胱硫醚-β-合成酶在高血压大鼠阴茎海绵体中的表达

目的:探讨高血压对大鼠阴茎海绵体组织胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)和胱硫醚-β-合成酶(CBS)表达的影响及与大鼠勃起功能的关系。方法:健康雄性SPF级自发性高血压大鼠(SHR)与对照组WKY(Wistar-Kyoto)大鼠各10只,于12周龄时测定大鼠血清睾酮、阴茎海绵体内压/平均动脉压(ICP/MAP)、血浆和阴茎海绵体内源性H2S的含量,采用免疫组化和Western印迹分析CSE和CBS在阴茎海绵体内的表达。结果:SHR与WKY大鼠的血清睾酮值没有显著差别,SHR的ICP/MAP在0、3和5 V电刺激盆腔神经节(MPG)时均显著低于WKY组(n=10,P<0.05)。SHR血浆H2S含量显著低于WKY大鼠[(10.49±1.35)μmol/Lvs(21.92±2.75)μmol/L,P<0.05],SHR阴茎海绵体组织内源性H2S含量显著低于WKY大鼠[(52.60±3.44)nmol/mg prot vs(87.67±2.12)nmol/mg prot,P<0.05],SHR阴茎海绵体组织内源性H2S生成率也较WKY大鼠显著降低[(1.14±0.07)nmol/(mg·min)vs(4.35±0.32)nmol/(mg·min),P<0.05]。CSE及CBS主要表达在SHR和WKY大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞和血管内皮细胞的胞质,SHR的CSE及CBS蛋白表达量均显著低于WKY大鼠(P<0.05)。ICP/MAP与CSE和CBS表达呈高度正相关(r=0.955、0.977,P均<0.05)。结论:高血压大鼠阴茎海绵体组织中CBS和CSE的表达下降,导致阴茎海绵体内H2S合成减少,可能是高血压引起勃起功能下降的机制之一。

急性肝损伤大鼠肝组织中胱硫醚-γ-裂解酶动态变化及意义

取24只SD大鼠腹腔注射氨基半乳糖建立急性肝损伤模型,分别于注射药物后24、48、72和96 h各处死动物6只,取血,留取肝脏标本,观察肝脏形态学和功能变化,并检测肝脏组织胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)水平。结果肝组织中CSE含量在肝损伤后逐渐升高,72 h达到峰值,96 h开始减少,其变化趋势与肝脏功能变化基本一致。认为肝组织中CSE含量变化可能与肝炎的发生、发展有关。

硫化氢、同型半胱氨酸和环格列酮对胱硫醚-γ-裂解酶基因及蛋白表达的影响

目的:探讨硫化氢、同型半胱氨酸及环格列酮对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)内胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)基因及其蛋白表达的影响。方法:应用不同浓度的硫氢化钠(300、1 000μmol/L)、同型半胱氨酸(10、100、1 000μmol/L)及环格列酮(10、100μmol/L)作用于HUVEC,48 h后提取细胞总RNA,应用荧光定量PCR(realtime fluores-cence quantitative PCR,RTFQ PCR)及蛋白质印迹技术(Western blot)检测CSE基因和蛋白表达的变化。结果:硫氢化钠在生理浓度(300μmol/L)时可增加HUVEC CSE基因及蛋白的表达(P<0.05)。高浓度同型半胱氨酸引起HUVEC CSE基因及蛋白表达减弱(P<0.05)。环格列酮适宜浓度(10μmol/L)时也可增加HUVEC CSE基因及蛋白的表达(P<0.05)。结论:高浓度同型半胱氨酸对细胞水平上CSE的转录与翻译有抑制作用。从基因水平和蛋白质水平检测发现硫化氢和环格列酮可以调节CSE的转录与翻译,并可逆转高浓度同型半胱氨酸对CSE的作用。

糖尿病大鼠肾脏胱硫醚-β-合成酶和胱硫醚-γ-裂解酶mRNA表达初步研究(英文)

目的研究糖尿病大鼠肾脏内源性硫化氢(H2S)的两种合成酶胱硫醚-β-合成酶ystathionine-β-synthase CBS)和胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase CSE)mRNA表达。方法用腹腔注射链脲佐菌素诱发糖尿病模型,大鼠随机分为两组:正常对照组(C组)和糖尿病组(D组)。建模第8周,测定24h尿蛋白、血糖及肌酐清除率[1],应用RT-PCR技术检测大鼠肾皮质CBS、CSE mRNA表。结果糖尿病组大鼠尿蛋白、血糖及肌酐清除率均较正常对照组明显升高(P<0.05),但肾皮质CBS、E mRNA表达较正常对照组无显著性差异(P>0.05)。结论CBS、CSE/H2S系统不能通过两种合成酶NA水平的改变而参与糖尿病肾病中血流动力学紊乱发生,其作用通路中的其他环节改变是否参与糖尿病病的发生发展尚需进一步证实。

游泳运动后自发性高血压大鼠主动脉一氧化氮的变化及其对胱硫醚-γ-裂解酶/硫化氧体系的影响

目的:观察运动对自发性高血压大鼠(SHR)主动脉一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮(NO)、胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)和硫化氢(H_2S)的影响,探讨运动干预后SHR大鼠内源性NO的变化对主动脉CSE/H_2S体系的调节作用。方法:选用雄性SHR大鼠16只,随机分为高血压对照组(SC组)和高血压运动组(ST组),每组8只。同时选用雄性Wistar大鼠8只,为正常对照组(WC组)。ST组大鼠进行8周、每周6次、每次90min中等强度的无负重游泳运动。结果:8周90min游泳运动后,SC组大鼠血压较实验前显著升高(P<0.01),ST组大鼠血压较SC组大鼠血压显著下降(P<0.01),且与实验前相比无显著性差异(P>0.05);ST组大鼠较SC组大鼠主动脉NOS、NO、CSE和H_2S水平显著升高(P<0.05)。结论:运动可抑制SHR的血压上升,增加SHR主动脉NOS和NO的含量,内源性NO对SHR主动脉CSE/H_2S体系在运动缓解血压上升中呈促进作用,这一过程参与了运动降压的调控机制。

NO前体对高肺血流时肺动脉胱硫醚-γ-裂解酶基因表达的调节作用

目的:研究一氧化氮(NO)前体L-精氨酸(L-Arg)对高肺血流时肺动脉胱硫醚-γ-裂解酶(内源性硫化氢生成酶)的调节作用,以探讨NO体系对高肺血流肺动脉高压及肺血管结构重建调节作用的机制。方法:30只雄性SD大鼠随机分为对照组,分流组和分流+L-Arg组。对后两组大鼠行腹主动脉-下腔静脉分流术。观察术后11周大鼠肺动脉平均压(mPAP)、右心室肥厚和肺动脉相对中膜面积的改变,用竞争逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对肺组织CSEmRNA表达进行定量分析,同时用化学法测定肺组织硫化氢产出率。结果:分流组大鼠mPAP及肺动脉相对中膜面积明显高于对照组(P<0.01),而分流+L-Arg组大鼠mPAP及肺动脉相对中膜面积明显低于分流组(P<0.01)。分流组CSEmRNA表达与对照组相比明显降低(P<0.01),而分流组+L-Arg组CSEmRNA表达又明显高于分流组(P<0.05);分流组大鼠肺组织硫化氢产出率明显低于对照组(P<0.01),而分流组+L-Arg组大鼠肺组织硫化氢产出率及血浆硫化氢含量明显高于分流组(P<0.01)。结论:高肺血流可致肺动脉CSEmRNA下调,外源性NO能够缓解CSEmRNA的改变,从而对高肺血流所致肺血管结构重建和肺动脉高压起调节作用。

硫化氢/胱硫醚-γ-裂解酶在胆管梗阻致急性胆囊炎中的表达

目的探讨硫化氢/胱硫醚-γ-裂解酶(H2S/CSE)体系在胆管梗阻致急性非结石性胆囊炎(AAC)中的表达。方法健康成年豚鼠30只,胆总管结扎(BDL)方法构建豚鼠AAC模型。随机分为3组,即正常组、假手术对照(Sham)组和胆总管结扎48 h(BDL-48 h)组。HE染色后光镜下观察各组胆囊病理改变;检测胆囊组织中CSE活性;免疫组化SP法观察各组胆囊组织中CSE的表达;免疫印迹法分析各组胆囊CSE的表达水平。结果正常组和Sham组未见明显炎症反应,与正常组、Sham组相比,BDL-48 h组胆囊组织病理学评分差异有统计学意义(P<0.05)。各组胆囊组织中CSE呈阳性表达,而BDL-48 h组的CSE活性、CSE蛋白表达均较正常组和Sham组显著增高(P<0.05)。结论胆囊组织存在CSE,H2S/CSE体系可能参与了AAC的病理过程。

胱硫醚-γ-裂解酶在三种微血管内皮细胞上的表达

目的鉴定微血管内皮细胞上是否表达生成硫化氢(H2S)的酶,为深入研究硫化氢的心血管作用提供新线索。方法原代培养大鼠心脏微血管内皮细胞(CMEC),设计相应引物后用RT-PCR的方法检测胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)和胱硫醚-β-合成酶(CBS)基因转录情况,进一步用兔抗大鼠CSE和CBS多克隆抗体对CMEC进行蛋白水平的免疫荧光染色。此外对另两种微血管内皮细胞株RF/6A和bEnd.3也检测了H2S生成酶的表达。结果三种微血管内皮细胞都扩增出CSE基因的特异条带,而CBS基因都未扩增出相应产物。CMEC的免疫荧光染色显示CSE抗体染色为阳性,CBS抗体染色为阴性。结论首次发现了微血管内皮细胞上存在CSE的表达,提示内皮细胞可以通过生成硫化氢调节心血管活动。

胱硫醚-γ-裂解酶在过敏性休克小鼠肺组织中的表达

目的:探讨过敏性休克小鼠肺组织中胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)的表达。方法:取健康昆明种小鼠36只,随机分为过敏性休克模型组和磷酸盐缓冲液(PBS)对照组,每组再分为死亡即时组、冷冻48 h组和冷冻7 d组,每组6只,模型组通过注射卵蛋白(OVA)制作过敏性休克模型,致敏第3周诱发过敏性休克致死或颈椎脱臼处死动物。对照组采用PBS代替OVA,第3周与模型组小鼠一并处死。各组小鼠分别在3个时间点取肺组织,福尔马林固定,制作石蜡切片,并行免疫组织化学染色检查观察CSE在肺组织中的表达情况。结果:模型组各时间点肺组织中见胱硫醚-γ-裂解酶主要表达在肺泡上皮细胞胞浆,对照组肺泡上皮细胞呈弱阳性。结论:过敏性休克小鼠肺组织中有胱硫醚-γ-裂解酶表达,死后冷冻7 d之内,肺组织中胱硫醚-γ-裂解酶表达随着时间的延长呈下降趋势,应用免疫组化染色检查肺组织中胱硫醚-γ-裂解酶的表达可为过敏性休克死亡提供一定的法医病理学诊断依据。

胱硫醚-γ-裂解酶在大鼠耳蜗的分布及其在噪声刺激后的表达变化

目的探讨大鼠耳蜗胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)的分布情况及在噪声刺激后的表达变化。方法通过免疫组织化学及免疫荧光染色技术,观察CSE在正常成年SD大鼠耳蜗内的分布及定位。32只SD大鼠被分成4组:正常对照组、1天组、1周组、3周组,后3组分别暴露于110dBSPL宽带白噪声中。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测大鼠接受强噪声刺激前后CSE在耳蜗内的表达变化。结果CSE主要表达在大鼠耳蜗的血管纹,螺旋突,以及耳蜗微小血管处;在耳蜗内外毛细胞、各类支持细胞、盖膜及蜗神经节处未见明显表达。随着噪声刺激时间的延长,CSE在mRNA水平的表达呈先增长后下降的趋势。结论CSE在耳蜗内的分布及其在噪声刺激后的表达变化,提示其在改善耳蜗血循环方面可能发挥重要作用。

高原藏羚羊胱硫醚-γ-裂解酶基因克隆与全序列测定

目的探讨克隆高原藏羚羊胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)基因编码区并检测其在成年高原藏羚羊组织中的表达,同时探讨高原藏羚羊低氧适应的分子生物学机制。方法从高原藏羚羊组织中提取总RNA,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)获得高原藏羚羊cDNA,并进行鉴定和测序。结果将含有目的片段克隆后经测序和Blast分析,结果显示其部分编码序列与GenBank中牛CSE蛋白基因序列同源性96.47%,表明本实验所克隆的序列为CSE蛋白基因。根据已知人、褐家鼠、小鼠、野猪、食蟹猴、家牛CSEcDNA序列和Pnaman软件设计高原藏羚羊cse基因的引物。结论 CSE mRNA可能在高原藏羚羊机体较为广泛的区域中发挥着作用,同时为高原低氧适应相关基因的研究提供了实验依据。

高原肺动脉高压大鼠硫化氢/胱硫醚-γ-裂解酶体系的变化

目的探讨气体信号分子H2S及其生成酶胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)在大鼠高原性肺动脉高压形成中的作用及其动态变化规律。方法60只雄性Wister大鼠,随机抽取10只大鼠作为低海拔对照组,其余50只为高原组。高原组大鼠在到达海拔4617m的第1、3、7、15、30d不同时间采集血浆及肺组织标本,采用右心导管法测定肺动脉压、敏感硫电极法测定血浆H2S浓度、酶促反应法测定肺组织CSE转化率、Western blot方法检测CSE在蛋白中的表达。结果大鼠第1d到达高原时,各项观察指标无明显变化;到达高原第3d时肺动脉压(18.12±3.34mmHg)无明显变化,而血浆H2S和CSE转化率明显增高;大鼠在高原7d时可形成肺动脉高压[(30.31±4.05)mmHg];随着高原低压低氧和大鼠肺动脉高压的持续,血浆H2S浓度、肺组织CSE转化率及蛋白表达逐渐下降,15d组和30d组与其他各组比较差异均有统计学意义。结论在高原暴露早期,内源性H2S/CSE体系上调而肺动脉压不增高,而在后期H2S/CSE体系下调且肺动脉压增高,提示内源性H2S体系可能与高原性肺动脉高压形成有关,并起着保护作用。

硫化氢／胱硫醚-γ-裂解酶系统在肺缺血／再灌注损伤中的作用

目的探讨硫化氢／胱硫醚-γ-裂解酶（H2S／CSE）系统在肺缺血／再灌注损伤（LIRI）中的作用。方法将40只SD大鼠随机均分成假手术组、LIRI组、NaHS组、炔丙基甘氨酸（PPG）组4组。制备在体大鼠单肺原位LIRI模型。NaHS组和PPG组分别于制模前腹腔注射NaHS 28μmol／kg或PPG30mg／kg；假手术组和LIRI组给予生理盐水0．5ml。实验结束后取血，检测血浆H2S浓度、超氧化物歧化酶（SOD）、髓过氧化物酶（MPO）活性和丙二醛（MDA）含量；检测肺组织H2S含量、CSE活性和CSE mRNA表达水平；计算肺系数及肺泡损伤率（IAR）；并观察肺组织病理改变。结果与假手术组比较，LIRI组血浆和肺组织H2S水平、肺组织CSE活性和CSE mRNA表达均降低（均P〈0．01），血浆SOD降低，MDA、MPO升高（均P〈0．01）；肺系数、IAR增高（均P〈0．01）；同时LIRI组肺组织有明显的病理改变。与LIRI组比较，预先给予NaHS组血浆和肺组织H2S水平、肺组织CSE活性和CSE mRNA表达均升高（均P〈0．01），血浆SOD升高，MDA、MPO降低（均P〈0．01），肺系数、IAR降低（均P〈0．01）；同时肺组织病理改变减轻。而预先给予PPG组则相反，可加重LIRI所致的肺损伤（P〈0．05或P〈0．01）。结论H2S／CSE系统功能下调参与LIRI的病理过程，预先给予NaHS对肺组织有保护作用。

胱硫醚-γ-裂解酶在过敏性休克死亡小鼠心肌组织中的死后变化

目的:探讨胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)在过敏性休克小鼠心肌组织中的表达和意义。方法:通过注射卵蛋白(OVA)制作小鼠过敏性休克模型。将昆明种小鼠60只随机分为4组,即:PBS对照组、OVA模型组、OVA模型+炔丙基甘氨酸(PPG)组、OVA模型+硫氢化钠(NaHS)组。各组小鼠致敏第3周诱发过敏性休克致死,未死亡小鼠1 h后颈椎脱臼处死动物。分别于死亡后即时(T1)、死亡后冷冻2 d(T2)和冷冻7 d(T3)三个时间点取心肌组织行免疫组织化学染色检测心肌组织CSE蛋白的表达。结果:对照组小鼠心肌组织中CSE呈弱阳性表达,OVA诱导的过敏性休克模型心肌组织中CSE呈阳性表达。给予外源性NaHS后CSE在心肌组织中表达增强,而给予H2S抑制剂PPG后,CSE在心肌组织中表达减弱较为明显。各组小鼠心肌组织在T1、T2、T3三个时间点CSE的表达变化不明显。结论:过敏性休克小鼠心肌细胞中CSE的表达增强,应用免疫组化染色检查心肌组织中CSE的表达可为过敏性休克死亡的法医学鉴定提供形态学参考指标。

烟草烟雾对大鼠胸主动脉硫化氢/胱硫醚-γ-裂解酶体系的影响

目的探讨烟草烟雾对大鼠胸主动脉硫化氢(H2S)/胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)体系的影响。方法以10周龄SD大鼠为研究对象,随机分为对照组、短期吸烟组、中期吸烟组和长期吸烟组。采用烟草烟雾熏吸方法建立被动吸烟大鼠模型,采用敏感硫电极法测定血清中H2S浓度,采用免疫组织化学染色和显微图像定量分析法观察胸主动脉平滑肌CSE的表达。结果短期吸烟组血清H2S浓度与对照组比较无统计学差异(P>0.05),长期吸烟组、中期吸烟组血清H2S浓度明显低于对照组和短期吸烟组(P<0.01),长期吸烟组血清H2S浓度明显低于中期吸烟组(P<0.05),H2S浓度随着烟草烟雾熏吸时间的延长而降低,并呈时间依赖性。短期吸烟组胸主动脉CSE面积密度和光密度与对照组比较无统计学差异(P>0.05),长期吸烟组、中期吸烟组胸主动脉CSE面积密度和光密度明显低于对照组和短期吸烟组(P<0.05),长期吸烟组胸主动脉CSE面积密度和光密度明显低于中期吸烟组(P<0.05),CSE的表达随着烟草烟雾熏吸时间的延长而降低,并呈时间依赖性。结论烟草烟雾可显著下调大鼠血清H2S的浓度及胸主动脉中CSE的表达。

心脏横纹肌中胱硫醚-γ-裂解酶的表达及意义

目的探讨心脏横纹肌中胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)的表达及意义。方法以SD大鼠心肌为研究对象,采用免疫组化SP法观察心脏横纹肌中CSE的表达,棕褐色为阳性表达。结果心脏横纹肌组织中无CSE阳性表达,心脏血管组织中有CSE阳性表达。结论心脏横纹肌不含有CSE。在心血管系统中起重要调节作用的硫化氢不在心脏横纹肌中代谢生成,主要由外源途径生成。

哮喘大鼠硫化氢含量与胱硫醚-γ-裂解酶mRNA表达的实验性研究

目的:观察哮喘大鼠硫化氢(H2S)含量与胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)mRNA的表达,探讨H2S和CSE在哮喘发病机制中的作用。方法:采用哮喘大鼠模型,将30只SD大鼠随机分成哮喘组、正常对照组、地塞米松治疗组,分光光度法测定血浆H2S的含量,RT-PCR法测定肺组织CSE mRNA的表达水平。结果:哮喘组血浆H2S的含量显著低于正常对照组[(61±16vs84±15)μmol/L,P<0.01],地塞米松治疗组[(73±16)μmol/L]与哮喘组和正常对照组相比无统计学差异(均P>0.05)。哮喘组肺组织CSE mRNA的表达水平显著低于正常对照组(0.14±0.02vs0.46±0.05,P<0.01),地塞米松治疗组(0.33±0.04)显著性低于正常对照组但高于哮喘组(P均<0.01)。血浆H2S的含量和肺组织CSE mRNA的表达水平呈显著正相关(n=30,r=0.504,P<0.01)。结论:哮喘大鼠血浆H2S含量与肺组织CSE mRNA的表达水平均下降,它们可能参与了哮喘的炎症过程。地塞米松改善哮喘炎症的机制可能部分通过H2S/CSE体系。

免疫组化定量分析吸烟对大鼠胸主动脉中胱硫醚-γ-裂解酶的影响

目的定量研究烟草烟雾对大鼠胸主动脉的胱硫醚-γ-裂解酶影响。方法 16只10周龄SD大鼠随机分为对照组(正常呼吸条件下饲养)和吸烟组(每天吸烟20支,连续90 d),每组8只。被动吸烟大鼠模型造完后断颈处死,取其近心端胸主动脉于10%的福尔马林固定1～2 d,采用免疫组化染色和显微图像定量分析法,观察大鼠胸主动脉胱硫醚-γ-裂解酶的面积密度和光密度。结果吸烟组的大鼠胸主动脉中胱硫醚-γ-裂解酶的表达面积密度明显低于对照组(6.79±1.04vs.14.98±2.32,P<0.01);其光密度值也明显低于对照组(0.15±0.04 vs.0.21±0.03,P<0.01)。结论吸烟可导致大鼠胸主动脉中的胱硫醚-γ-裂解酶含量降低。