雌二醇单克隆抗体制备及胶体金侧流层析免疫分析方法的建立

目的探讨雌二醇(17β-estradiol,E2)的3号位和17号位引入活性基团制备的半抗原对抗体灵敏度的影响,选用灵敏度较高的抗体建立一种牛奶中E2胶体金侧流层析免疫分析方法(colloidalgold-basedlateral flow immunoassay,CG-LFA)。方法从E2的3号位羟基和17号位羟基引入活性基团分别制备半抗原H1a和H2,偶联载体蛋白制备完全抗原,经过动物免疫和细胞融合筛选,制备单克隆抗体(monoclonal antibodies,mAbs),采用间接竞争酶联免疫吸附实验(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,icELISA)对mAbs性能进行评估,筛选出灵敏度最高的mAb,最后采用静电吸附法将胶体金标记抗体为探针,构建牛奶中E2的CG-LFA。结果制备了H1a-7B7、H1a-7B12、H1a-9C7、H1a-10E7、H2-2E2、H2-3C10、H2-4A10和H2-6D28种mAbs,经过icELISA评估,其半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)分别为0.116、0.207、0.072、0.370、0.442、6.170、0.415和4.411 ng/mL,最终选取H1a-9C7,构建牛奶中E2的LFA,消线(cut-off)值为6.00ng/mL,与苯甲酸雌二醇和雌三醇的交叉反应率分别为101.31%和2.43%,在真实样本加标回收实验中,检测结果与液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)结果一致。结论E2的3号位引入活性基团设计合成的半抗原所制备的E2抗体灵敏度,比17号位引入活性基团制备的抗体灵敏度高,并且建立的LFA准确度良好,为牛奶中E2快速检测提供了一定的技术手段。

不同品牌胶体金免疫层析试纸条/卡检测牛羊布鲁氏菌病的效果分析

为比较不同品牌胶体金免疫层析试纸条/卡(简称试纸条/卡)检测牛羊布鲁氏菌病的效果,利用抗体布鲁氏菌阴阳性血清,对6种品牌试纸条/卡的准确性及灵敏度进行观察比较;同时按不同试纸条/卡操作方法对经虎红平板凝集试验(RBPT)初筛和竞争酶联免疫吸附试验(cELISA)复核的临床牛羊血清样品进行检测比较。结果显示:不同试纸条/卡对布鲁氏菌企业标准阴阳性血清检出率均为100%,其中2种试纸条/卡敏感性高,对不同稀释倍数阳性血清均可检出;试纸条/卡对临床阴性血清均100%检出,但对临床阳性血清样品的检测结果差异较大,其中对羊阳性血清样品的检出率为5.88%~70.59%,对牛阳性血清样品为50.0%~100.0%。结果表明,不同品牌试纸条/卡在布病检测时存在一定差异。建议使用试纸条/卡进行布鲁氏菌病初筛后,应结合国家相关布病诊断技术进行复检,以确保检测结果的准确性。

基于侧流免疫层析技术制备胶体金试纸条检测莲子中黄曲霉毒素B_1的研究

目的基于侧流免疫层析技术制备一种适用于快速检测莲子中黄曲霉毒素B1(AFB1)的试纸条。方法利用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,金颗粒标记单克隆抗体制成金标偶联物作为结合垫,特异性抗原(AFB1-BSA)和羊抗鼠Ig G二抗分别作为检测线和控制线。结果经组装测试,试纸条的灵敏度为2.5ng·m L-1,检测时间在10 min以内。在检测的23份莲子样品中,6份样品有AFB1,阳性样品经UFLC-MS/MS确证,试纸条假阳性和假阴性率为0。结论所制备的试纸条检测快速、操作简便、结果准确,适合大批量莲子中AFB1的现场检测。

侧流胶体金免疫试纸快速测定牛奶中的泰乐菌素

大环内酯类抗生素是非常重要的一类抗菌化合物,而泰乐菌素(tylosin,TYL)是最常用的预混大环内酯类抗生素。但是,这些药物的残留物会在人体中引起过敏反应,并对抗生素产生抗药性。为了评估TYL的残基,需要灵敏的分析方法以确保低浓度下的测定。该文开发了一种快速免疫层析侧流试纸条,用于专门测定牛奶样品中的TYL残留。该文筛选了抗TYL单克隆抗体。抗体滴度为2.56×10^(-5),IC_(50)为4.6091 ng/mL。该测试条由样品垫、共轭垫、包含质控线和线的硝酸纤维素(nitrocellulose membrane,NC)膜以及吸收垫组成。用试纸条测定TYL的不同标准样品(0、2、4、8、16、32、64 ng/mL)。用扫描仪计算出试纸的检出限(limit of detection,LOD)为1.5434 ng/mL,肉眼计算为10 ng/mL,计算其IC_(50)为7.8362 ng/mL,无需特殊设备,测试结果将在20 min内获得。牛奶的平行分析显示从试纸条和HPLC获得的结果相当,试纸与其他兽药无交叉反应。因此,该试纸条非常简便快捷,可作为定量、半定量或定性检测牛奶中TYL残留的筛选方法。

新型胶体金免疫层析试纸条定量分析仪的研制

研制了一种以STM32单片机为运算、控制核心,以颜色识别传感器TCS3200进行数据采集的检测仪。该仪器能够对多种胶体金免疫层析试纸条进行定量分析,实现了试纸条的自动检测、显色度数值分析和数据存储的功能。实验用试纸条测定了浓度为0～25μg/kg的磺胺二甲嘧啶标准溶液,结果显示显色度与浓度线性相关,表明该仪器可对待测样品进行定量分析。

自体荧光基点光谱分析联合免疫胶体金技术在继发性甲旁亢术中识别异位微型旁腺的临床探索

目的研究近红外自体荧光基点光谱分析(near-infrared autofluorescence point-spectral analysis,NIAPSA)联合免疫胶体金技术(immune colloidal gold technique,ICGT)在继发性甲状旁腺功能亢进(secondary hyperparathyroid,SHPT)术中识别异位微型旁腺组织并指导手术切除的效果。方法回顾性分析2021年10月至2022年9月手术治疗的34例SHPT患者的临床资料。术中于双侧颈中央区使用NIAPSA探测分析,结合肉眼辨认后以注射器针头穿刺取洗脱稀释液行ICGT检测。联合检测为阴性者仅全切正常解剖位置腺体,阳性者加行阳性侧颈中央区纤维脂肪组织廓清术。分析联合检测的识别效果、相关生化指标、术后临床症状转归、甲状腺功能与骨代谢情况。结果本组34例手术均成功,其中经NIAPSA联合ICGT检测后行甲状旁腺廓清术(clean parathyroidectomy,CPTX)8例,仅行甲状旁腺全切术(total parathyroidectomy,TPTX)26例;共切除甲状旁腺143枚,其中正常位置134枚(显著增生),异位9枚(4枚轻度增生,5枚未见明显增生)。本组颈中央区纤维脂肪组织内NIAPSA探测阳性共10例12处,联合ICGT识别阳性病例8例共9份样本,联合检测阳性的廓清样本经术后病理证实均为异位旁腺。NIAPSA阳性样本预测值为75.0%,阳性病例预测值为80.0%,NIAPSA联合ICGT阳性预测值为100%。术前、术后1 d、3 d、术后1周及1月、3月、6月甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)、血钙、血磷、钙磷乘积(calcium-phosphorus product,CPP)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)比较均有统计学差异(P<0.001)。PTH、血钙、血磷及CPP术后各时段均较术前明显改善,ALP自术后1周始至术后6月较术前改善(P<0.05)。PTH、血钙和CPP于术后1 d降至最低,血磷于术后1月降至最低,此后逐渐升高趋于正常;ALP自围术期开始向中远期缓慢降低。术后患者关节骨痛、皮肤瘙痒、肌无力症状明显改善,且随着时间的延长,术后各时间段有症状患者持续减少(P<0.001),术后3月及末次随访所有患者症状消失。本组患者术前与术后1月游离三碘甲状腺原氨酸(free triiodothyronine,FT3)、游离甲状腺素(free thyroxine,FT4)、促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)甲状腺功能指标比较均无统计学差异(P>0.05);术后6月N端中段骨钙素(N-terminal mid-fragment of osteocalcin,N-MID)、Ⅰ型前胶原氨基末端前肽(procollagen typeⅠamino-terminal propeptide,P1NP)、β-胶原特殊序列(β-crosslaps,β-CTX)骨代谢功能指标较术前均明显降低(P<0.001)。结论NIAPSA联合ICGT技术识别并指导SHPT术中清除颈中央区增生状态不明确的微型甲状旁腺组织安全有效,术后可有效降低PTH水平,调节钙磷代谢,抑制骨代谢活性,改善临床预后。

胶体金免疫层析试验在梅毒抗体检测中的价值及适用范围研究

目的 通过比较胶体金免疫层析试验(GICA)与酶联免疫吸附试验(ELISA)、光激化学发光法(LICA)、化学发光免疫分析法(CLIA)对梅毒螺旋体抗体检测的性能指标,探寻GICA法在检测梅毒螺旋体抗体的价值以及患者自检的可能。方法 选取2022年2~5月收集的合肥市滨湖医院住院患者、门诊就诊者以及体检者共143人份血清标本,同时采用GICA、LICA、ELISA、CLIA、梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)进行梅毒螺旋体抗体检测。以TPPA结果为金标准,分析GICA与LICA、ELISA、CLIA的灵敏度、特异度、阴性预测值、阳性预测值,并与TPPA比较得出一致性以及符合率;通过绘制出GICA、LICA、ELISA、CLIA的受试者工作特征(ROC)曲线并对曲线下面积进行比较;根据计算所得最佳临界值进行分区,比较不同区间的TPPA符合率与GICA的TPPA符合率大小。结果GICA的特异度与ELISA、LICA比较,差异有统计学意义(P<0.05);GICA的特异度和阳性预测值均高于CLIA,差异有统计学意义(P<0.05)。GICA与TPPA的符合率均高于ELISA、LICA、CLIA,差异有统计学意义(P<0.05)。ELISA和LICA与GICA的符合率均高于CLIA与GICA的符合率,差异有统计学意义(P<0.05)。通过交叉示意图可见,GICA阳性时至少伴有其他2种方法同时阳性。GICA的ROC曲线下面积与ELISA、LICA、CLIA相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。分区后发现ELISA、LICA和CLIA的S/CO值(样本吸光值/临界值)分别在1.00~12.00、1.00~10.00、1.00~4.00时的TPPA符合率与GICA的TPPA符合率存在统计学差异(P<0.05)。结论 GICA作为快速诊断梅毒的重要手段,其各项指标均优于ELISA、LICA、CLIA,还能作为此3种方法初筛梅毒抗体阳性后的复检方法,为日后患者自检模式的实现也提供了可能性。

胶体金免疫层析法快速测定生鲜牛奶中青霉素酶活性关键点分析

青霉素酶能催化水解青霉素类β-内酰环产生青霉噻唑酸,又称β-内酰胺酶。"无抗奶"一直是商家、消费者及检验机构所关注的对象,但很多"无抗奶"并非真的无抗生素残留的牛奶,而是使用青霉素酶等促使牛奶中的抗生素分解,而无法检出牛奶中原有的抗生素。本文对Peni-ase Sensor胶体金免疫层析法试剂盒快速测定生鲜牛奶中青霉素酶的方法进行了研究,并对其关键点进行了分析。

尿HCG测定中放射免疫分析与胶体金层析法的比较

采用胶体金免疫层析测定(GICA)和放射免疫分析法(RIA)对148份育龄妇女随机尿HCG浓度进行测定并对两分析方法进行比较。结果表明:GICA试条对随机尿HCG的检测范围为120～427 570 U/L,灵敏度为120IU/L,当尿HCG浓度大于427570IU/L时,该试条出现带现象;RIA的灵敏度为25IU/L,没有带现象。胶体金免疫层析试条具有操作简单、快速等优点,与放射免疫法相比,存在灵敏度低、带现象和不能定量等问题,在临床应用中应加以注意。

侧流免疫层析定量检测方法的研究进展

侧流免疫层析技术是一项新型的即时检测技术,采用层析膜和标记材料进行检测。该检测技术具有方便快捷、成本低廉的特点,因此被广泛应用于生物医药、疾病检测、食品安全、环境保护等多个领域。传统的侧流免疫层析需要使用肉眼观测,因此只能提供至多半定量的结果,并且有可能存在观测误差。随着各种类型的标记材料和灵敏检测仪器的出现及广泛应用,侧流免疫层析技术逐步实现了对待检测物的定量检测。通过综述识别元件、标记材料、检测仪器等,阐述侧流免疫层析检测系统的研究进展以及目前的应用情况。

胶体金免疫层析法与微粒子酶免分析法测定AFP结果的比较

目的:探讨胶体金免疫层析法(GICA)与微粒子酶免分析法(MEIA)测定甲胎蛋白(AFP)的可比性。方法:用GICA和MEIA两种方法对450例血清标本同时进行检测,比较结果的符合率;另收集177位病人的全血标本用GICA检测和血清标本用MEIA进行检测,比较结果的符合率。结果:两法测定同一血清标本AFP的阳性符合率、阴性符合率、总符合率分别为100%、95.44%、97.11%;GICA检测全血和用MEIA检测血清标本AFP的阳性符合率、阴性符合率、总符合率分别为100%、95.12%、97.74%。结论:GICA与MEIA测得结果一致(血清样本Kappa=0.95,不同类型样本Kappa=0.95)。GICA操作简单,灵敏快速,稳定性好且成本低,全血标本也可以检测,对标本处理要求低,且对仪器要求低,适用于条件落后地区使用和大批量体检标本筛查,具有一定的推广价值。

对比胶体金免疫层析法与荧光偏振法诊断布鲁氏菌病准确性的Meta分析

目的应用诊断性试验Meta分析,定量评价胶体金免疫层析法(GICA)与荧光偏振法(FPA)诊断布鲁氏菌病的准确性。方法通过检索中文数据库(CNKI、万方、CBM)、英文数据库(PubMed、Embase、Cochrane),分别收集GICA和FPA诊断布鲁氏菌病的相关文献,检索截至2021年12月。按照纳入标准及排除标准筛选文献、提取数据,采用RevMan5.3对入选文献进行质量评价,应用Stata12.0与SAS9.4拟合双变量随机效应模型评价GICA与FPA诊断布鲁氏菌病准确性的结果。结果纳入符合标准的文献29篇,共22914个样本。诊断布鲁氏菌感染的合并灵敏度、特异度、阳性似然比、阴性似然比、DOR值和AUC,GICA法分别为95%(95%CI:90%~97%)、96%(95%CI:93%~98%)、25.20(95%CI:13.34~47.58)、0.06(95%CI:0.03~0.10)、418.30(95%CI:170.98~1027.03)和0.99(95%CI:0.97~0.99),FPA法分别为96%(95%CI:94%~97%)、99%(95%CI:96%~100%)、72.29(95%CI:24.03~217.51)、0.04(95%CI:0.03~0.06)、1821.75(95%CI:516.42~6426.52)和0.99(95%CI:0.97~0.99),且两种方法合并DOR值的差异有统计学意义(P<0.001)。Deek’s漏斗图检验显示两种方法均无明显发表偏倚。结论在布鲁氏菌病的实验室检测中,GICA与FPA均有良好的诊断价值,FPA的综合诊断效能更高。

胶体金侧流层析法快速检测蓖麻毒素

目的基于胶体金侧流层析技术,利用寡核苷酸序列为识别探针,建立裸眼半定量检测蓖麻毒素的方法。方法利用修饰生物素和FAM的寡核苷酸序列为识别探针,与标记FAM抗体的胶体金颗粒结合;在硝酸纤维素膜上包被链霉亲和素作为检测线,包被抗FAM抗体的二抗作为控制线,建立蓖麻毒素裸眼检测方法,评价其特异性和重复性,并利用image J软件进行数据处理分析,绘制检测曲线。结果胶体金侧流层析试纸条在120 min内完成检测,最低可检测到10 ng/mL,特异性、重复性良好。结论建立了检测蓖麻毒素的胶体金侧流层析方法,该方法无需制备相应抗体,且操作简单,可满足现场检测的需求。

胶体金免疫层析技术在兽医领域的应用分析

对于胶体金免疫层析技术而言,在20世纪被人们发现并且用于生物医学与临床诊断学等相应领域中,其优点为简便性与特异性和敏感性以及快速并且在进行临床诊断与检验过程中不用使用特定的设施与专业技术人员,因此被广泛使用于医学领域。文章主要分析了为什么胶体金免疫层板技术被广泛地使用于兽医领域中,探讨了胶体金免疫层析技术在兽医领域中的使用原理,促进了胶体金免疫层析技术在兽医领域中的不断发展与应用。

基于不同纳米材料的侧流免疫层析技术在真菌毒素检测中的应用

真菌毒素毒性强,具有很强的致癌性和致畸性,对人体的危害巨大。近年来,其快速检测技术成为研究的热点,在"批量检测"的趋势下,侧流免疫层析技术以具有操作简便,经济合理,灵敏快速等优点,广泛应用于食品、饲料、农产品中真菌毒素的检测。本文对侧流免疫层析检测技术的研究概况及不同纳米材料的侧流免疫层析技术在真菌毒素检测中的应用和发展前景进行综述,以期为侧流免疫层析技术在真菌毒素检测的未来发展及应用提供参考。

胶体金免疫层析法检测抗幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A抗体

目的 建立一种快速、简易的检测血清中抗幽门螺杆菌（ Ｈｐ）细胞毒素相关蛋白 Ａ（ ＣａｇＡ） 抗体的胶体金免疫层析法（ＧＩＣＡ） ．方法 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记葡萄球菌Ａ 蛋白（ＳＰＡ） ，将重组的ＣａｇＡ 抗原划线固定于硝酸纤维素膜上，制成免疫层析检测试条． 血清中ＩｇＧ 与测试条上金标记物结合后沿着硝酸纤维素膜移动，与膜上的固相抗体结合形成肉眼可见的红色线条．结果 用ＧＩＣＡ 与ＥＬＩＳＡ 试剂盒对比检测了３２６ 份血清标本中抗ＣａｇＡ 抗体，本方法的特异性为９５－８ ％ ，敏感性为９７－３ ％ ，两法符合率为９６－６ ％ ．结论 ＧＩＣＡ 检测血清中的抗ＣａｇＡ 抗体特异性强、灵敏度高、简便快速，无需特殊仪器设备，有广泛应用价值．

胶体金免疫层析技术在兽医临床中的应用分析

胶体金免疫层析将胶体金的颜色特性与免疫层析相结合,达到检测的目的。色谱中使用胶体金作为标记物,用相应配体捕获标记物与待测物质的配合物,进行浓显色,快速检测纤维膜上的色带。胶体金免疫层析法操作简便快捷,无需操作人员技术培训,无需专用设备,检测结果清晰直观,试剂稳定,便于保存,特别适用于现场快速检测。广泛应用于动物病毒、细菌和寄生虫的病原学检测和临床诊断。