吡虫啉和啶虫脒胶体金免疫层析法试纸条性能评估及应用效果探究

目的研究吡虫啉和啶虫脒胶体金免疫层析法试纸条在不同基质中残留量检测的应用效果。方法实验考察了市场上主要流通的5种不同品牌的胶体金免疫层析法试纸条在蔬菜、水果和茶鲜叶基质中的检出限、灵敏度、交叉反应率、特异性、假阳性和假阴性率。结果各品牌胶体金试纸条在3种不同类型基质(白菜、苹果和茶鲜叶)中,检出限浓度水平有假阴性出现,其余浓度水平灵敏度较好;特异性和交叉反应性,结果均为阴性;假阳性率和假阴性率考察中,假阳性率为0%,但有假阴性情况出现。结论胶体金免疫层析法在检测吡虫啉、啶虫脒农药残留时具有简便快捷的特点,在蔬菜、水果基质的检测中,判定结果较为准确可靠;在茶叶基质中,由于基质效应的影响,出现假阴性的机率较高。

不同品牌胶体金免疫层析试纸条/卡检测牛羊布鲁氏菌病的效果分析

为比较不同品牌胶体金免疫层析试纸条/卡(简称试纸条/卡)检测牛羊布鲁氏菌病的效果,利用抗体布鲁氏菌阴阳性血清,对6种品牌试纸条/卡的准确性及灵敏度进行观察比较;同时按不同试纸条/卡操作方法对经虎红平板凝集试验(RBPT)初筛和竞争酶联免疫吸附试验(cELISA)复核的临床牛羊血清样品进行检测比较。结果显示:不同试纸条/卡对布鲁氏菌企业标准阴阳性血清检出率均为100%,其中2种试纸条/卡敏感性高,对不同稀释倍数阳性血清均可检出;试纸条/卡对临床阴性血清均100%检出,但对临床阳性血清样品的检测结果差异较大,其中对羊阳性血清样品的检出率为5.88%~70.59%,对牛阳性血清样品为50.0%~100.0%。结果表明,不同品牌试纸条/卡在布病检测时存在一定差异。建议使用试纸条/卡进行布鲁氏菌病初筛后,应结合国家相关布病诊断技术进行复检,以确保检测结果的准确性。

胶体金免疫层析试纸条在生物毒素检测领域的研究进展

胶体金免疫层析试纸条是一种常用的检测方法,广泛应用于疾病诊断、生物毒素检测等领域。该技术基于胶体金标记的特异性抗原(抗体)与待检样品中的目标分子相互作用,在试纸条上形成可见的测试线或信号变化。其流程包括样品预处理、标记抗体制备、试纸条组装步骤。胶体金免疫层析试纸条可以用于快速检测食品中的毒素残留、环境中的有害物质以及临床诊断中的相关指标。该技术具有无创、快速、灵敏和准确的特点,在临床应急检测和大规模筛查中能快速获得结果。文章总结了胶体金免疫层析试纸条技术及其在生物毒素检测中的研究进展,并分析了当前胶体金免疫层析试纸条技术的优缺点,展望了该技术在生物毒素检测领域的未来发展方向。

胶体金免疫层析定性检测试剂的质量控制与评价

目的:探讨胶体金免疫层析定性检测试剂质量控制技术关键要求,为生产企业、检验机构质量控制及评价提供参考,有效地促进该类体外诊断试剂质量水平的提高。方法:结合胶体金免疫层析定性检测试剂质量标准要求及分类管理,对该类试剂质量的关键性能要素进行剖析,提出相应建议,提高试剂质量。结果与结论:质量控制与评价是贯穿产品全流程的核心要素,膜条宽度、液体移行速度、阴性符合率、阳性符合率、检出限、重复性是胶体金免疫层析定性检测试剂质量控制及评价的关键性能指标,对于试剂的质量至关重要。相关生产研发企业要合理设计性能要求,完善质量管理体系;检验机构要根据产品性能要点做好质量评价;监管部门要根据行业需要和监管需要,加快标准制修订工作,加强上市后监管;从生产、检验及监管各环节对这些关键性能指标进行控制,提高试剂的质量标准,从而满足临床和监管的需求。

基于不同抗原的犬布鲁氏菌病免疫层析胶体金抗体试纸条的制备和比较

为建立针对犬布鲁氏菌病的免疫层析胶体金快速检测方法,利用从犬种布鲁氏菌菌株提纯的膜蛋白和可溶性蛋白,原核表达纯化的外膜蛋白Omp31和BP26以及基于B细胞抗原肽的融合蛋白F14,分别制备了试纸条,然后采用犬布鲁氏菌病阳性和阴性血清,分别对上述试纸条进行敏感性和特异性比较。结果显示:Omp31抗原的敏感性最高,其次是F14和BP26,而全菌膜蛋白和全菌可溶性蛋白的敏感性较差;特异性上,使用由5种抗原制备的胶体金试纸条检测30份犬布鲁氏菌病阴性血清,结果均为阴性;5种试纸条与沙门氏菌、大肠杆菌(O157)、大肠杆菌(H7)、霍乱弧菌、副溶血弧菌、军团菌阳性血清均不发生交叉反应。另外,由F14和BP26制备的试纸条可识别羊布鲁氏菌病阳性血清,而由Omp31、全菌膜蛋白和全菌可溶性蛋白制备的试纸条均不能识别牛、羊布鲁氏菌病阳性血清。综上所述,Omp31、F14和BP26可作为制备犬布鲁氏菌病免疫层析胶体金检测卡的备选抗原。本研究为粗糙型布鲁氏菌引起的布鲁氏菌病的诊断提供了技术支撑。

同时快速检测蔬菜中百菌清和多菌灵的胶体金免疫层析法

该研究制备分别特异性识别百菌清、多菌灵的两种单克隆抗体,并建立一种同时快速检测蔬菜中百菌清和多菌灵的胶体金免疫层析法。在最适工作条件下,所建立的方法对百菌清、多菌灵的检测限分别为0.08 ng/mL和1.95 ng/mL,线性范围分别为0.08~10.00 ng/mL和1.95~250.00 ng/mL。黄瓜、番茄、包菜3种样品加标回收率为79.2%~112.1%(百菌清)和63.3%~97.5%(多菌灵),变异系数均低于18.9%,试纸条所需检测时间为20 min,可应用于蔬菜中百菌清、多菌灵残留的现场高通量快速筛查。

胶体金免疫层析法同步快速测定畜禽肉中3种兽药残留

该文旨在建立一种胶体金免疫层析技术同步测定猪肉和鸡肉组织中呋喃唑酮代谢物、呋喃西林代谢物、氯霉素药物残留的方法。动物肌肉组织中呋喃唑酮代谢物、呋喃西林代谢物、氯霉素经酸化、衍生化及乙酸乙酯提取,并经含吐温-20的Tris-HCl缓冲液稀释后,与胶体金标记的单克隆抗体结合,抑制抗体和硝酸纤维素膜检测线(T线)上的抗原结合,从而导致T线颜色变化。通过比较T线和质控线(C线)颜色深浅,对试样中多兽药残留进行定性判定。试验优化了pH值、抗体添加量、抗原包被量、吐温-20添加量、衍生化试剂浓度和冻干保护剂种类等关键因素,并对检测卡的灵敏度、特异性和稳定性进行检测。结果显示,所建立的免疫层析方法可在35 min内检出猪肉和鸡肉中呋喃西林代谢物、呋喃唑酮代谢物和氯霉素药物,检出限分别为0.5、0.5、0.1μg/kg,灵敏度≥98%,假阳性率≤2%,假阴性率≤2%,稳定性可达到1年,且与现有标准方法检测结果一致。该方法操作简便、特异性强、灵敏度和准确度高,检测时间短且稳定性好,可用于动物肌肉组织中多兽药残留的高通量快速检测。

胶体金免疫层析法检测皮肤癣菌的临床适用性评估

目的评估与直接镜检相比,胶体金免疫层析法诊断皮肤癣菌感染的临床适用性。方法收集346例由门诊医生怀疑皮肤癣菌感染的皮屑或甲屑标本,将其分为3份,分别行直接镜检和免疫层析抗原检测,两种方法结果不一致者行PCR。比较两种方法诊断结果的一致率和不一致率。结果抗原检测和直接镜检的阳性检出率分别为76.59%、69.36%。346例临床样本中,293例抗原检测与直接镜检结果一致,一致率为84.7%;53例两种方法检测结果不一致,不一致率为15.3%。不一致的临床样本中46份行PCR进一步鉴定,分别有39例和7例与抗原检测和直接镜检结果相同。即皮肤癣菌抗原检测与PCR校正后的直接镜检结果一致(阳性或阴性)的标本数为332份,一致率为96.0%,不一致率为4.0%。结论免疫层析法是简单、可靠的真菌检测方法,灵敏度比直接镜检高,有着很好的临床实用价值。

胶体金免疫层析法与酶联免疫吸附试验在梅毒螺旋体特异性抗体检测中的应用分析

目的探究梅毒螺旋体特异性抗体检测中胶体金免疫层析法(GICA)与酶联免疫吸附试验(ELISA)的应用价值。方法选取2020年7月至2022年9月我院收治的80例疑似梅毒感染患者,均接受GICA、ELISA、TPPA检查。以TPPA结果为“金标准”,分析GICA、ELISA检查结果;分析GICA、ELISA诊断价值,并计算一致性进行;另对比GICA、ELISA检测满意度。结果相比于ELISA检测,GICA检测诊断灵敏度、准确度及阴性预测值均较高(P<0.05)。一致性检验,GICA诊断一致性尚可(kappa值=0.771,P=0.000),ELISA诊断一致性不佳(kappa值=0.385,P=0.000)。相比于ELISA检测,GICA检测满意度较高(P<0.05)。结论GICA与ELISA均可在梅毒螺旋体特异性抗体中进行检测,但GICA检测应用价值更高,一致性较强,且患者满意度较高,可将其作为首选检测方法。

胶体金免疫层析法在韭菜农药残留检测中的应用研究

为验证胶体金免疫层析技术在韭菜农残检测中的可靠性和适用性,选用3种不同的农残胶体金免疫层析快速检测产品(胶体金农残快检试剂)检测韭菜中腐霉利、吡虫啉、啶虫脒、多菌灵、克百威、三唑磷等6种农药残留,并将其与色谱质谱串联法进行比较,对其灵敏度、假阳性率及假阴性率进行验证评价。结果表明,在0.5 LOD的农药添加水平下,3种胶体金农残快检试剂对实验室空白样品的检测结果均为阴性;但当添加水平达到LOD或MLR时,其检测结果均为阳性,证明胶体金农残快检试剂灵敏度较高,且符合国家标准食品中农药最大残留限量要求;实验室加标试验和实际样品比对试验结果显示,胶体金农残快检技术与色谱质谱联用法的检测结果均无显著性差异(χ^(2)<3.84),其假阴性率和假阳性率均为0。故胶体金免疫层析法可在韭菜的农残快速检测中应用。

酶联免疫法与胶体金层析法对HIV抗体检测结果的比较

目的评估酶联免疫法与胶体金层析法对HIV抗体的检测性能。方法2021—2022年对3423份血液样本同时用酶联免疫法和胶体金层析法检测,以免疫印迹法为金标准确证结果。结果酶联免疫法检出有反应样本5份,胶体金层析法检出有反应样本9份,经免疫印迹实验确证阳性4份。酶联免疫法假阳性1份,假阳性率0.03%;胶体金层析法假阳性5份,假阳性率0.15%,2种方法差异无统计学意义(χ^(2)=2.64,P=0.26)。2种方法检测HIV抗体的灵敏度均为100%,酶联免疫法的特异度(99.97%)略高于胶体金层析法(99.85%),Kappa值均≥0.6,检测一致性较好。结论酶联免疫法和胶体金层析法均可用于HIV抗体检测,酶联免疫法的假阳性率更低,胶体金层析法操作更为简便,可结合实际需要选择合适的方式进行HIV筛查。

基于胶体金免疫层析技术同步快速检测奶茶中的三种毒品成分

该研究基于胶体金免疫层析技术,建立了一种快速灵敏检测奶茶中甲基苯丙胺(methamphetamine,MET)、氯胺酮(ketamine,KET)和可卡因(cocaine,COC)这3种毒品成分的方法。通过优化人工抗原包被浓度、胶体金-单克隆抗体偶联物浓度、免疫反应时间等关键因素,实现奶茶中3种毒品成分的联合检测。结果显示,该方法对MET、KET和COC标准品的检测限分别为1.60、1.59、1.39 ng/mL。该方法可用于奶茶中3种毒品成分的测定,样品平均添加回收率为90%~109%,相对标准偏差<5%。该文建立的多靶标胶体金免疫层析方法具有简单、快速、灵敏、特异等优点,为现场鉴别奶茶中非法添加的MET、KET和COC提供了新思路。

有机磷农药胶体金免疫层析竞争法快速检测方法的建立

目的建立检测蔬果及饮用水等样本中的氧乐果、辛硫磷、敌百虫、对硫磷等有机磷成分的胶体金免疫层析检测方法并研制检测试纸条。方法N-羟基琥珀酰亚法合成有机磷人工抗原;制备乙酰胆碱酯酶抗原及纯化及其抗血清制备、纯化与标记;优化试纸条工作参数,并进行性能测试。结果抗血清效价在1∶32~1∶64之间,蛋白含量约为2 mg/mL。纯化后的多克隆抗体在相对分子质量(M r)25000和55000处出现目的条带,纯度较好;试纸条反应时间在5~10 min,样本检测限为200 ng/mL,特异性及准确性良好,试纸条有效期为6个月。结论建立了简便快速检测多种有机磷成分的胶体金免疫层析检测方法,适合大量样本的现场初筛。

胶体金免疫层析法检测猕猴桃中氯吡脲残留的应用研究

以陕西省周至县猕猴桃8个主产镇的猕猴桃为研究对象,采用胶体金免疫层析法对猕猴桃中氯吡脲农药残留进行快速检测,将胶体金免疫层析法快速检测呈阳性的样品用三重四极杆液相色谱质谱联用仪检测来验证方法的可靠性。使用1 g皮作为样品进行前处理,得出的阳性率高,假阳性率也高,而使用果皮和果肉1∶9匀浆后称取1 g作为样品,得到的阳性率较低,假阳性率也大大降低。研究结果表明,使用果皮和果肉1∶9匀浆后称取1 g作为样品的胶体金免疫层析法快速检测结果与液相色谱质谱联用法检测结果更匹配,对胶体金快速检测猕猴桃中氯吡脲农药残留前处理过程的具体实施具有指导意义。

胶体金免疫层析法检测叶菜中联苯菊酯残留的应用

本文采用胶体金免疫层析法检测叶菜基质中联苯菊酯农药残留量,测试了检测灵敏度、特异性,并优化了检测过程的样品重量、提取液用量及稀释方法、固液分层方式及时间、孵育时间、反应时间等前处理方法条件。结果表明,胶体金法检测叶菜中联苯菊酯的检出限为4.0 mg/kg,与6种拟除虫菊酯类农药均无交叉反应。本文简化了操作步骤,采用静置的分层方式替代原有的离心操作,降低对场地、设备、器具的要求,为后续开发使用低精度量器进行前处理操作的产品提供技术基础。

胶体金免疫层析试验在梅毒抗体检测中的价值及适用范围研究

目的 通过比较胶体金免疫层析试验(GICA)与酶联免疫吸附试验(ELISA)、光激化学发光法(LICA)、化学发光免疫分析法(CLIA)对梅毒螺旋体抗体检测的性能指标,探寻GICA法在检测梅毒螺旋体抗体的价值以及患者自检的可能。方法 选取2022年2~5月收集的合肥市滨湖医院住院患者、门诊就诊者以及体检者共143人份血清标本,同时采用GICA、LICA、ELISA、CLIA、梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)进行梅毒螺旋体抗体检测。以TPPA结果为金标准,分析GICA与LICA、ELISA、CLIA的灵敏度、特异度、阴性预测值、阳性预测值,并与TPPA比较得出一致性以及符合率;通过绘制出GICA、LICA、ELISA、CLIA的受试者工作特征(ROC)曲线并对曲线下面积进行比较;根据计算所得最佳临界值进行分区,比较不同区间的TPPA符合率与GICA的TPPA符合率大小。结果GICA的特异度与ELISA、LICA比较,差异有统计学意义(P<0.05);GICA的特异度和阳性预测值均高于CLIA,差异有统计学意义(P<0.05)。GICA与TPPA的符合率均高于ELISA、LICA、CLIA,差异有统计学意义(P<0.05)。ELISA和LICA与GICA的符合率均高于CLIA与GICA的符合率,差异有统计学意义(P<0.05)。通过交叉示意图可见,GICA阳性时至少伴有其他2种方法同时阳性。GICA的ROC曲线下面积与ELISA、LICA、CLIA相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。分区后发现ELISA、LICA和CLIA的S/CO值(样本吸光值/临界值)分别在1.00~12.00、1.00~10.00、1.00~4.00时的TPPA符合率与GICA的TPPA符合率存在统计学差异(P<0.05)。结论 GICA作为快速诊断梅毒的重要手段,其各项指标均优于ELISA、LICA、CLIA,还能作为此3种方法初筛梅毒抗体阳性后的复检方法,为日后患者自检模式的实现也提供了可能性。

胶体金免疫层析速测卡与液质联用法检测豇豆中农药残留

胶体金免疫层析速测卡测定农药残留具有针对性强、操作简便、能够半定量等优点。本文通过胶体金免疫层析速测卡与液质联用法检测豇豆中的阿维菌素、噻虫嗪、噻虫胺、灭多威、克百威、啶虫脒和氟虫腈7种农药并进行对比分析,对胶体金免疫层析速测卡准确性和灵敏度进行确证。结果表明,胶体金免疫层析速测卡检测豇豆与液质联用法定量检测结果基本一致,准确性和灵敏度较好。

犬利什曼抗体胶体金免疫层析试纸的制备与性能评价

试验旨在建立一种快速检测犬利什曼原虫病的方法,采用利什曼重组抗原63 kDa糖蛋白(gp63)和鼠免疫球蛋白G(IgG)抗体,以信号放大技术制备胶体金免疫层析检测试纸,通过测试犬艾利希(Ehrlichia)、犬莱姆(Lyme)、犬巴贝斯(Babesia)、犬心丝虫(CHW)和犬利什曼(LSH)的阳性样本,对该方法的灵敏度、特异性、重复性和稳定性进行了验证。结果显示,该检测试纸测试Ehrlichia、Lyme、Babesia和CHW阳性样本均为阴性,对已确定的LSH阳性样本的检测最高稀释梯度达到1∶480。该检测试纸与ELISA试剂盒的检测结果符合率为98.08%,与rk28利什曼抗体试纸条检测结果进行对比,阳性检出率更高。研究表明,LSH抗体胶体金免疫层析试纸的灵敏度高,特异性好,适用于犬利什曼原虫病的现场快速诊断。

应用胶体金免疫层析法快速检测甜椒中5种农药残留

采用胶体金免疫层析技术(Colloidal Gold Immunochromatographic,GICA)检测甜椒中的毒死蜱、克百威、氟虫腈、灭多威、啶虫脒5种农药,并对其检测结果的准确性、特异性进行测定和评价,采用液质联用仪(UPLC-MS/MS)进行确证。实际样本的胶体金免疫层析法检测结果与液相色谱-质谱联用法检测结果基本一致。胶体金免疫层析法具有灵敏度高、成本低、速度快、操作简单等优点,适合推广使用。

犬细小病毒胶体金免疫层析试纸卡的研制

本研究采用免疫胶体金技术(immune colloidal gold technique,ICGT),以犬细小病毒单克隆抗体作为胶体金的标记物及检测线诊断物、羊抗鼠IgG抗体作为质控线,制备犬细小病毒胶体金免疫层析试纸卡。结果显示,制备的试纸卡可在10 min内完成显色,对其他犬源病毒不存在交叉反应,具有较高的特异性;犬细小病毒灭活病毒液的梯度稀释检测结果显示,制备的试纸卡具有较高的灵敏度,可达到4×10^(9)TCID50/mL;通过对50份样本的检测,并与PCR结果进行比对,符合率达92.00%;同时,试纸卡可在室温(22~25℃)稳定保存约8个月,在4℃环境中稳定保存约10个月。本研究所制备的犬细小病毒胶体金免疫层析试纸卡具有较高的敏感性、特异性、重复性与稳定性,对犬细小病毒的临床诊断评估具有一定的参考意义。