胶体金免疫层析法高通量测定动物肌肉组织中多兽药残留

[目的]本文旨在建立一种胶体金免疫层析技术高通量测定猪肉、鸡肉组织中8种磺胺类、3种四环素类、2种喹诺酮类和甲氧苄啶药物残留的方法。[方法]动物肌肉组织中磺胺类、四环素类、喹诺酮类和甲氧苄啶经磷酸缓冲液提取,并经含Tween 20的磷酸缓冲液稀释后,与胶体金标记的单克隆抗体结合,抑制抗体与硝酸纤维素膜检测线(T线)上的抗原结合,从而导致T线颜色变化。通过比较T线和质控线(C线)颜色深浅,对试样中多兽药残留进行定性判定。[结果]本试验优化了pH值、抗体添加量、抗原包被量、Tween 20添加量和冻干保护剂种类等关键因素,磺胺类、四环素类、喹诺酮类和甲氧苄啶等药物的检出限分别为50、100、50、35μg·kg^(-1),灵敏度≥97%,假阳性率≤2%,假阴性率≤3%,且与现有标准方法检测结果一致。[结论]该方法操作简便,灵敏度和准确度高,检测时间短且稳定性好,可用于动物肌肉组织中多兽药残留的高通量快速检测。

胶体金免疫层析法同步快速测定畜禽肉中3种兽药残留

该文旨在建立一种胶体金免疫层析技术同步测定猪肉和鸡肉组织中呋喃唑酮代谢物、呋喃西林代谢物、氯霉素药物残留的方法。动物肌肉组织中呋喃唑酮代谢物、呋喃西林代谢物、氯霉素经酸化、衍生化及乙酸乙酯提取,并经含吐温-20的Tris-HCl缓冲液稀释后,与胶体金标记的单克隆抗体结合,抑制抗体和硝酸纤维素膜检测线(T线)上的抗原结合,从而导致T线颜色变化。通过比较T线和质控线(C线)颜色深浅,对试样中多兽药残留进行定性判定。试验优化了pH值、抗体添加量、抗原包被量、吐温-20添加量、衍生化试剂浓度和冻干保护剂种类等关键因素,并对检测卡的灵敏度、特异性和稳定性进行检测。结果显示,所建立的免疫层析方法可在35 min内检出猪肉和鸡肉中呋喃西林代谢物、呋喃唑酮代谢物和氯霉素药物,检出限分别为0.5、0.5、0.1μg/kg,灵敏度≥98%,假阳性率≤2%,假阴性率≤2%,稳定性可达到1年,且与现有标准方法检测结果一致。该方法操作简便、特异性强、灵敏度和准确度高,检测时间短且稳定性好,可用于动物肌肉组织中多兽药残留的高通量快速检测。

胶体金免疫层析法检测罂粟碱的研究

建立了准确、快速,简便的检测食品中罂粟碱的胶体金免疫层析技术(GICA)。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记罂粟碱(Papavarine)抗体。方法检出限为0.2μg/mL,正确检出率约为97%,特异性强,具有推广应用价值。

胶体金免疫层析法在乙型肝炎病毒表面抗原检测中的应用评价

胶体金免疫技术是20世纪80年代继三大标记技术（荧光素、放射性同位素和酶标记）发展起来的固相标记免疫测定技术，该法优点是可单份测定，简单快速。2005年卫生部门要求所有做胃镜与肠镜的患者检测前必须进行乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）检测，因时间关系，这部分患者均采用GICA进行。GICA能否取代酶联免疫吸附试验（ELISA），成为至关重要的一个问题，现将两种方法检测HBsAg进行比较，报告如下。

胶体金免疫层析法快速检测水产品中呋喃妥因代谢物残留

采用胶体金免疫层析技术(GICA)测定水产品中的呋喃妥因代谢物残留,并用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)对实验结果进行确证。结果显示,胶体金免疫层析法的检测限为1.0μg/kg,假阳性率不大于5%,假阴性率为0;对实际样本的检测结果与LC-MS/MS法一致。研究表明,胶体金试纸条法操作简便、快速,成本低,为水产品中呋喃妥因代谢物的残留检测提供了快速筛选方法,而LC-MS/MS法灵敏度高,结果准确,适用于阳性样本的确证和精确定量。

牛奶中泰乐菌素和替米考星的胶体金免疫层析法测定

建立一种快速、简便、同时针对牛奶中泰乐菌素和替米考星残留的检测方法。应用竞争抑制免疫层析原理,研制出泰乐菌素和替米考星胶体金试纸条,并对其性能进行了鉴定。结果表明,该试纸条对牛奶中泰乐菌素和替米考星的检测限分别为25μg/L和50μg/L。假阳性率低于5%,假阴性率为0,检测时间10 min,与其他大环内酯类抗生素无交叉反应。该方法操作简便、灵敏度高、特异性强,适用于乳品流通环节中泰乐菌素和替米考星残留的快速检测。

胶体金免疫层析法快速检测韭菜中腐霉利残留

【目的】建立韭菜中腐霉利残留的胶体金免疫层析快速检测方法。【方法】通过合成两种不同结构的腐霉利半抗原,并分别与载体蛋白耦联制得免疫原和包被原,免疫小鼠获得腐霉利单克隆抗体。基于竞争性免疫抑制原理,建立可视化胶体金免疫层析法。【结果】检测韭菜中腐霉利残留,检测限为5 mg/kg,满足国家标准规定的最大残留限量;对实际样本的检测结果与液相色谱-质谱法检测结果一致。【结论】本研究建立的方法具有简便、快速、准确等优点,可实现对韭菜中腐霉利残留超标的高通量快速筛选。

ELISA法和胶体金免疫层析法在乙肝表面抗原检测中的对比研究

目的探讨ELISA法和胶体金免疫层析法(GICA法)在乙肝表面抗原检测中的优缺点和应用价值。方法随机选取进行血清检测的600例血清标本,同时采用ELISA法和胶体金免疫层析法检测乙肝表面抗原,比较两种检测方法的灵敏度及差异性。结果 ELISA法检测阳性率为5.33%,灵敏度为96.97%,特异度为100%;胶体金免疫层析法检测阳性率为5.0%,灵敏度为90.90%,特异度为99.82%;两种方法检测阳性结果符合率为90.63%。结论胶体金免疫层析法灵敏度低,特异性基本一致,ELISA法检测的阳性率准确、灵敏度高为突出优点,是目前各级实验室应用最广泛的HBsAg检测方法。

利用重组表位蛋白map0862-2154c检测牛副结核血清抗体胶体金免疫层析方法的建立（英文）

筛选牛副结核分枝杆菌的2个主要抗原map0862、map2154c中抗原指数高的抗原表位基因，将多表位基因序列合成，与原核表达栽体pET28a（＋）连接，构建重组质粒pET28a—map0862—2154c。重组质粒转化至大肠杆菌感受态细胞BL21（DE3）中诱导表达，以表达的重组表位蛋白为抗原建立检测牛副结核分枝杆菌抗体的胶体金免疫层析方法（GIcA，map0862—2154c-GICA），同时对河北省部分牛场采集的242份副结核病奶牛血样进行血清抗体检测。结果表明，牛副结核分枝杆菌表位蛋白map0862—2154c成功表达，表达产、物能与牛副结核分枝杆菌阳性血清反应。临床血清样本检测结果表明，其敏感性、特异性和符合率分别为91．86％（79／86），94．23％（147／156）和93．38％（226／242），该方法可用于牛副结核病的血清抗体检测。

谷物中玉米赤霉烯酮残留的胶体金免疫层析法测定

建立一种快速、简便、针对谷物中玉米赤霉烯酮残留的检测方法。应用竞争抑制免疫层析原理,研制出玉米赤霉烯酮胶体金试纸条,并对其性能进行了鉴定。结果表明,该试纸条对谷物中玉米赤霉烯酮的检测限为100μg/kg,灵敏度为99%,特异性为94%,假阴性率为1%,假阳性率为6%,检测时间为10 min。该方法操作简便、灵敏度高、特异性强,适用于现场快速检测谷物中的玉米赤霉烯酮。

GICA法检测HBsAg的探讨

目的对3种胶体金免疫层析测定(GICA)试条检测HBsAg的性能、结果等技术参数进行初步探讨,为各实验室的选用提供参考.方法采用GICA法和酶联免疫吸附法(ELISA)对定值的HBsAg质控品和1 322份血清标本同时测定,并结合有关实验,对3种GICA试条的敏感性、特异性、渗透性、固相膜均匀性等结果进行初步评价.结果 3种GICA试条对HBsAg的最小检出量为1～5ng/ml;与ELISA法比较,检出率为97.37%～99.57%,一般不出现假阳性,未发现前带反应.结论 GICA适用于急诊检验,其敏感性低于ELISA法,成本高;特殊情况下,还必须与ELISA法并用,实行双检.

GICA法检测乙肝病毒标志物“两对半”的结果分析

目的 用ELISA法作参照，对胶体金免疫层析测定(GICA)试纸条检测乙肝标志物表面抗原(HBsAg)、表面抗体(HBsAb)、e抗原(HBeAg)、e抗体(HBeAb)、核心抗体(HBcAb)俗称“两对半”的性能、结果等技术参数进行了分析比较，为GICA法的临床应用提供参考。方法 从ELISA法测定“两对半”的血清标本中选出40例不同反应模式的标本及卫生部临介值血清，用GICA试纸条进行测定，对其反应的特异性，敏感性，符合度及试纸的反应阳性强度进行观察比较分析。结果 与ELISA法比较，GICA法测定血清标本的总特异性为93．8％；总灵敏度为94．4％：总符合率为94％。用GIcA法对卫生部临介值血清HBsAg2ng／ml、HBsAb30mlu／ml、HBcAb2ncu／m检出结果均为弱阳性，HBeAg2ncu／ml为阳性，HBeAb4ncu／ml为阴性，HBsAglng／ml为阴性．而将五项的原有浓度稀释一倍时均为阴性。两种方法检测各种模式符合率为80％。结论 GICA法用于两对半检测其特异性、敏感度、及符合率均达到90％以上，但灵敏度总体低于ELISA法，对于献血员的筛选有漏检的可能。在检测下限的标本有假阴性和假阳性出现，其试剂质量还有待于进一步提高和规范。但GICA法具有快速、简便、特异、不需特殊设备、适用于急诊病人检测的要求及可以单份测定等优点，其应用前景十分广阔。

GICA法检测急诊病毒三项的应用评价

目的:评价胶体金免疫层析试验(GICA)检测急诊病毒三项即乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎病毒抗体(Anti-HCV)、人类免疫缺陷病毒抗体(Anti-HIV1/2)的临床应用。方法:用GICA法与ELISA法检测的998份血清中急诊病毒三项,对结果进行比较分析并加以评价。结果:两种方法检测急诊病毒三项的阴性率差异无统计学意义(P】0.05),阴性符合率分别为99.78%、99.90%、100%。结论:GICA法检测急诊病毒三项操作简便、快速且准确度高,可应用于门诊及急诊手术前患者经血液传播疾病的快速筛查,但临床最终应采用GICA法联合ELISA法的检测模式报告结果。

食品中百草枯3种检测方法的比较

通过对粮食作物中的百草枯残留检测方法进行比较研究,得到各种方法的优劣。结果:HPLC的最低检测限为12 mg/L,加标回收率为42%～52%,相对标准偏差(RSD)为4.43%;ELISA的最低检测限为0.005 mg/L,加标回收率为70%～80%,相对标准偏差(RSD)为8.15%;GICA的最低检测限为50 mg/L,通过一个标准的颜色反应系列,可以非常简便、快速的对样品进行现场检测,是快速检测发展的一个方向。

兔病毒性出血症检测方法的研究进展

兔病毒性出血症(RHD)又称出血性败血症,俗称兔瘟,是由兔病毒性出血症病毒(RHDV)引起的一种发病急、死亡率高的传染病。为了更好地加强病毒的检测与防控,需要更精确、方便的检测方法以满足科研和基层的不同需要,文章对近年来RHDV检测方法的研究进展进行了综述,主要包括酶联免疫吸附试验(ELISA)、荧光定量PCR、环介导等温扩增技术(LAMP)和胶体金免疫层析(GICA)等,以期为RHDV的防控及诊断提供参考。

鼠疫快速诊断技术及其应用研究

目的寻找和确定引起特异性不足的因素,实施科学的对策加以解决,真正实现鼠疫的快速诊断技术并以此为基础构建新一代的检测技术。方法(1)研制高质量的鼠疫F1抗原的单克隆抗体,考虑到位点问题要求尽可能多的、针对不同位点的高效价瘤株,构建稳定的“抗体源;”(2)利用获得的高效瘤株通过纯系小鼠生产抗体或用无蛋白细胞培基生产抗体;(3)对抗体进行纯化并使其达到“免疫纯水平”并建立提取、纯化工艺,最终建立稳定的低成本的无交叉“抗体源;”(4)纯化抗原至“免疫纯水平”或“电泳纯水平”,建立提取、纯化工艺,最终建立稳定低成本的无交叉“抗原源;”(5)对新一代快速检测技术进行实验室和现场评价,对特异性即实验的准确性做出评价。结果(1)确定了影响鼠疫免疫学诊断技术特别是间接红细胞凝集试验(IHA及R IHA)特异性不足的两大因素:a.技术落后,试验中采用的载体不适导致了相当数量的假性凝集;b.技术方法中使用的抗原、抗体严重不纯,尤其是制备抗体时免疫动物“自身抗体”的掺入是造成交叉反应更重要的因素;(2)研制并开发出分泌抗鼠疫F1单克隆抗体(F1-M cAb)的杂交瘤株164株,并从其中筛选出针对不同位点的高效瘤株6株,经活性鉴定及配对试验形成了4个组合,具高效价和高活性;(3)使用制备电泳技术将鼠疫F1抗原提纯至电泳纯水平;(4)将鼠疫F1-M cAb提纯至免疫纯水平;(5)引进、消化了具有先进水平的胶体金标免疫层析技术;(6)使用电泳纯的鼠疫F1抗原及免疫纯的鼠疫F1-M cAb构建了能自人和动物血液中直接检测鼠疫特异抗体的金标免疫层析技术(G ICA)和能自人和动物脏器或穿剌物中直接检测鼠疫F1抗原或鼠疫病原的反向金标免疫层析技术(RG ICA);(7)由于采用了纯化的抗原、抗体,提高了标记效果,其敏感性超过IHA和R IHA,阳性检出率在排除了假阳性和交叉反应后依然高出血凝约5%左右;(8)上述两项技术实验室内经44株非鼠疫菌抗血清和90株非鼠疫菌交叉测定、中和试验以及蛋白印迹鉴定(W estern b lotting)均证实反应特异,基本消除了传统技术存在的非特异反应;(9)经4省(区)不同宿主动物3 168份(其中血清材料2 265份,脏器材料903份)现场标本验证,与实验室取得了一致的结论。结论胶体金免疫层析测试条较好地解决了特异性之难题,有效地避免了其它病原微生物导致的以及酸、碱和嗜异性凝集素、低温条件等造成的假性凝集,同时也有效地消除了由于抗原、抗体不纯,特别是实验动物自然感染其它病原产生的“自身抗体”导致的交叉反应,该技术操作简便,特别适合现场和边远地区应用,对比传统技术该法不需专业性操作,不需仪器设备,因而乡村医生可自行进行操作并做出诊断。

利用GICA-PCR快速检测瓜类果斑病菌

瓜类果斑病菌(Acidovorax avenae subsp.citrulli,Aac)是瓜类作物上重要的病原细菌,为我国进境植物检疫性有害生物。胶体金免疫层析试纸条方便快捷,应用广泛。该方法使用不当会出现假阳性问题,仅适用于病原菌的初筛检测。本研究将Aac胶体金免疫层析方法(GICA)与PCR技术相结合,建立了GICA-PCR检测方法。检测结果表明,该方法在蛋白与核酸2个层面上从发病西瓜叶片上检测到瓜类果斑病菌,有效解决了试纸条检测的假阳性问题,提高了瓜类果斑病菌检测的准确性,值得推广应用。