大肠杆菌O157:H7抗体胶体金免疫层析检测试纸条的研制

为建立快速检测鼠感染大肠杆菌O157∶H7后的抗体,本研究采用颗粒为20nm的胶体金溶液标记纯化的羊抗鼠IgG,制备金标探针,喷涂于玻璃纤维膜上;将大肠杆菌O157∶H7抗原和抗大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体F1分别包被于硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线,组装成鼠血清O157∶H7抗体胶体金免疫层析检测试纸条。实验结果表明,该试纸条仅与O157∶H7阳性鼠血清发生特异性反应,用该试纸条与常规间接ELISA平行比较检测O157∶H7免疫鼠血清,抗体效价分别为1×106和1×105,两者的敏感度相当。该试纸条操作简便,10min可出结果,适用于调查与追溯鼠O157∶H7感染状况时的现场检测。

大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体胶体金免疫层析检测试纸条的研制

用E.coliO157∶H7菌体免疫BALB/c鼠,制备免疫脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得了16株分泌单克隆抗体（mAb）的杂交瘤细胞株。其中,1D3、2E7和2H7三株为O157∶H7特异单克隆抗体,Ig亚类分别为IgMκ、IgG2bκ和IgG2bκ,腹水抗体ELISA效价分别为103、105和106。用纯化的单克隆抗体2E7标记胶体金,制备金标抗体玻璃纤维素膜;将纯化的2H7和羊抗鼠IgG分别作为检测和对照捕捉抗体包被于硝酸纤维素膜（NC）上;组装成双抗夹心法O157∶H7胶体金免疫层析检测试纸条。用该试纸条可特异检测O157∶H7,敏感度为106CFU/mL,与相同单克隆抗体2H7和2E7建立的O157∶H7夹心ELISA检测方法的敏感度相当,试纸条简便快速,在1~5 min内可得出检测结果,便于O157∶H7的临床快速诊断与现场检测样品的快速筛查。

除草剂扑草净胶体金免疫层析检测试纸条的研制

制备了扑草净胶体金免疫层析检测试纸条,建立了水样中扑草净的快速检测方法。采用柠檬酸三钠还原氯金酸法制备胶体金,对胶体金免疫层析方法的工作条件(NC膜的封闭条件、金标垫的处理方法)进行优化。最终建立的方法检出限为5 ng/mL,5 min内可以通过目测进行结果判断。河水样品不需要任何处理可以直接进行检测,检出限为5 ng/mL。本研究建立的快速免疫检测方法适用于水中扑草净残留的现场检测。

三甲氧苄氨嘧啶胶体金免疫层析检测试纸条的研制

应用胶体金免疫层析技术建立了一种快速检测食品中三甲氧苄氨嘧啶(TMP)的方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗TMP单克隆抗体并冻干于聚苯乙烯微孔中,TMP-OVA和羊抗鼠二抗分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样品垫、硝酸纤维膜和吸水纸组装,切割成胶体金试纸条。测试结果表明,TMP快速检测试纸条的灵敏度为50μg/L,检测时间为5 min,特异性高,批内和批间重复性良好,与ELISA试剂盒方法和LC-MS/MS方法符合率为100%。使用简单方便,适合现场快速检测TMP。

胶体金免疫层析试纸条在生物毒素检测领域的研究进展

胶体金免疫层析试纸条是一种常用的检测方法,广泛应用于疾病诊断、生物毒素检测等领域。该技术基于胶体金标记的特异性抗原(抗体)与待检样品中的目标分子相互作用,在试纸条上形成可见的测试线或信号变化。其流程包括样品预处理、标记抗体制备、试纸条组装步骤。胶体金免疫层析试纸条可以用于快速检测食品中的毒素残留、环境中的有害物质以及临床诊断中的相关指标。该技术具有无创、快速、灵敏和准确的特点,在临床应急检测和大规模筛查中能快速获得结果。文章总结了胶体金免疫层析试纸条技术及其在生物毒素检测中的研究进展,并分析了当前胶体金免疫层析试纸条技术的优缺点,展望了该技术在生物毒素检测领域的未来发展方向。

吡虫啉和啶虫脒胶体金免疫层析法试纸条性能评估及应用效果探究

目的研究吡虫啉和啶虫脒胶体金免疫层析法试纸条在不同基质中残留量检测的应用效果。方法实验考察了市场上主要流通的5种不同品牌的胶体金免疫层析法试纸条在蔬菜、水果和茶鲜叶基质中的检出限、灵敏度、交叉反应率、特异性、假阳性和假阴性率。结果各品牌胶体金试纸条在3种不同类型基质(白菜、苹果和茶鲜叶)中,检出限浓度水平有假阴性出现,其余浓度水平灵敏度较好;特异性和交叉反应性,结果均为阴性;假阳性率和假阴性率考察中,假阳性率为0%,但有假阴性情况出现。结论胶体金免疫层析法在检测吡虫啉、啶虫脒农药残留时具有简便快捷的特点,在蔬菜、水果基质的检测中,判定结果较为准确可靠;在茶叶基质中,由于基质效应的影响,出现假阴性的机率较高。

恙虫病东方体混合重组抗原应用于胶体金免疫层析试纸条的制备及效价检测

胶体金免疫层析试纸条具有携带方便、操作简单且敏感性、特异性高等特点,近年来开始广泛应用于疾病的诊断。为了实现对恙虫病的快速检测,笔者利用双抗原夹心法,以胶体金标记恙虫病东方体56 kDa混合重组蛋白,56 kDa混合重组蛋白和兔抗恙虫病东方体多克隆抗体分别喷在检测线及质控线上,制备了用于检测恙虫病东方体抗体的胶体金免疫层析试纸条。本研究制备的胶体金试纸条检测限为61 ng/mL,和疟疾、伤寒、血吸虫、出血热以及斑点热等阳性血清无交叉反应,特异性达90%(54/60),检测的敏感性为91.96%(103/112),在4℃下可稳定保存6个月。本试纸条能够应用于人体血清中恙虫病东方体总抗体的检测。

基于不同抗原的犬布鲁氏菌病免疫层析胶体金抗体试纸条的制备和比较

为建立针对犬布鲁氏菌病的免疫层析胶体金快速检测方法,利用从犬种布鲁氏菌菌株提纯的膜蛋白和可溶性蛋白,原核表达纯化的外膜蛋白Omp31和BP26以及基于B细胞抗原肽的融合蛋白F14,分别制备了试纸条,然后采用犬布鲁氏菌病阳性和阴性血清,分别对上述试纸条进行敏感性和特异性比较。结果显示:Omp31抗原的敏感性最高,其次是F14和BP26,而全菌膜蛋白和全菌可溶性蛋白的敏感性较差;特异性上,使用由5种抗原制备的胶体金试纸条检测30份犬布鲁氏菌病阴性血清,结果均为阴性;5种试纸条与沙门氏菌、大肠杆菌(O157)、大肠杆菌(H7)、霍乱弧菌、副溶血弧菌、军团菌阳性血清均不发生交叉反应。另外,由F14和BP26制备的试纸条可识别羊布鲁氏菌病阳性血清,而由Omp31、全菌膜蛋白和全菌可溶性蛋白制备的试纸条均不能识别牛、羊布鲁氏菌病阳性血清。综上所述,Omp31、F14和BP26可作为制备犬布鲁氏菌病免疫层析胶体金检测卡的备选抗原。本研究为粗糙型布鲁氏菌引起的布鲁氏菌病的诊断提供了技术支撑。

黄曲霉毒素B_(1)胶体金免疫层析试纸条的制备及性能研究

以黄曲霉毒素B_(1)为研究对象,制作出一种可实现对黄曲霉毒素B_(1)含量快速检测的胶体金试纸条。实验采用竞争抑制法,基于试纸条的层析作用,以胶体金为标记物与黄曲霉毒素B_(1)单抗偶联,将黄曲霉毒素B_(1)抗原和羊抗鼠二抗固定到硝酸纤维膜上作为检测线和质控线,制备出可以快速检测黄曲霉毒素B_(1)的免疫层析试纸条。通过优化,试纸条在37℃条件下,分别在5,10,15,20 d后测试,效果没有明显降低,检测灵敏度为20 ng/mL;与磺胺类药物、“瘦肉精”类药物均无交叉反应。该试纸条具有良好的稳定性和特异性,可实现生物样本中黄曲霉毒素B_(1)的快速大量检测。

有机磷农药胶体金免疫层析竞争法快速检测方法的建立

目的建立检测蔬果及饮用水等样本中的氧乐果、辛硫磷、敌百虫、对硫磷等有机磷成分的胶体金免疫层析检测方法并研制检测试纸条。方法N-羟基琥珀酰亚法合成有机磷人工抗原;制备乙酰胆碱酯酶抗原及纯化及其抗血清制备、纯化与标记;优化试纸条工作参数,并进行性能测试。结果抗血清效价在1∶32~1∶64之间,蛋白含量约为2 mg/mL。纯化后的多克隆抗体在相对分子质量(M r)25000和55000处出现目的条带,纯度较好;试纸条反应时间在5~10 min,样本检测限为200 ng/mL,特异性及准确性良好,试纸条有效期为6个月。结论建立了简便快速检测多种有机磷成分的胶体金免疫层析检测方法,适合大量样本的现场初筛。

基于胶体金免疫层析技术同步快速检测奶茶中的三种毒品成分

该研究基于胶体金免疫层析技术,建立了一种快速灵敏检测奶茶中甲基苯丙胺(methamphetamine,MET)、氯胺酮(ketamine,KET)和可卡因(cocaine,COC)这3种毒品成分的方法。通过优化人工抗原包被浓度、胶体金-单克隆抗体偶联物浓度、免疫反应时间等关键因素,实现奶茶中3种毒品成分的联合检测。结果显示,该方法对MET、KET和COC标准品的检测限分别为1.60、1.59、1.39 ng/mL。该方法可用于奶茶中3种毒品成分的测定,样品平均添加回收率为90%~109%,相对标准偏差<5%。该文建立的多靶标胶体金免疫层析方法具有简单、快速、灵敏、特异等优点,为现场鉴别奶茶中非法添加的MET、KET和COC提供了新思路。

同时快速检测蔬菜中百菌清和多菌灵的胶体金免疫层析法

该研究制备分别特异性识别百菌清、多菌灵的两种单克隆抗体,并建立一种同时快速检测蔬菜中百菌清和多菌灵的胶体金免疫层析法。在最适工作条件下,所建立的方法对百菌清、多菌灵的检测限分别为0.08 ng/mL和1.95 ng/mL,线性范围分别为0.08~10.00 ng/mL和1.95~250.00 ng/mL。黄瓜、番茄、包菜3种样品加标回收率为79.2%~112.1%(百菌清)和63.3%~97.5%(多菌灵),变异系数均低于18.9%,试纸条所需检测时间为20 min,可应用于蔬菜中百菌清、多菌灵残留的现场高通量快速筛查。

大肠杆菌O157:H7胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制

本文采用柠檬酸三钠还原法制备的胶体金溶液标记大肠杆菌O157:H7抗体(6C1E5),然后将其包被于金标垫上,再将大肠杆菌O157:H7抗体(10G1A2)和兔抗鼠IgG分别包被于硝酸纤维素膜作为检测线和质控线,研制出的大肠杆菌O157:H7胶体金免疫层析快速检测试纸检测灵敏度达104 CFU/mL,并与鼠寒沙门氏菌、蜡样芽孢杆菌等8种菌株无交叉反应,显示出较强的特异性。

胶体金免疫层析法在韭菜农药残留检测中的应用研究

为验证胶体金免疫层析技术在韭菜农残检测中的可靠性和适用性,选用3种不同的农残胶体金免疫层析快速检测产品(胶体金农残快检试剂)检测韭菜中腐霉利、吡虫啉、啶虫脒、多菌灵、克百威、三唑磷等6种农药残留,并将其与色谱质谱串联法进行比较,对其灵敏度、假阳性率及假阴性率进行验证评价。结果表明,在0.5 LOD的农药添加水平下,3种胶体金农残快检试剂对实验室空白样品的检测结果均为阴性;但当添加水平达到LOD或MLR时,其检测结果均为阳性,证明胶体金农残快检试剂灵敏度较高,且符合国家标准食品中农药最大残留限量要求;实验室加标试验和实际样品比对试验结果显示,胶体金农残快检技术与色谱质谱联用法的检测结果均无显著性差异(χ^(2)<3.84),其假阴性率和假阳性率均为0。故胶体金免疫层析法可在韭菜的农残快速检测中应用。

酶联免疫法与胶体金层析法对HIV抗体检测结果的比较

目的评估酶联免疫法与胶体金层析法对HIV抗体的检测性能。方法2021—2022年对3423份血液样本同时用酶联免疫法和胶体金层析法检测,以免疫印迹法为金标准确证结果。结果酶联免疫法检出有反应样本5份,胶体金层析法检出有反应样本9份,经免疫印迹实验确证阳性4份。酶联免疫法假阳性1份,假阳性率0.03%;胶体金层析法假阳性5份,假阳性率0.15%,2种方法差异无统计学意义(χ^(2)=2.64,P=0.26)。2种方法检测HIV抗体的灵敏度均为100%,酶联免疫法的特异度(99.97%)略高于胶体金层析法(99.85%),Kappa值均≥0.6,检测一致性较好。结论酶联免疫法和胶体金层析法均可用于HIV抗体检测,酶联免疫法的假阳性率更低,胶体金层析法操作更为简便,可结合实际需要选择合适的方式进行HIV筛查。

基于知识图谱分析胶体金免疫层析技术在食品检测领域中的研究进展

目的:全面深度透视胶体金免疫层析技术在我国食品检测领域的研究现状和发展趋势。方法:在中国知网搜索整理了近20年胶体金免疫层析技术在我国食品检测领域中的研究论文215篇,运用文献计量学理论,采用COOC软件进行可视化分析。通过发文年代、发文期刊、发文机构、作者、关键词几个维度,利用词云、共现网络、树形图、突现图等知识图谱,分析胶体金免疫层析技术在我国食品检测领域的研究进展。结果:根据发文年代划分了胶体金免疫层析技术在我国食品检测领域中的发展进程,通过共现网络提炼出当前头部研究机构和研究团队,对关键词进行发掘,综述了胶体金免疫层析技术检测目标物、产品等信息,并预测了今后发展的热点。结论:运用文献计量学方法,构建可视化的知识图谱,能更直观地归纳出该领域发展的特点及未来发展趋势,为该领域的研究者和使用者提供决策依据和参考借鉴。

猪轮状病毒胶体金检测试纸条的研制及应用

【目的】利用2株猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)单克隆抗体,研制胶体金检测试纸条,用于PoRV的临床快速检测。【方法】制备40 nm粒径的胶体金溶液标记单克隆抗体4G5,将单克隆抗体5G4和羊抗鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜上,作为检测线和质控线。通过优化胶体金溶液最适pH、标记抗体和检测抗体的最佳使用量,制备PoRV胶体金检测试纸条;对试纸条的灵敏度、敏感性、特异性、重复性和稳定性进行评价。通过检测50份猪粪便样品,计算试纸条与RT-PCR方法的符合率,最后采用试纸条进行1249份临床样品的测定。【结果】经优化后试纸条的最佳参数如下:胶体金溶液最佳pH为8.0,标记抗体4G5和检测抗体5G4最佳使用量分别为14.4μg/mL和1 mg/mL。试纸条能检测出1∶2000稀释的PoRV OSU株(G5型)病毒液,灵敏度为104.5TCID50/mL,且检测PoRV G9、G3和G4型毒株均为阳性。检测猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)、猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)和猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)均为阴性。批内和批间重复性、稳定性良好。检测50份猪粪便样品,与RT-PCR方法的阳性符合率为97.5%(39/40),阴性符合率为100%(10/10),总体符合率为98%(49/50)。检测2022年在河南、山西省猪场收集的临床样品1249份,阳性检出率为5.2%。【结论】本研究制备的PoRV胶体金检测试纸条具有良好的敏感性、特异性和重复性等优点,与RT-PCR方法的符合率较高,可用于规模化猪场PoRV的快速检测。

胶体金免疫层析法快速检测山药中的咪鲜胺

目的建立胶体金免疫层析法快速检测咪山药基质中的鲜胺残留量的方法。方法优化前处理过程中提取剂的pH和用量,将胶体金免疫层析快速检测方法应用于山药基质,验证方法的检出限、特异性、假阴性率和假阳性率,并通过液相色谱-串联质谱法确认方法的准确性。结果胶体金免疫层析法快速检测山药中咪鲜胺的检出限为0.3 mg/kg,假阳性率为2%,假阴性率为0;与咪鲜胺-脱氨基咪唑、咪鲜胺锰盐和咪鲜胺-脱咪唑甲酰胺基的交叉反应率分别为200%、100%、100%,可同时检测咪鲜胺及含有2,4,6-三氯苯酚部分的代谢物,实际样本的检测结果与液相色谱-串联质谱法的符合率为88.2%。结论本方法操作简便,检测速度快,准确性高,可应用于基层行政、农产品交易市场或餐饮配送公司快速检测实验室,从源头上保障食品安全。

大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析检测试纸条在感染牛和小鼠排菌检测中的应用

为了检验大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析检测试纸条在感染动物排菌中的应用效果,将牛和小鼠采用灌胃攻毒方式试验感染大肠杆菌O157∶H7,用大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析检测试纸条、细菌鉴别培养基培养计数以及PCR 3种方法检测感染动物粪便中O157∶H7的排菌量和持续时间。牛在感染大肠杆菌O157∶H7后的第2天开始从粪便排菌,第4天达到峰值,排菌时间可持续28d;小鼠在感染O157∶H7后的第4小时开始从粪便排菌,第6小时达到峰值,排菌时间可持续15d。大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析检测试纸条、细菌鉴别培养基培养计数以及PCR 3种方法的检测结果一致,但试纸条更简便、快捷、直观,1～5min可得出检测结果,便于现场检测样品中O157∶H7的快速筛查。

犬利什曼抗体胶体金免疫层析试纸的制备与性能评价

试验旨在建立一种快速检测犬利什曼原虫病的方法,采用利什曼重组抗原63 kDa糖蛋白(gp63)和鼠免疫球蛋白G(IgG)抗体,以信号放大技术制备胶体金免疫层析检测试纸,通过测试犬艾利希(Ehrlichia)、犬莱姆(Lyme)、犬巴贝斯(Babesia)、犬心丝虫(CHW)和犬利什曼(LSH)的阳性样本,对该方法的灵敏度、特异性、重复性和稳定性进行了验证。结果显示,该检测试纸测试Ehrlichia、Lyme、Babesia和CHW阳性样本均为阴性,对已确定的LSH阳性样本的检测最高稀释梯度达到1∶480。该检测试纸与ELISA试剂盒的检测结果符合率为98.08%,与rk28利什曼抗体试纸条检测结果进行对比,阳性检出率更高。研究表明,LSH抗体胶体金免疫层析试纸的灵敏度高,特异性好,适用于犬利什曼原虫病的现场快速诊断。