蚕豆（Vicia faba L．）叶肉细胞中ABA的胶体金免疫电镜定位

利用胶体金免疫电镜定位技术对蚕豆叶肉细胞中ＡＢＡ定位的研究表明，在以ＡＢＡ抗体处理的切片中，叶绿体有大量的金颗粒标记，细胞质和细胞核也有金颗粒标记，但液泡和细胞壁中没有金颗粒标记。免疫染色前用胰蛋白酶处理可显著增强金颗粒标记密度，而不用ＥＤＣ固定或以免疫前兔血清处理的切片中几乎没有金颗粒标记。本实验为蚕豆叶肉细胞中ＡＢＡ的分布提供了直接的证据并说明了该技术是研究ＡＢＡ定位的一种可靠的方法。

葡萄种子细胞中脱落酸的胶体金免疫电镜定位

用胶体金免疫电镜技术，对脱落酸（ABA）在葡萄种子细胞超微结构水平上的分市进行了研究。按葡萄种子细胞液泡中是否含有电子密度大的染色物质，可将其分为含酚和无酚2个主要类型。在含酚细胞中电子密度大的染色物质呈多种状态存在，先是均匀而稀疏地分布在液池中，然后逐渐凝聚成块状，最后浓缩成一薄层并均匀分布在液泡膜内侧。无酚细胞中金颗粒主要标记在细胞核和细胞质，特别是细胞核有大量金颗粒标记，细胞壁有少量金颗粒标记，液泡中没有发现金颗粒标记。和无酷细胞相似，在含酚细胞中金颗粒主要标记在细胞核和细胞质，特别是细胞核金颗粒密度很大，细胞壁有极少金颗粒标记。引人注目的是液泡中聚集态的染色物质上也发现金颗粒标记，但稀疏而均匀分布的染色物质上几乎找不到金颗粒标记，当染色物质最终浓缩成薄层状态时则发现有大量的金颗粒标记。无论用免疫前兑血清染色的对照切片还是材料，不被EDC固定的对照切片中都很难找到金颗粒标记，说明该ABA免疫胶体金电镜定位结果是特异、可靠的。

绿豆上胚轴细胞中BR的胶体金免疫电镜定位

利用葡萄球菌A蛋白与胶体金连接的复合物为探针的免疫电镜定位技术对绿豆上胚轴细胞中BR定位的结果表明，在用抗BR抗体处理的超薄切片中，叶绿体、核仁和液泡内有大量的金颗粒标记，细胞膜和淀粉粒也有金颗粒标记，但细胞壁中没有观察到金颗粒。在不用EDC固定的切片中，金颗粒标记密度非常低，而在用正常兔血清处理的切片中，所有细胞器内几乎没有金颗粒.该实验为绿豆上胚轴细胞中BR的分布提供了直接的证据。

光敏细胞质不育小麦花药发育过程中ABA免疫电镜定位

运用胶体金免疫电镜定位方法研究了不同光周期条件下光敏细胞质不育小麦花药发育过程中 ABA的分布 .短日照条件下 ,花粉母细胞细胞质基质及小液泡内有金颗粒分布 ;单核至二核花粉时期花粉内金颗粒逐渐增多 ,二核至成熟花粉时期花粉内金颗粒逐渐减少 ,不同发育时期的花粉内金颗粒的分布位置有变化 .绒毡层或降解中的绒毡层细胞内有较多金颗粒分布 .长日照条件下花粉败育 ,不同发育时期的花粉内金颗粒分布数量均比同时期的可育花粉内明显增多 .单核期以前败育的花粉 ,解体的花粉细胞质及细胞核内有较多金颗粒分布 ;后期败育的花粉 ,花粉母细胞至二核花粉时期花粉 (母细胞 )内金颗粒有不断增加的趋势 ,二核期以后 ,花粉逐渐液泡化 ,解体的花粉细胞质及逐渐增大的中央液泡内有大量的金颗粒分布 .绒毡层细胞内金颗粒有逐渐减少的趋势 .文中对 ABA在雄蕊、花粉发育过程中的作用、由光周期诱导的 ABA含量增加在雄性不育中的作用进行了讨论 .

电镜免疫金标记在大肠癌细胞GST-Pi定位中的应用

目的 探讨免疫电镜胶体金技术在大肠癌细胞GST -Pi定位中的应用及某些关键技术环节的处理。方法 应用免疫电镜胶体金技术对 6例大肠癌及 3例正常大肠粘膜细胞进行GST -Pi的定位观察。结果 大肠粘膜细胞结构清晰 ,金颗粒呈团状、点灶状分布 ,特异性强 ,无非特异性散在金颗粒。结论 免疫电镜金标记技术是大肠癌细胞GST -Pi超微结构定位的有效方法。对某些关键性技术环节的处理是获得理想免疫金染色切片的保证。

水稻Rubisco及其活化酶的免疫金标定位

采用免疫胶体金标记电镜技术对水稻叶片中的Rubisco及其活化酶进行细胞器定位,结果表明Rubisco主要分布于叶绿体,Rubisco活化酶特异性分布于叶绿体和线粒体中,预示Rubisco活化酶可能具有除活化钝化态Rubisco以外的其他功能.

大肠癌细胞GST-Pi免疫细胞化学的超微结构定位

探讨 GST- Pi在大肠癌细胞内亚微结构定位及其与大肠癌发生的关系。应用免疫电镜技术 (免疫胶体金法 )对 6例大肠腺癌及 3例正常大肠粘膜细胞进行 GST- Pi的定位观察。 6例大肠癌细胞内均出现 GST- Pi胶体金阳性颗粒 ,主要分布于胞浆的线粒体、溶酶体、近胞膜部位的胞浆中 ,也分布在核内和核膜上。金颗粒呈团状、点灶状分布 ,图象清晰。 3例正常粘膜细胞内未见 GST- Pi的金颗粒阳性表达。结果表明 ,GST- Pi在癌细胞内的特异性表达可作为大肠癌的诊断指标之一。

免疫电镜技术在植物病毒研究中的应用和进展

早在1941年 Anderson 和 Stanley 曾在电镜下,观察到烟草花叶病毒(TMV)抗血清与抗原结合的络合物,然而免疫电镜技术直接应用于植物病毒诊断和研究,还是从本世纪六十年代开始,七十年代以来才发展较快。由于免疫电镜取样很省,

外周血细胞中溶菌酶的免疫电镜检测技术

我们选择特异性抗溶菌酶抗体,应用胶体金免疫电镜检测技术,对人外周血细胞进行溶菌酶的超微结构定位。旨在探讨胶体金免疫电镜检测技术在患者外周血细胞中的应用。材料与方法 (一)组织标本抽取静脉血3～4ml,1000γ/分钟离心10分钟。然后吸去表面血浆,用2.5％戊二醛,1％锇酸双重固定。按常规电镜技术进行脱水、浸透、环氧树脂Epon 812包埋或采用存档数年的聚合块。

内皮素－1免疫金标电镜技术应用的体会

内皮素－１免疫金标电镜技术应用的体会张桂香，陆江阳，李玲，杨建法（北京解放军３０４医院病理科电镜室，北京１０００３７）将胶体金作为一种特异的标记方法，近年来应用越来越广泛，它不仅可用于透射电镜也可用于扫描电镜及其它生物大分子定位、定性、形态发生、抗原...

泡桐丛枝病发生特异相关蛋白质亚细胞定位及质谱鉴定

借助胶体金免疫电镜和质谱分析技术,利用制备的专化性抗体,进行豫杂一号泡桐丛枝病发生特异相关蛋白质(m24ku,pI6.8)叶片和茎尖的亚细胞定位和质谱鉴定研究。结果显示:豫杂一号泡桐丛枝病发生特异相关蛋白质分布于健康苗叶片和茎尖细胞的细胞壁、液泡和叶绿体部位,患病幼苗叶片和茎尖细胞相同亚细胞器部位未发现该蛋白质的存在,进一步表明植原体侵染阻断了此蛋白的合成。此外,基质辅助激光解吸飞行时间质谱仪(MALDI-TOF-MS)分析该特异蛋白后,通过查询MSDB数据库初步断定该特异相关蛋白为水稻叶绿体分子伴侣Q6K822-ORYSA的同源蛋白。

葡萄幼苗对温度逆境交叉适应过程中HSP70在叶片中的亚细胞定位

为了进一步分析热激蛋白在温度锻炼诱导的交叉适应性形成过程中的保护功能,此文以葡萄(Vitis vinifera L.cv.Jingxiu)幼苗为试材,采用胶体金免疫电镜定位技术,定位观察了HSP70在葡萄叶片中的亚细胞分布情况。结果表明,低温锻炼预处理可增强其在高温胁迫条件下的表达水平,细胞核和叶绿体中代表HSP70的免疫金颗粒密度比相应的对照细胞明显增多,尤其是胁迫处理3 h时。与低温锻炼相似,高温锻炼预处理增强了葡萄叶片在高温胁迫下细胞核和叶绿体中HSP70的表达量。这一结果为HSP70参与温度锻炼诱导的交叉适应性提供了更直观的细胞学证据。

低温锻炼诱导葡萄幼苗的耐热性过程中sHSP17．6在叶片中的亚细胞定位

为了探讨热激蛋白在低温锻炼诱导的耐热性形成过程中的保护功能,进一步分析葡萄幼苗对温度逆境产生交叉适应性的细胞学机制,试验以葡萄(Vitis vinifera L. cv. Jingxiu)幼苗为试材,采用胶体金免疫电镜定位技术,定位观察了小分子热激蛋白17.6(sHSP17.6)在葡萄叶片中的亚细胞分布情况,结果表明,低温锻炼预处理可增强其在高温胁迫条件下的表达水平,细胞核和叶绿体中代表sHSP17.6的免疫金颗粒密度比相应的对照细胞明显增多,尤其是胁迫处理3 h时。这一结果为sHSP17.6参与低温锻炼诱导的耐热性提供了更直观的细胞学证据。

小麦与白粉病菌互作中β-1,3-葡聚糖的细胞定位

利用免疫胶体金方法对小麦与白粉病菌互作过程中 β 1,3 葡聚糖酶底物 ,即β 1,3 葡聚糖的合成与分布情况进行了研究。结果发现 ,白粉病菌的所有器官包括分生孢子、附着胞、入侵栓、吸器和菌丝中均未发现 β 1,3 葡聚糖存在 ;相反 ,β 1,3 葡聚糖是小麦各种细胞壁的正常组分 ,在气孔保卫细胞、纤维细胞、导管分子等的细胞壁中含量非常丰富。病原菌的侵染导致植物细胞中β 1,3 葡聚糖的合成增加 ,但在乳突结构中不含 β 1,3 葡聚糖。以上结果说明 ,往小麦中导入外源 β 1,3 葡聚糖酶基因并高效表达 ,不会对病原菌结构产生直接的破坏和抑制作用 ;相反 。

肾脏内皮素的定位研究与血浆水平的测定

肾脏内皮素的定位研究与血浆水平的测定目的：探讨内皮素（ＥＴ）与肾小球肾炎的关系。方法：建立改良慢性血清病大鼠系膜增生性肾炎动物模型，采用＾１２５｜Ｉ－ＥＴ放射免疫分析法测定肾炎组与对照组右心血和肾静脉血中ＥＴ－１的水平。应用免疫组化及免疫电镜方法进行...

蓝氏贾第鞭毛虫α-4贾第素特异性多克隆抗体的制备及免疫电镜定位研究

目的制备针对蓝氏贾第鞭毛虫α-4贾第素的特异性抗体,免疫胶体金电镜观察该贾第素的亚细胞定位。方法生物信息学分析并合成α-4贾第素抗原肽,与钥孔血蓝蛋白(KLH)偶联后免疫新西兰白兔,Protein A亲和层析纯化抗血清,采用α-4贾第素重组蛋白和贾第虫滋养体全虫体裂解物通过Western blot验证抗血清结合力和结合特异性,选择高特异性抗体通过免疫胶体金电镜观察α-4贾第素的亚细胞定位。结果筛选出3段可能的抗原肽,合成的抗原肽与KLH偶联后免疫兔得到高效价抗血清,Protein A纯化效果良好;3种纯化抗血清均能与α-4贾第素结合,其中anti-P2具有较高的抗原结合特异性。采用anti-P2进行免疫胶体金电镜,显示α-4贾第素主要定位于鞭毛,胞浆也有少量散在表达。结论制备的α-4贾第素多克隆抗体具有抗原结合特异性。用anti-P2进行免疫胶体金电镜,α-4贾第素主要定位于贾第虫鞭毛。

纳米尺度神经细胞膜蛋白单分子免疫细胞化学三维定位方法的建立

目的 建立纳米尺度神经细胞膜表面蛋白单分子三维标记的免疫细胞化学方法。方法 应用原子力显微镜 ,对分布在云母表面的抗NMDAR1亚基IgG 葡萄球菌蛋白A 胶体金颗粒免疫标记复合物分子进行扫描 ,明确其特定的三维结构作为对照标准 ,然后扫描结合了免疫标记复合物分子的神经细胞膜表面 ,对表面形貌作出对比后确定目的抗原的定位和复合物三维结构。并与激光共聚焦免疫荧光方法对比。结果 在空白云母表面 ,免疫复合物分子在原子力显微镜下呈现出均匀分散粒径为 4 9nm的特征性球形结构。在神经元表面结合免疫标记物后可以发现有大量的粒径为 5 3nm的球形或双球形 (短棒状 )结构 ,颗粒均匀 ,截面为双峰或单峰。而在LSCM下荧光呈颗粒点状分布 ,为多个FITC聚集显色的结果。结论 原子力显微镜下免疫胶体金标记技术可以在纳米尺度对目的膜受体蛋白进行定位和表面三维结构测定。NMDA受体蛋白可以结合 1个或 2个胶体金复合物 ,与LSCM相比 ,原子力显微镜下胶体金标记方法可以对单个膜NMDA受体蛋白抗原进行定位、定性、定量标记测定。

家蚕病原性微孢子虫极丝蛋白的研究

从家蚕微孢子虫 (Nosemabombycis,简称N .b)和蓝萤叶甲微孢子虫 (MPa)中抽提了极丝蛋白 (PTP) ,进行SDS PAGE分析。并选择性分离、纯化了N .b孢子中主要极丝蛋白 ,经氨银染色法鉴定其纯度较纯。将N .b孢子中该主要极丝蛋白免疫家兔制备多克隆抗体 ,用酶联免疫法 (ELISA)测定其效价 ,滴度为 1∶10 2 40 0。利用制得的抗体进行胶体金标记免疫电镜定位观察 ,发现所纯化蛋白确实存在于极丝上。