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胶体金免疫层析试验在梅毒抗体检测中的价值及适用范围研究 被引量:1
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作者 石杜娟 《安徽医学》 2024年第2期185-190,共6页
目的 通过比较胶体金免疫层析试验(GICA)与酶联免疫吸附试验(ELISA)、光激化学发光法(LICA)、化学发光免疫分析法(CLIA)对梅毒螺旋体抗体检测的性能指标,探寻GICA法在检测梅毒螺旋体抗体的价值以及患者自检的可能。方法 选取2022年2~5... 目的 通过比较胶体金免疫层析试验(GICA)与酶联免疫吸附试验(ELISA)、光激化学发光法(LICA)、化学发光免疫分析法(CLIA)对梅毒螺旋体抗体检测的性能指标,探寻GICA法在检测梅毒螺旋体抗体的价值以及患者自检的可能。方法 选取2022年2~5月收集的合肥市滨湖医院住院患者、门诊就诊者以及体检者共143人份血清标本,同时采用GICA、LICA、ELISA、CLIA、梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)进行梅毒螺旋体抗体检测。以TPPA结果为金标准,分析GICA与LICA、ELISA、CLIA的灵敏度、特异度、阴性预测值、阳性预测值,并与TPPA比较得出一致性以及符合率;通过绘制出GICA、LICA、ELISA、CLIA的受试者工作特征(ROC)曲线并对曲线下面积进行比较;根据计算所得最佳临界值进行分区,比较不同区间的TPPA符合率与GICA的TPPA符合率大小。结果GICA的特异度与ELISA、LICA比较,差异有统计学意义(P<0.05);GICA的特异度和阳性预测值均高于CLIA,差异有统计学意义(P<0.05)。GICA与TPPA的符合率均高于ELISA、LICA、CLIA,差异有统计学意义(P<0.05)。ELISA和LICA与GICA的符合率均高于CLIA与GICA的符合率,差异有统计学意义(P<0.05)。通过交叉示意图可见,GICA阳性时至少伴有其他2种方法同时阳性。GICA的ROC曲线下面积与ELISA、LICA、CLIA相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。分区后发现ELISA、LICA和CLIA的S/CO值(样本吸光值/临界值)分别在1.00~12.00、1.00~10.00、1.00~4.00时的TPPA符合率与GICA的TPPA符合率存在统计学差异(P<0.05)。结论 GICA作为快速诊断梅毒的重要手段,其各项指标均优于ELISA、LICA、CLIA,还能作为此3种方法初筛梅毒抗体阳性后的复检方法,为日后患者自检模式的实现也提供了可能性。 展开更多
关键词 梅毒 梅毒螺旋体抗体 胶体金免疫层析试验 化学发光免疫分析法 光激化学发光法 酶联免疫吸附试验
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胶体金免疫层析法与酶联免疫吸附试验在梅毒螺旋体特异性抗体检测中的应用分析 被引量:1
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作者 颜娟娟 邹富梅 《现代诊断与治疗》 CAS 2024年第3期423-425,共3页
目的探究梅毒螺旋体特异性抗体检测中胶体金免疫层析法(GICA)与酶联免疫吸附试验(ELISA)的应用价值。方法选取2020年7月至2022年9月我院收治的80例疑似梅毒感染患者,均接受GICA、ELISA、TPPA检查。以TPPA结果为“金标准”,分析GICA、EL... 目的探究梅毒螺旋体特异性抗体检测中胶体金免疫层析法(GICA)与酶联免疫吸附试验(ELISA)的应用价值。方法选取2020年7月至2022年9月我院收治的80例疑似梅毒感染患者,均接受GICA、ELISA、TPPA检查。以TPPA结果为“金标准”,分析GICA、ELISA检查结果;分析GICA、ELISA诊断价值,并计算一致性进行;另对比GICA、ELISA检测满意度。结果相比于ELISA检测,GICA检测诊断灵敏度、准确度及阴性预测值均较高(P<0.05)。一致性检验,GICA诊断一致性尚可(kappa值=0.771,P=0.000),ELISA诊断一致性不佳(kappa值=0.385,P=0.000)。相比于ELISA检测,GICA检测满意度较高(P<0.05)。结论GICA与ELISA均可在梅毒螺旋体特异性抗体中进行检测,但GICA检测应用价值更高,一致性较强,且患者满意度较高,可将其作为首选检测方法。 展开更多
关键词 梅毒螺旋体特异性抗体 胶体金免疫层析法 酶联免疫吸附法 明胶颗粒凝集试验
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鸭坦布苏病毒E蛋白Domain Ⅲ单克隆抗体胶体金试纸条的创制及应用 被引量:4
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作者 阚莹 张淼 +8 位作者 卢奇 吕炫 于胜祖 王习强 姜雅倩 王蓓 朱英奇 王晴 王桂军 《中国动物检疫》 CAS 2023年第2期131-138,共8页
为建立一种快速诊断鸭坦布苏病毒(DTMUV)的方法,以2株(B9D7B8G10和B9D10C7株)抗DTMUV的单克隆抗体制备DTMUV胶体金免疫层析试纸条。采用经典的柠檬酸钠还原法制备胶体金溶液,利用rProtein G琼脂糖凝胶亲和层析法对两株单克隆抗体腹水进... 为建立一种快速诊断鸭坦布苏病毒(DTMUV)的方法,以2株(B9D7B8G10和B9D10C7株)抗DTMUV的单克隆抗体制备DTMUV胶体金免疫层析试纸条。采用经典的柠檬酸钠还原法制备胶体金溶液,利用rProtein G琼脂糖凝胶亲和层析法对两株单克隆抗体腹水进行纯化并鉴定;以纯化的B9D7B8G10株单克隆抗体作为标记抗体,通过调节单克隆抗体浓度与pH确定胶体金探针最佳结合条件;同时,在硝酸纤维素膜(NC膜)检测带包被纯化的B9D10C7株单克隆抗体,质控带包被山羊抗小鼠IgG抗体,建立检测DTMUV胶体金免疫层析试纸条;成功建立试纸条后,对试纸条敏感性、特异性、重复性和稳定性进行检测,并与RT-PCR检测方法进行比较,对200份临床疑似感染样品进行检测。结果显示:制备的胶体金试纸条在15 min内即可完成检测,最低检测稀释度为1:50,且不与鸭瘟病毒、番鸭细小病毒、鹅星状病毒、禽白血病病毒发生交叉反应;应用试纸条和RT-PCR方法分别对200份临床疑似样品进行检测,两者符合率达98%。结果表明,制备的胶体金试纸条敏感性高、特异性强、稳定性好、重复性好,为DTMUV的快速检测提供了一种实用检测技术。 展开更多
关键词 鸭坦布苏病毒 胶体金 单克隆抗体 免疫层析试纸条
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雌二醇单克隆抗体制备及胶体金侧流层析免疫分析方法的建立
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作者 王金魁 丁明月 +3 位作者 毛烨炫 宋莲军 黄现青 张西亚 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2023年第18期201-210,共10页
目的探讨雌二醇(17β-estradiol,E2)的3号位和17号位引入活性基团制备的半抗原对抗体灵敏度的影响,选用灵敏度较高的抗体建立一种牛奶中E2胶体金侧流层析免疫分析方法(colloidalgold-basedlateral flow immunoassay,CG-LFA)。方法从E2的... 目的探讨雌二醇(17β-estradiol,E2)的3号位和17号位引入活性基团制备的半抗原对抗体灵敏度的影响,选用灵敏度较高的抗体建立一种牛奶中E2胶体金侧流层析免疫分析方法(colloidalgold-basedlateral flow immunoassay,CG-LFA)。方法从E2的3号位羟基和17号位羟基引入活性基团分别制备半抗原H1a和H2,偶联载体蛋白制备完全抗原,经过动物免疫和细胞融合筛选,制备单克隆抗体(monoclonal antibodies,mAbs),采用间接竞争酶联免疫吸附实验(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,icELISA)对mAbs性能进行评估,筛选出灵敏度最高的mAb,最后采用静电吸附法将胶体金标记抗体为探针,构建牛奶中E2的CG-LFA。结果制备了H1a-7B7、H1a-7B12、H1a-9C7、H1a-10E7、H2-2E2、H2-3C10、H2-4A10和H2-6D28种mAbs,经过icELISA评估,其半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)分别为0.116、0.207、0.072、0.370、0.442、6.170、0.415和4.411 ng/mL,最终选取H1a-9C7,构建牛奶中E2的LFA,消线(cut-off)值为6.00ng/mL,与苯甲酸雌二醇和雌三醇的交叉反应率分别为101.31%和2.43%,在真实样本加标回收实验中,检测结果与液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)结果一致。结论E2的3号位引入活性基团设计合成的半抗原所制备的E2抗体灵敏度,比17号位引入活性基团制备的抗体灵敏度高,并且建立的LFA准确度良好,为牛奶中E2快速检测提供了一定的技术手段。 展开更多
关键词 雌二醇 单克隆抗体 间接竞争酶联免疫吸附实验 胶体金侧流层析免疫分析
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干化学法和胶体金单克隆抗体法在尿液血红蛋白试验中的比较 被引量:1
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作者 黄燕婷 谭智毅 《吉林医学》 CAS 2013年第21期4341-4341,共1页
目的:探讨如何合理利用干化学法和胶体金单克隆抗体法检测尿液血红蛋白。方法:选择200例干化学法检测尿隐血阴性而尿沉渣分析仪检测红细胞超出参考范围的患者标本离心镜检红细胞,同时采用胶体金单克隆抗体法检测尿隐血;另外选择200例干... 目的:探讨如何合理利用干化学法和胶体金单克隆抗体法检测尿液血红蛋白。方法:选择200例干化学法检测尿隐血阴性而尿沉渣分析仪检测红细胞超出参考范围的患者标本离心镜检红细胞,同时采用胶体金单克隆抗体法检测尿隐血;另外选择200例干化学法检测尿隐血阳性而尿沉渣分析仪检测红细胞在参考范围内的患者标本离心镜检红细胞,同时采用胶体金单克隆抗体法检测尿隐血。结果:干化学法检测尿血红蛋白可致假阳性或假阴性,胶体金单克隆抗体法没有干扰物质,特异性强,结果准确。结论:尿液干化学分析仪检测尿隐血在日常工作中起普及和过筛作用,当测定结果可疑时,应采用胶体金单克隆抗体法检测予以校正。 展开更多
关键词 干化学法 胶体金单克隆抗体 血红蛋白
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产单核细胞李氏杆菌内化素G单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的建立
6
作者 马金锐 史文静 +8 位作者 田常青 董志杰 赵学慧 芝吉 曹青 魏衍全 宋维丽 薛惠文 苟惠天 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期4069-4076,共8页
本研究旨在建立一种快速检测产单核细胞李氏杆菌的方法。通过PCR扩增产单核细胞李氏杆菌(LM)内化素G(InlG)基因,构建pET-32a-InlG重组表达载体,通过诱导表达获得InlG重组蛋白,将其纯化后免疫小鼠(100μg·只^(-1)),经细胞融合、克... 本研究旨在建立一种快速检测产单核细胞李氏杆菌的方法。通过PCR扩增产单核细胞李氏杆菌(LM)内化素G(InlG)基因,构建pET-32a-InlG重组表达载体,通过诱导表达获得InlG重组蛋白,将其纯化后免疫小鼠(100μg·只^(-1)),经细胞融合、克隆和筛选共获得了3株阳性杂交瘤细胞株,分别命名为1D2、1D2-1和2H10。经鉴定,其分泌抗体亚型均为IgG 1。利用制备的1D2-1作为捕获抗体,产单核细胞李氏杆菌兔多抗作为检测抗体,初步建立检测产单核细胞李氏杆菌的双抗体夹心ELISA方法。Western blot结果显示3株单克隆抗体(mAb)与InlG均可发生特异性反应。双抗体夹心ELISA方法的特异性试验结果显示,与沙门菌、大肠杆菌、枯草杆菌、白色葡萄球菌和柠檬色葡萄球菌均不发生反应。灵敏度试验结果显示,该方法检测LM纯培养物的检测限为1.0×10^(6)CFU·mL^(-1)。重复性试验结果显示,各组变异系数在5%~10%之间(<10%)。综上,本研究利用抗内化素G蛋白的mAb和兔多抗建立了双抗体夹心ELISA方法,该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可用于产单核细胞李氏杆菌感染的快速诊断检测。 展开更多
关键词 产单核细胞李氏杆菌 内化素G 单克隆抗体 酶联免疫吸附试验
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啶酰菌胺单克隆抗体制备及其试纸条的研究
7
作者 朱亮亮 王磊 +2 位作者 杨洪丹 孟庆林 万宇平 《中国酿造》 CAS 北大核心 2024年第11期249-253,共5页
啶酰菌胺是一种新型烟酰胺类杀菌剂,常用来防治果蔬各种类型的真菌病害。为构建一种啶酰菌胺简便、准确的检测方法,该实验首先应用啶酰菌胺人工抗原免疫BALB/c小鼠,免疫后取小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞进行融合,筛选得到可产生啶酰菌胺单... 啶酰菌胺是一种新型烟酰胺类杀菌剂,常用来防治果蔬各种类型的真菌病害。为构建一种啶酰菌胺简便、准确的检测方法,该实验首先应用啶酰菌胺人工抗原免疫BALB/c小鼠,免疫后取小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞进行融合,筛选得到可产生啶酰菌胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株,随后建立了啶酰菌胺的胶体金免疫层析方法。结果表明,所制备的啶酰菌胺单克隆抗体特异性强,选取了蔬菜水果中可能与啶酰菌胺联合用药的17种药物进行特异性测定,均未产生交叉反应,灵敏度高,半数抑制浓度(IC_(50))值为1.03 ng/mL;建立的胶体金免疫层析法对蔬菜水果的检测限为5μg/L,符合GB 2763—2021《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》规定的最大残留限量要求,可用于实际样品中啶酰菌胺残留的快速检测,具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 啶酰菌胺 单克隆抗体 胶体金免疫层析技术
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胶体金单克隆抗体在尿隐血检测中的应用 被引量:3
8
作者 李红红 李明勇 滕飞鹏 《检验医学与临床》 CAS 2008年第6期349-350,共2页
目的通过在尿常规检测中使用单克隆抗体法检测尿液中血红蛋白,为临床提供血管内溶血及泌尿道出血的可靠依据。方法在日常尿常规检查中,随机同步使用单克隆抗体法检测尿隐血,检测结果严格对比,同时采用四格表法探讨其阳性预测值;阴性预... 目的通过在尿常规检测中使用单克隆抗体法检测尿液中血红蛋白,为临床提供血管内溶血及泌尿道出血的可靠依据。方法在日常尿常规检查中,随机同步使用单克隆抗体法检测尿隐血,检测结果严格对比,同时采用四格表法探讨其阳性预测值;阴性预测值等。结果筛选出三项检查结果不一致的标本59例,分组比较,重点分析干化学隐血阳性,而镜检红细胞阴性,使用胶体金单克隆抗体隐血试验确证。结论建议尿常规应同步使用胶体金单克隆抗体法检测尿隐血,对尿液中无完整的红细胞,而存在游离血红蛋白的尿样本起确证作用,进一步完善尿液的常规检查。 展开更多
关键词 尿干化学法 隐血试验 胶体金单克隆抗体试验
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鱼类致病性豚鼠气单胞菌单克隆抗体-胶体金检测方法的建立 被引量:17
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作者 黄艺丹 汪开毓 +1 位作者 郑建 黄锦炉 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期509-516,共8页
以福尔马林灭活的豚鼠气单胞菌按2.5×107个/只和5.0×107个/只分成两个剂量组免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术制备针对豚鼠气单胞菌的单克隆抗体(McAb),用间接ELISA法对所需的杂交瘤细胞株进行特异性筛选,获得了2株可分泌特异性... 以福尔马林灭活的豚鼠气单胞菌按2.5×107个/只和5.0×107个/只分成两个剂量组免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术制备针对豚鼠气单胞菌的单克隆抗体(McAb),用间接ELISA法对所需的杂交瘤细胞株进行特异性筛选,获得了2株可分泌特异性McAb的杂交瘤细胞,并分别命名为3F3和2C9C3。经过鉴定,这两株McAb能够特异性的针对豚鼠气单胞菌,其抗体亚类分别为IgG1型和IgM型;腹水效价分别为10-6和10-5;相对亲和力较高;3F3针对豚鼠气单胞菌脂多糖表位,而2C9C3针对非脂多糖抗原位点。利用实验制备的McAb建立了以McAb为基础的双抗夹心法膜式超灵敏胶体金快速检测方法,所研制的豚鼠气单胞菌胶体金快速检测卡灵敏度好,特异性高,重复性好,检测时间快,操作简便,为水产上豚鼠气单胞菌的快速鉴定和诊断以及该菌流行的监测提供有力的工具。 展开更多
关键词 豚鼠气单胞菌 单克隆抗体 生物特性 胶体金
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玉米赤霉烯酮单克隆抗体的制备及胶体金免疫层析法的建立 被引量:15
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作者 骆敏儿 唐勇 +3 位作者 向军俭 张晓丽 付强强 王宏 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期729-733,共5页
目的制备并鉴定玉米赤霉烯酮(ZEN)单克隆抗体(mAb),并初步建立ZEN的胶体金免疫层析检测方法。方法采用活泼酯法制备人工抗原ZEN-OVA和ZEN-BSA,以ZEN-OVA作为免疫原制备ZEN mAb。ELISA法鉴定抗体效价、亚类、特异性等。ZEN mAb-胶体金复... 目的制备并鉴定玉米赤霉烯酮(ZEN)单克隆抗体(mAb),并初步建立ZEN的胶体金免疫层析检测方法。方法采用活泼酯法制备人工抗原ZEN-OVA和ZEN-BSA,以ZEN-OVA作为免疫原制备ZEN mAb。ELISA法鉴定抗体效价、亚类、特异性等。ZEN mAb-胶体金复合物包被于胶体金结合垫上,检测原ZEN-BSA和山羊抗小鼠IgG分别结合于硝酸纤维膜上作为检测线(T线)和质控线(C线),建立ZEN的胶体金免疫层析检测法。结果经紫外分光光度法和SDS-PAGE鉴定,ZEN人工抗原合成成功。经3次克隆化后,筛选出1株能稳定分泌ZEN mAb的杂交瘤细胞株1G4,腹水效价为1∶1.6×105;抗体亚类为IgG2b;对ZEN的IC50为10.2 ng/mL,检测限为0.58 ng/mL。mAb对ZEN具有高度的特异性,除与β-玉米赤霉烯醇的交叉反应率为12.8%外,与其他ZEN代谢物α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、玉米赤霉酮及其他相似毒素呕吐毒素、伏马毒素、赭曲霉素A等几乎无交叉反应。制备的胶体金免疫层析试纸条在5 min内即可肉眼观察到结果,对ZEN的最低检测限为100 ng/mL。结论成功制备出1株ZEN mAb,并初步建立了其胶体金免疫层析检测方法,最低检测限为100 ng/mL。 展开更多
关键词 玉米赤霉烯酮 单克隆抗体 胶体金免疫层析法
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抗吗啡单克隆抗体的制备及其胶体金交联物的初步应用 被引量:7
11
作者 谢鑫 金伯泉 +4 位作者 朱勇 刘雪松 王文学 李笑松 吴汉源 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期395-396,共2页
目的 :制备吗啡特异性单克隆抗体 (mAb)。方法 :将吗啡分子与兔血清白蛋白或牛血清白蛋白交联 ,免疫BALB/c小鼠并检测免疫效价后 ,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗吗啡mAb。将纯化mAb与胶体金颗粒交联后利用纸层析技术进行标本检测。结果 ... 目的 :制备吗啡特异性单克隆抗体 (mAb)。方法 :将吗啡分子与兔血清白蛋白或牛血清白蛋白交联 ,免疫BALB/c小鼠并检测免疫效价后 ,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗吗啡mAb。将纯化mAb与胶体金颗粒交联后利用纸层析技术进行标本检测。结果 :成功地制备了 3株抗吗啡mAb ,利用其中 1株抗体制备的胶体金试纸条 ,检测样品灵敏度达 2 0 0 μg/L。 结论 展开更多
关键词 毒品滥用 单克隆抗体 胶体金
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吗啡和甲基安非他明单克隆抗体联合胶体金检测试卡的研制 被引量:12
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作者 姜燕 吕昌龙 单风平 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期637-640,共4页
目的:研制吗啡-甲基安非他明单克隆一步法毒品二合一胶体金检测试卡,用于毒品的检测和可疑人群的筛查。方法:应用杂交瘤技术制备抗吗啡-甲基安非他明的单克隆抗体(McAb);ELISA方法检测McAb效价;免疫胶体金技术制备二合一胶体金... 目的:研制吗啡-甲基安非他明单克隆一步法毒品二合一胶体金检测试卡,用于毒品的检测和可疑人群的筛查。方法:应用杂交瘤技术制备抗吗啡-甲基安非他明的单克隆抗体(McAb);ELISA方法检测McAb效价;免疫胶体金技术制备二合一胶体金检测试卡。结果:@ELISA法检测McAb的效价:抗吗啡McAb的效价为1:3.2×10^3,抗甲基安非他明McAb的效价为1:1.6×10^3。②检测试卡的灵敏度:检测尿中吗啡的最低浓度为300ng/ml,甲基安非他明的最低浓度为1000ng/ml;③检测试卡的特异性:7天以上未吸毒者饮用可口可乐、口服感冒药及吸烟等其尿中未检出阳性反应。④与Pan Probe Bio-tech公司的单一检测吗啡和甲基安非他明试纸灵敏度对比实验显示出吸毒后4~5天的尿样仍呈阳性反应。结论:由于具有高度敏感性和特异性,以及快速、直观等优势,本试卡在毒品滥用筛查工作中有重要的定性判别意义。 展开更多
关键词 单克隆抗体 胶体金 灵敏度 特异性
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应用抗SjP38的单克隆抗体建立血吸虫感染的胶体金免疫层析检测体系 被引量:7
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作者 吴锦雅 杨培良 +2 位作者 周晓红 李华 陈晓光 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第5期538-541,共4页
目的建立一种检测日本血吸虫感染的胶体金免疫层析方法。方法将已获得的单抗用protein-G亲和层析纯化,通过间接ELISA测定每株单抗的亲和常数。按改良过碘酸钠标记法,8株单抗标记辣根过氧化物酶(HRP)后进行不同株单抗配对,选出亲和力高... 目的建立一种检测日本血吸虫感染的胶体金免疫层析方法。方法将已获得的单抗用protein-G亲和层析纯化,通过间接ELISA测定每株单抗的亲和常数。按改良过碘酸钠标记法,8株单抗标记辣根过氧化物酶(HRP)后进行不同株单抗配对,选出亲和力高、稳定性强的单抗配对组合。胶体金标记4株抗体,选择最佳反应模式,建立胶体金免疫层析方法,并对弓形虫感染鼠血样、血吸虫感染前和感染后2、3、4、5、6周的鼠血样进行检测。结果8株抗SjP38单克隆抗体经纯化后纯度达95%以上,其亲和常数介于1×10-8mol/L^2.82×10-10mol/L。根据配对实验,1A6与9H6、1A6与9G7、6G12与9H6、6G12与9G7以及9H6与9G7为最佳配对组合。标记1A6、6G12、9H6与9G7这4株单抗后筛选出最佳反应模式,即以9G7为包被抗体,包被浓度为2.5μg/μl;当1A6为金标抗体,抗体稀释浓度为1:4时,检测效果最佳。对rSjP38的最低检测量为12.5ng/ml。抗检测感染3、4、5、6周小鼠血清,阳性率分别为40%、50%、60%、80%,而弓形虫感染鼠和血吸虫感染前小鼠血样的检测结果为100%阴性。结论通过抗体配对、最佳包被量和金标抗体稀释倍数条件的优化,建立了快速、简便、特异的胶体金免疫层析方法,自制的rSjP38试纸条能检测血吸虫早期感染鼠血清中的循环抗原SjP38。 展开更多
关键词 血吸虫 日本 P38 单克隆抗体 胶体金免疫层析方法
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铬离子单克隆抗体的制备及食品总铬含量检测胶体金免疫层析试纸条的研制 被引量:4
14
作者 王亚楠 王晓斐 +3 位作者 丁菡 张海棠 范国英 王自良 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第18期63-69,共7页
目的:制备三价铬离子螯合物单克隆抗体(Cr^(3+)-EDTA m Ab),研制胶体金免疫层析试纸条(Cr-Strip)。方法:用异硫氰酯法合成Cr^(3+)-i EDTA-BSA,UV和ICP-AES进行鉴定;细胞融合技术筛选Cr^(3+)-EDTA m Ab细胞株,体内诱生腹水法制备Cr^(3+)-... 目的:制备三价铬离子螯合物单克隆抗体(Cr^(3+)-EDTA m Ab),研制胶体金免疫层析试纸条(Cr-Strip)。方法:用异硫氰酯法合成Cr^(3+)-i EDTA-BSA,UV和ICP-AES进行鉴定;细胞融合技术筛选Cr^(3+)-EDTA m Ab细胞株,体内诱生腹水法制备Cr^(3+)-EDTA m Ab,并对其特性进行分析;应用Cr^(3+)-EDTA m Ab研制Cr-Strip,并测定其性能。结果:筛选出3株杂交瘤,最好的是2A11G5,Ka为2.69×109L/mol,对Cr^(3+)-EDTA的IC50为9.84μg/L,与其他重金属离子无交叉反应;Cr-Strip的检测时间为10 min,检测限为5μg/L,其检测结果与ICP-AES符合率为100%。结论:制备出了高质量的Cr^(3+)-EDTA m Ab,研制出更为灵敏的Cr-Strip。 展开更多
关键词 Cr^(3+) 免疫原 单克隆抗体 胶体金免疫层析 总铬含量
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出血性大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体制备及免疫胶体金试纸条的研制 被引量:7
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作者 刘程 刘芳 +5 位作者 刘箐 韩舜愈 董庆利 杨标 胡津津 马丽萍 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期199-205,共7页
将骨髓瘤细胞SP2/0与出血性大肠杆菌O157∶H7免疫小鼠得到的脾细胞融合,通过筛选得到3株稳定分泌抗出血性大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体的杂交瘤细胞株D3、E7、B9,D3和B9亚类为IgG1,E7亚类为IgG2a,轻链亚型均为κ。交叉反应结果显示这3株... 将骨髓瘤细胞SP2/0与出血性大肠杆菌O157∶H7免疫小鼠得到的脾细胞融合,通过筛选得到3株稳定分泌抗出血性大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体的杂交瘤细胞株D3、E7、B9,D3和B9亚类为IgG1,E7亚类为IgG2a,轻链亚型均为κ。交叉反应结果显示这3株单抗仅结合出血性大肠杆菌O157∶H7,对15株其他细菌无反应,测得胶体金标记单抗最佳pH、最佳结合量分别为D3:pH 7.5~8.0、24μg/mL;B9:pH 7.5、12μg/mL;E7∶pH7.5、18μg/mL,抗体配对选择胶体金结合D3喷涂金标垫、E7以1 mg/mL喷涂NC膜作T线为最优组合,试纸条检测出血性大肠杆菌O157∶H7灵敏度为2.1×106CFU/mL,且仅可检出出血性大肠杆菌O157∶H7,对25株其他细菌均无交叉反应,模拟带菌实验表明,对市售面包、牛奶、果冻各25 g(mL)均添加约200 CFU出血性大肠杆菌O157∶H7,增菌培养8、10、10 h即可检出。研究表明,实验自主制备的抗体性能良好,试纸条特异性、灵敏度达到国外同类产品,可在政府食源性致病菌监管部门、食品企业推广运用。 展开更多
关键词 出血性大肠杆菌O157∶H7 单克隆抗体 免疫胶体金 检测
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呋喃它酮代谢物5-甲基吗啉-3-氨基-2-恶唑烷酮单克隆抗体的制备、鉴定与胶体金免疫层析试纸条的研制 被引量:3
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作者 张晓丽 颜露 +2 位作者 向军俭 邹军辉 唐勇 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2013年第13期161-165,共5页
目的:制备5-甲基吗啉-3-氨基-2-恶唑烷酮(AMOZ)单克隆抗体,并建立AMOZ胶体金试纸条检测方法。方法:AMOZ与对醛基苯甲酸反应生成半抗原CP-AMOZ,将CP-AMOZ与BSA、OVA偶联制备完全抗原。免疫小鼠后制备腹水型抗体,ELISA检测抗体效价与其对C... 目的:制备5-甲基吗啉-3-氨基-2-恶唑烷酮(AMOZ)单克隆抗体,并建立AMOZ胶体金试纸条检测方法。方法:AMOZ与对醛基苯甲酸反应生成半抗原CP-AMOZ,将CP-AMOZ与BSA、OVA偶联制备完全抗原。免疫小鼠后制备腹水型抗体,ELISA检测抗体效价与其对CP-AMOZ半抑制浓度(IC50)和最低检测限(LOD),并检测抗体的特异性。胶体金与单抗偶联,同时在NC膜上包被完全抗原、兔抗鼠多抗分别作为检测线和质控线,制备免疫层析试纸条,测定试纸条的灵敏度与特异性。结果:成功制备CP-AMOZ-BSA、CP-AMOZ-OVA完全抗原及抗CP-AMOZ的单抗,抗体效价为1∶1.6×105,对CP-AMOZ IC50为0.86μg/L,LOD0.07μg/L,与其他硝基呋喃类药物代谢物及其衍生物均无交叉反应。制备的胶体金试纸条灵敏度5μg/L。结论:成功合成了CP-AMOZ的完全抗原,免疫小鼠后制备了特异性强的单抗,并以此为基础研制出敏感、特异的胶体金快速检测试纸条。 展开更多
关键词 CP—AMOZ 单克隆抗体 胶体金 免疫层析
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大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体胶体金免疫层析检测试纸条的研制 被引量:9
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作者 夏兴霞 王永山 +3 位作者 孟祥升 朱国强 张雪寒 何孔旺 《中国动物传染病学报》 CAS 2010年第4期47-53,共7页
用E.coliO157∶H7菌体免疫BALB/c鼠,制备免疫脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得了16株分泌单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株。其中,1D3、2E7和2H7三株为O157∶H7特异单克隆抗体,Ig亚类分别为IgMκ、IgG2bκ和IgG2bκ,腹水抗体ELISA效... 用E.coliO157∶H7菌体免疫BALB/c鼠,制备免疫脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得了16株分泌单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株。其中,1D3、2E7和2H7三株为O157∶H7特异单克隆抗体,Ig亚类分别为IgMκ、IgG2bκ和IgG2bκ,腹水抗体ELISA效价分别为103、105和106。用纯化的单克隆抗体2E7标记胶体金,制备金标抗体玻璃纤维素膜;将纯化的2H7和羊抗鼠IgG分别作为检测和对照捕捉抗体包被于硝酸纤维素膜(NC)上;组装成双抗夹心法O157∶H7胶体金免疫层析检测试纸条。用该试纸条可特异检测O157∶H7,敏感度为106CFU/mL,与相同单克隆抗体2H7和2E7建立的O157∶H7夹心ELISA检测方法的敏感度相当,试纸条简便快速,在1~5 min内可得出检测结果,便于O157∶H7的临床快速诊断与现场检测样品的快速筛查。 展开更多
关键词 大肠杆菌O157∶H7 单克隆抗体 胶体金 免疫层析试纸条 人兽共患病
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抗恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶单克隆抗体的研制与胶体金免疫层析方法的建立 被引量:7
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作者 李妍 宁云山 +3 位作者 李莉 彭丹丹 董文其 李明 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第4期435-438,共4页
目的制备抗恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶(GDH)的单克隆抗体(McAb),将其标记胶体金,建立一种诊断恶性疟的胶体金免疫层析方法.方法用基因重组的GDH蛋白免疫Balb/C小鼠,采用杂交瘤细胞技术制备McAb,测定其免疫球蛋白亚类及其亲和力.用protein-... 目的制备抗恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶(GDH)的单克隆抗体(McAb),将其标记胶体金,建立一种诊断恶性疟的胶体金免疫层析方法.方法用基因重组的GDH蛋白免疫Balb/C小鼠,采用杂交瘤细胞技术制备McAb,测定其免疫球蛋白亚类及其亲和力.用protein-G亲和层析纯化抗体并用胶体金标记,建立胶体金免疫层析方法,选择最佳反应模式对疟疾血样进行检测.结果筛选出6株能稳定分泌抗GDH单克隆抗体的杂交瘤细胞株,单抗亚类均为IgG1,亲和常数(κ)介于1×10-8~2.82×10-10.以镜检法为参照,建立的胶体金免疫层析方法检测恶性疟的敏感性为86.66%,特异性为96.43%.结论建立的胶体金免疫层析方法检测恶性疟快速、简便、可靠,有望开发成为恶性疟快速诊断试剂盒. 展开更多
关键词 疟原虫 恶性 谷氨酸脱氢酶 单克隆抗体 胶体金免疫层析方法
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鳗弧菌单克隆抗体-胶体金检测方法的建立 被引量:2
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作者 吴斌 樊海平 +4 位作者 王雪妹 黄小红 张新艳 叶小军 林志铿 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2016年第11期1145-1150,共6页
以灭活鳗弧菌(SMW5)全菌为抗原,应用杂交瘤技术,制备了鳗弧菌单克隆抗体3株,分别命名为1H9、1C12、6F8,细胞亚类分别为IgG2a、IgM、IgG2b,其中1H9腹水效价为1∶6.4×105。制备鳗弧菌(SMW5)兔多克隆抗体,效价为1∶3.2×105。应... 以灭活鳗弧菌(SMW5)全菌为抗原,应用杂交瘤技术,制备了鳗弧菌单克隆抗体3株,分别命名为1H9、1C12、6F8,细胞亚类分别为IgG2a、IgM、IgG2b,其中1H9腹水效价为1∶6.4×105。制备鳗弧菌(SMW5)兔多克隆抗体,效价为1∶3.2×105。应用纳米胶体金颗粒标记单克隆抗体1H9并制备金标垫,抗鳗弧菌(SMW5)兔多克隆抗体与羊抗鼠抗体作为捕获抗体包被硝酸纤维素膜,分别作为检测线T和质控线C,建立鳗弧菌的胶体金免疫层析快速检测方法。经过对试纸条的特异性和灵敏度测定,结果表明:试纸条与嗜水气单胞菌、温和气单胞菌、豚鼠气单胞菌、创伤弧菌、副溶血弧菌、副溶藻弧菌、迟缓爱德华氏菌,7种水产常见病原菌没有交叉反应,与鳗弧菌特异性反应,检测灵敏度为6.3×104cfu·mL^(-1),检测所需时间低于10min。所制备的鳗弧菌胶体金免疫层析检测试纸条具有快速、简便、特异性高和适应基层生产推广应用等优点。 展开更多
关键词 鳗弧菌 单克隆抗体 克隆抗体 胶体金 免疫层析
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猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体胶体金探针的制备与纯化 被引量:6
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作者 闫峰 兰海楠 +2 位作者 王珊珊 孔金超 郑鑫 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第6期119-120,共2页
为了组装胶体金免疫层析试纸条对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)进行快速检测,试验采用现有的猪繁殖与呼吸综合征单克隆抗体3D6与15nm胶体金结合,制备胶体金探针。结果表明:该单克隆抗体与15nm胶体金能够产生良好的特异性反应,得到的胶... 为了组装胶体金免疫层析试纸条对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)进行快速检测,试验采用现有的猪繁殖与呼吸综合征单克隆抗体3D6与15nm胶体金结合,制备胶体金探针。结果表明:该单克隆抗体与15nm胶体金能够产生良好的特异性反应,得到的胶体金探针可在今后的试验中使用。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 单克隆抗体 胶体金探针
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