PDGF-B基因表达及其对成纤维细胞增生和胶原合成的促进作用

目的建立稳定表达人血小板衍生生长因子－ＢＢ（ｐｌａｔｅｌｅｔ－ｄｅｒｉｖｅｄｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－ＢＢ，ＰＤＧＦ－ＢＢ）的细胞株，并考察该重组蛋白与损伤修复有关的生物学作用。方法将含ＰＤＧＦ－Ｂ基因的真核表达载体ｐｃＤＮＡ３转染小鼠成纤维细胞ＮＩＨ３Ｔ３中，在Ｇ４１８选择压力下得到抗性克隆，收集扩增的抗性克隆培养液并制备细胞膜上ＰＤＧＦ－ＢＢ蛋白质，３Ｈ－ＴｄＲ掺入法表达产物的生物学活性，并以３Ｈ－Ｐｒｏ掺入测胶原合成率。结果免疫荧光染色法证实抗性细胞中ＰＤＧＦ－ＢＢ的表达，膜上ＰＤＧＦ－ＢＢ显著促进ＮＩＨ３Ｔ３细胞ＤＮＡ合成，活性可达约３１．２Ｕ／１０６细胞，而培养液的致丝裂活性低于可检测水平。抗性细胞的胶原合成率显著增高。结论ＰＤＧＦ－ＢＢ的真核表达系统已得以成功构建，该重组蛋白可促进成纤维细胞增生和胶原合成。