胶原三肽的酶法制备工艺研究

以罗非鱼鱼皮为实验原料,研究不同蛋白酶处理对其蛋白质回收率、水解度以及酶解液风味的影响;以罗非鱼鱼皮内切蛋白酶酶解产物为底物,经解淀粉芽孢杆菌蛋白酶二次酶解后测定酶解液的肽分子量分布、胶原三肽种类和特征胶原三肽GPH含量。结果表明,罗非鱼鱼皮经碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶于55℃下水解3.5 h,其蛋白回收率和水解度分别为87.59%和7.50%、88.59%和9.45%,酶解液有轻微苦味。在碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解产物中加入解淀粉芽孢杆菌蛋白酶于55℃二次水解胶原蛋白肽12 h后,其水解度分别为18.40%和14.64%,水解产物中分子量<500 Da的肽段分别占比54.28%和48.90%。UPLC-MS/MS分析显示碱性蛋白酶酶解后经解淀粉芽孢杆菌蛋白酶二次酶解,鉴定发现酶解液中主要的胶原三肽有GPH、GPA和HAG,其中分步酶解产物中GPH含量达到1.46%。

胶原三肽的抗氧化功能研究

研究CTP(胶原三肽)的抗氧化功效并与两种大分子胶原肽进行比较。体外试验采用螯合Fe2+和清除DPPH自由基能力的方法;体内试验采用"D-半乳糖皮下注射制备小鼠衰老模型",以受试小鼠SOD和GSH-PX活力、MDA含量为检测指标,考察CTP等胶原肽产品的抗氧化性能。结果表明,在相同浓度下,CTP螯合Fe2+和清除DPPH自由基的能力均高于对照产品;在相同剂量下,胶原三肽能显著提高衰老小鼠体内SOD活力,降低MDA含量,并优于对照产品。与大分子胶原肽相比,胶原三肽具有较强的抗氧化活性。

胶原三肽的小肠吸收及提高运动耐力作用初探

通过大鼠离体小肠翻转实验,测定样品在大鼠离体小肠标本中吸收前后的多肽(氨基酸)含量,比较胶原三肽、胶原肽和丙氨酸的小肠吸收率。并以小鼠为实验对象,研究胶原三肽对小鼠爬杆时间的影响。结果表明,胶原三肽的小肠吸收率明显高于大分子的胶原肽和游离的氨基酸,胶原三肽组小鼠的爬杆时间显著高于模型组、对照组,提示胶原三肽具有一定提高运动耐力的作用。

胶原三肽对B16黑素瘤细胞黑素合成的影响

目的:研究胶原三肽对B16黑素瘤细胞的影响,探讨其美白作用与机制。方法:本文以B16黑素瘤细胞作为受试细胞,以浓度为10μg/ml曲酸作为阳性对照,研究胶原三肽对其增殖、细胞内酪氨酸酶活性及黑色素合成的影响。结果:胶原三肽浓度范围为50～400μg/ml时对B16黑素瘤细胞增殖无明显影响,但均能显著抑制黑色素合成。且400μg/ml胶原三肽抑制酪氨酸酶活性具有极显著性。结论:胶原三肽具有一定的美白功能。

胶原三肽促皮肤胶原蛋白合成功效研究

本试验研究胶原三肽(CTP)对NIH3T3细胞增殖的影响,并采用"D-半乳糖皮下注射制备小鼠衰老模型",取受试小鼠皮肤测定羟脯氨酸(HYP)含量,观察皮肤胶原蛋白含量的变化。结果表明,CTP能增强NIH3T3细胞活性,显著增加皮肤胶原蛋白含量。这告诉我们,CTP有助于促进成纤维细胞的增殖,从而加强皮肤胶原蛋白的合成,最终增加皮肤中胶原蛋白的含量。

胶原三肽美肌饮品的制备工艺研究

以胶原三肽、天然浓缩苹果汁和辅酶Q10为主要原料,对胶原三肽美肌饮品进行应用研究。通过研究胶原三肽的不同添加量、pH、口感等,选择出最佳的工艺条件;通过配方筛选选择出最佳配方;并对胶原三肽美肌饮品进行稳定性试验和质量指标研究。结果表明:每升胶原三肽美肌饮品中加入53g胶原三肽、60g天然蓝莓浓缩汁、0.5g辅酶Q10、0.1g果胶、3g VC、50g白砂糖、3g柠檬酸、2g柠檬酸钠,经110℃ 15min灭菌处理,其感官品质最佳;制备的胶原三肽美肌饮品在37～40℃,相对湿度为75%的条件下保存90d,其感官指标、理化指标符合产品的质量标准,微生物指标符合规定的卫生指标,推测该饮品在常温下保质期可达两年。该研究结果为胶原三肽多元化开发利用提供了更好的途径。

胶原三肽果汁饮料配方工艺设计

胶原三肽因富含多种营养成分而倍受消费者喜爱，并用于果汁饮料的生产。本研究采用正交试验设计，筛选出用70°B×的浓缩苹果汁生产胶原三肽苹果汁饮料的最优配方是：胶原多肽含量15．5％、糖度12％、酸度0．25％、香精量0．055％。用此工艺生产的胶原三肽果汁饮料感官、风味俱佳。

胶原三肽促钙吸收动物实验研究

采用"饲喂低钙饲料制备小鼠缺钙模型",以受试小鼠股骨指数、股骨钙含量和血清钙含量为检测指标,并与酪蛋白磷酸肽(CPP)进行比较,考察不同剂量胶原三肽(CTP)促钙吸收能力。结果表明,胶原三肽具备较好的促钙吸收功能,并且随剂量增加功能增强。

胶原三肽对老龄小鼠骨强度和细胞免疫的影响

为了探讨胶原三肽对老龄小鼠骨强度和细胞免疫功能的影响,本研究测定了其骨裂断强度、羟脯氨酸及钙含量,观察胶原三肽的摄入对老龄小鼠骨骼的作用;并采用二硝基氟苯诱导小鼠迟发型变态反应模型,观察小鼠耳肿程度。结果表明:与对照组相比,胶原三肽组小鼠骨裂断强度、羟脯氨酸含量和钙含量均有显著的增加,小鼠耳肿程度极显著提高。由此可知,胶原三肽具有显著增强老龄小鼠骨强度,增加骨骼中羟脯氨酸和骨钙含量,以及增强细胞免疫的作用。

胶原三肽及其生物应用的研究进展

胶原蛋白是人体内重要的结构蛋白,具有十分重要的生理功能和生物活性,在生物医学领域应用广泛;但由于胶原属于大分子化合物,需在体内代谢为小分子短肽而发挥作用,同时,人工提取的胶原含有一定的免疫原性,增加了其应用的潜在风险。胶原三肽(collagen tripeptide,CTP)是胶原代谢产物中的最小分子肽,由3个氨基酸组成,因其相对分子质量小、纯度高、无抗原性、低过敏等优点,成为研究热点,在应用领域有取代胶原的趋势。现综述了胶原三肽、甘氨酰-组氨酰-赖氨酸三肽(glycyl-L-histidyl-L-lysine,GHK)及GHK-Cu复合物的生物性能、应用及发展前景,为胶原类小分子肽在临床、美容和保健等领域的应用提供参考。

肝硬化胶囊临床疗效观察

目的 观察肝硬化胶囊治疗肝硬化对FN、PⅢP的影响。方法 采用肝硬化胶囊治疗 35例肝炎后肝硬化 ,并设 35例肝硬化患者为对照 ,观察治疗前后血清纤维连接蛋白 (FN)和血清前胶原三肽 (PⅢP)的动态变化。结果 肝硬化胶囊组治疗前后FN值升高不明显 ,提示肝硬化胶囊可减少细胞的变性坏死 ,而对照组FN值明显上升 ;PⅢP水平在肝硬化胶囊治疗后明显下降 ,而对照组无变化 ,提示肝硬化胶囊对肝纤维化进一步形成起了一定抑制作用。结论 肝硬化胶囊具有抗乙肝病毒 ,抗肝纤维化的作用。

不同胶原肽对光损伤皮肤细胞的修复作用

研究胶原三肽、普通胶原蛋白肽对光损伤(UVB)皮肤细胞的修复作用,以及不同胶原肽之间的修复差异。采用常规培养的人皮肤成纤维细胞,经UVB处理建模,以不同胶原肽干预UVB处理后的人皮肤成纤维细胞设计空白对照组,模型组,4种不同胶原肽的高、中、低剂量组,利用CCK8法检测细胞增殖的影响;利用凋亡试验检测细胞凋亡的影响;利用ELISA检测相关基因表达的影响:透明质酸、羟脯氨酸;利用荧光定量PCR检测细胞炎症相关基因表达:MMP1、MMP13、Ⅰ型前胶原(COL1a1)、Ⅲ型前胶原(COL3a1)和原弹性蛋白mRNA的表达。细胞增殖和细胞凋亡结果显示,胶原三肽及胶原蛋白肽对UVB处理后的人皮肤成纤维细胞均具有一定修复作用,且呈一定剂量相关性,其中效果显著的依次性为2^(#)胶原三肽>1^(#)胶原三肽>2^(#)胶原蛋白肽>1^(#)胶原蛋白肽。ELISA检测透明质酸和羟脯氨酸含量显示,胶原三肽、胶原蛋白肽均可以修复UVB损伤后人皮肤成纤维细胞生成细胞外基质的能力,且呈一定剂量相关性,其中效果显著的依次性为2^(#)胶原三肽>1^(#)胶原三肽>2^(#)胶原蛋白肽>1^(#)胶原蛋白肽。Western Blot检测蛋白表达发现,胶原三肽、胶原蛋白肽均有降低MMP-1、MMP-13,及提高COL1a1、COL1a2、原弹性蛋白信使RNA的趋势。胶原肽对光老化人皮肤成纤维细胞具有一定修复作用,其中胶原三肽的效果优于普通胶原蛋白肽。

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征对非肥胖老年人非酒精性脂肪性肝病的影响

目的探讨阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（OSAHS）对非肥胖老年人非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）发生的影响。方法选择经多导睡眠图检测确诊的非肥胖老年轻度至中度OSAHS患者（轻中度OSAHS组）29例、重度0sAHS患者（重度OSAHS组）31例及年龄、性别、体质指数相匹配的非OSAHS者（对照组）31例为研究对象，以血清肝酶水平、血清Ⅲ型前胶原肽（PⅢP）水平及肝／脾CT比值作为评估NAFLD严重程度的指标，比较3组患者各指标变化并分析其影响因素。结果重度OSAHs组血清肝酶丙氨酸氨基转移酶（ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）、ALT／AST比值水平明显高于轻中度OSAHs组和对照组（F=25．71、15．15、18．64，均P=0．000），轻中度0SAHS组与对照组比较，血清肝酶ALT、AST水平差异无统计学意义（均P〉0．05），ALT／AST比值明显高于对照组（P〈0．01）；肝／脾CT比值比较，重度OSAHS组、轻中度OSAHS组明显低于对照组（F=103．43，P=0．000），重度OSAHS组明显低于轻中度OSAHS组（P=0．000）；重度OSAHS组血清PⅢP水平明显高于轻中度0sAHS组和对照组（F=31．46，P=0．000），轻中度OSAHS组与对照组比较血清PUIP水平差异无统计学意义（P〉0．05）。相关分析结果显示，0SAHs患者肝／脾CT比值与AHI呈负相关（r=-0．785，P=0．000），与最低血氧饱和度呈正相关（r=0．517，P=0．001）；OSAHS患者的血ALT／AST比值、血PⅢP水平与呼吸暂停低通气指数（AHI）呈正相关（r=0．463、0．770，均P=0．000），与最低血氧饱和度呈负相关（r=-0．395、-0．514，P=0．002、0．000）。多元回归分析显示，AHI是影响OSAHS患者肝／脾CT比值和血清PⅢP值的唯一变量。结论非肥胖老年OSAHS患者存在NAFLD相关性肝损伤，表现为肝酶异常、肝脏脂肪变性及肝纤维化倾向，且随着OSAHS严重程度增加而加重；AHI是非肥胖老年OSAHS患者NAFLD的重要危险因素。