基于胶原型关节炎大鼠模型两种传统中药作用机制比较研究

目的 ：通过观察两种中药成分雷公藤多苷及白芍总苷在对胶原型类风湿性关节炎大鼠模型治疗后的效果表现,探讨该两种中药在抗类风湿性关节炎中的作用机制。方法 ：将雷公藤多苷及白芍总苷按剂量对已建立的II型胶原诱导型关节炎（CIA）大鼠模型进行灌胃治疗,并采用病理组织切片、ELISA法及免疫组化法,观察治疗前后大鼠足踝关节病理组织的改变,检测外周血中细胞因子IL-17α及TNF-α含量以及治疗后对大鼠足踝关节组织中TNF-α及MMP-9的影响。结果 ：通过实验我们发现经过雷公藤多苷及白芍总苷治疗后,两者均能有效减缓大鼠足踝组织炎症发展。雷公藤多苷及白芍总苷在治疗25 d后,与模型组相比,均能明显降低血清中IL-17a及TNF-α的含量（P〈0.05）,但雷公藤多苷降低血清中IL-17a的含量更为明显（P〈0.05）。两种中药治疗后的大鼠足踝关节组织中的TNF-α及MMP-9表达均明显减少（P〈0.05）,两者比较无差异。结论 ：传统中药成分雷公藤多苷及白芍总苷均具有较好的抗类风湿性关节炎的作用,雷公藤多苷在降低血清中细胞因子IL-17a的表达水平上优于白芍总苷。

Ⅱ型胶原蛋白与弗氏完全佐剂大鼠关节炎模型的建立和比较

目的对Ⅱ型胶原蛋白（ＣⅡ－Ａ）和弗氏完全佐剂（Ａ－Ａ）大鼠关节炎模型在大体外观和足部组织病理学切片等方面进行观察比较。方法分别采用Ⅱ型胶原蛋白和弗氏完全佐剂诱导建立大鼠关节炎模型，利用排水法对大鼠足部体积进行测定，并将大鼠后足进行组织病理学切片观察。结果从大体外观和足部病理切片上两种大鼠模型均显示出有明显的病变，但ＣⅡ－Ａ大鼠与Ａ－Ａ大鼠比较，滑膜增生及软骨破坏等继发性病变特征更为明显，关节炎持续时间也较长，更接近于人的类风湿性关节炎。结论ＣⅡ－Ａ大鼠模型与Ａ－Ａ相比是研究ＲＡ较为理想的动物模型。

Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠模型制备

目的:研究建立较为理想的寒湿痹型实验性类风湿关节炎模型。方法:采用不同浓度Ⅱ型胶原和弗氏佐剂联合应用于大鼠足部注射,诱导关节炎;测量大鼠足肿胀度,并计算肿胀率;检测血清唾液酸水平;观察滑膜组织病理学及超微结构变化。结果:低浓度Ⅱ型胶原和完全佐剂组大鼠关节肿势迅猛,近似于佐剂关节炎大鼠模型,高浓度Ⅱ型胶原和不完全佐剂组大鼠关节肿势和缓;各模型组大鼠血清唾液酸水平均高于正常对照组;滑膜组织的病理学变化与类风湿关节炎相符。结论:高浓度的Ⅱ型胶原加不完全佐剂给药组是较为理想类风湿关节炎大鼠模型,中医辩证属寒湿痹症,与之相比较,佐剂关节炎模型接近于湿热痹症。

牛Ⅱ型胶原诱导SD大鼠类风湿关节炎模型的建立

【目的】探讨牛II型胶原诱导SD大鼠构建类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)模型的可行性,为今后深入研究RA提供理想的动物模型。【方法】选择60只4周龄的SD大鼠,依据体重相近的原则随机分组(模型组50只,对照组10只),模型组通过注射牛Ⅱ型胶原建模,并通过体征观察、病理组织切片评价、钼靶影像学检测等判定建模是否成功。【结果】通过尾静脉注射牛Ⅱ型胶原免疫SD大鼠的建模成功率高达90.0%。与对照组SD大鼠相比,模型组SD大鼠体重减轻,活动减少,精神萎靡,先是后足小趾或踝关节红肿,之后炎症漫延至前肢,最终发展成慢性、多发性、对称性关节炎;模型组SD大鼠关节滑膜层次增多,且有大量炎性细胞浸润,软骨及骨组织受损,关节腔结构紊乱;模型组SD组大鼠从初次免疫第10周开始,其关节间隙狭窄、模糊,骨质疏松,关节软骨及骨组织受损。【结论】SD大鼠是研究RA发病机制及研发抗风湿药物的理想动物模型,可丰富该疾病动物模型的选择。

2种品系大鼠Ⅱ型胶原诱导关节炎模型的比较

【目的】构建SD大鼠和Wistar大鼠Ⅱ型胶原诱导关节炎模型(CIA),比较和评价2种品系大鼠的建模效果。【方法】将SD大鼠和Wistar大鼠(各12只)分别于第1、8天给予尾根部皮下注射Ⅱ型胶原蛋白+弗氏完全佐剂(CFA)乳剂、Ⅱ型胶原蛋白+弗式不完全佐剂(IFA)乳剂建立CIA模型。造模结束后,比较SD大鼠与Wistar大鼠的一般形态、关节炎指数、关节病理变化。【结果】(1)SD大鼠和Wistar大鼠造模后14 d均可见关节炎症,造模后21、28 d关节炎症加重且存在相应病理改变。(2)造模后14、21、28 d,SD大鼠关节炎指数评分显著高于Wistar大鼠(P <0.01),病理改变也是前者比后者严重。【结论】采用尾根部皮下注射适量Ⅱ型胶原蛋白法均能成功建立SD大鼠和Wistar大鼠CIA模型,且SD大鼠的关节炎症重于Wistar大鼠。

大鼠胶原诱导关节炎模型的建立及评价

目的建立Ⅱ型胶原诱导关节炎(CIA)大鼠模型及评价方法。方法大鼠皮内注射鸡Ⅱ型胶原(CⅡ)与完全弗氏佐剂及不完全弗氏佐剂建立模型,监测动物体重、后足容积、关节炎指数(AI)以及热刺激缩足反射潜伏期(PWTL)和机械痛阈(MWT),免疫后第四十二天行影像学检查并取材进行组织病理学检查;酶联免疫吸附法(ELISA)检测动物血清抗CⅡ抗体、IL-1β及TNF-α水平。结果 CIA大鼠体重增长缓慢,后足红肿明显,后足容积显著高于对照组,AI呈上升趋势,后足PWTL及MWT均显著降低,影像学检查发现关节腔狭窄,关节结构模糊,组织病理学检查可观察到明显炎症细胞浸润、关节结构的破坏及滑膜增生,ELISA结果显示CIA大鼠血清抗CⅡ抗体、IL-1β及TNF-α水平显著升高。结论本文成功建立了CIA大鼠模型及模型评价方法。

胶原诱导性类风湿关节炎大鼠模型制备及早期表现评价

目的:研究胶原诱导性类风湿关节炎大鼠模型的制备方法及临床表现与病理改变,为类风湿关节炎发病机理及治疗方法的进一步研究提供理论基础。方法:将60只雌性Wistar大鼠随机分成空白对照组(10只)和胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)组(50只)。在大鼠尾根部及背部脊柱侧多点皮内注射Ⅱ型胶原乳剂的方法制作类风湿关节炎大鼠模型,观察大鼠的临床表现,测量大鼠的体重、足爪体积,计算关节肿胀度及进行关节炎指数评分,并进行X线显像及病理学检测。结果:1、在造模25 d后,CIA组大鼠体重及足爪体积与空白对照组差别有统计学意义;2、CIA组造模成功大鼠病理结果均有典型的滑膜炎症及滑膜增厚特征,并有明显的血管翳形成,造模后15 d及25 d大鼠X线显像显示关节面光滑,关节间隙未见狭窄。结论:胶原诱导性类风湿关节炎大鼠模型的临床表现及病理改变与人类RA相符,是研究RA理想的动物模型。在造模后25 d临床表现最为显著,是研究早期胶原诱导性类风湿关节炎大鼠模型的最佳时期。

胶原诱导性关节炎大鼠模型的建立与优化

目的建立胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型,并探讨胶原给药剂量以及性别因素对造模成功率的影响,优化造模方法。方法采用完全随机设计,以0、200、300、400μg 4个剂量水平的鸡胶原剂,免疫Wistar大鼠,连续观测大鼠一般情况、足爪容积、关节炎评分、血清抗CⅡ抗体、TNF-α浓度及大鼠关节病理情况。采用Logistic回归分析胶原蛋白剂量、性别与造模成功率的关系。结果发病大鼠其临床表现、免疫学及病理学特征显著,造模成功率随胶原蛋白剂量增加而上升(P<0.01,OR=14.414),性别对造模成功率无影响(P>0.05)。结论成功建立发病稳定的大鼠模型。在安全范围内,胶原蛋白给药剂量与造模成功率成正相关,性别对发病率无影响。

清热养阴除湿汤对Ⅱ型胶原诱导性关节炎大鼠炎症因子的调节作用

目的:观察清热养阴除湿汤(QYCD)对Ⅱ型胶原诱导性关节炎大鼠的保护作用。方法:采用牛Ⅱ型胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型,将24只CIA大鼠随机分为模型组(CIA组)、甲氨蝶呤组(0.625 mg/kg)、清热养阴除湿汤低剂量组(17 g/kg)、清热养阴除湿汤高剂量组(34 g/kg),每组6只,同时随机取6只大鼠作为正常对照组(Control组)。连续给药5周,每周观察大鼠足肿胀度及炎症指数;HE染色法观察大鼠踝关节组织病理形态学改变;micro-CT法观察骨破坏程度;ELISA法检测血清IL-4、IL-17A、TGF-β、IFN-γ水平;荧光PCR法检测脾脏组织T-bet mRNA、Gata-3 mRNA、RORγt mRNA、Foxp3 mRNA的表达。结果:初次免疫后3周CIA组大鼠右后足关节肿胀程度高于Control组(P<0.05),5周时CIA组大鼠关节炎评分最高(P<0.05)。甲氨蝶呤(MTX)、低剂量清热养阴除湿汤(QYCD-L)、高剂量清热养阴除湿汤(QYCD-H)可以缓解大鼠足关节的肿胀程度(P<0.05),减轻炎症细胞浸润、滑膜增殖及软骨表面的侵蚀,CIA大鼠骨破坏在一定程度上被缓解。QYCD-L组、QYCD-H组大鼠血清IFN-γ、IL-17A水平均低于CIA组(P<0.01或P<0.05),而血清IL-4、TGF-β水平均显著高于CIA组(P<0.01)。QYCD-L组、QYCD-H组大鼠T-bet mRNA、RORγt mRNA、Foxp3 mRNA相对表达量均高于CIA组(P<0.05或P<0.01),但Gata-3mRNA相对表达量与CIA组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:清热养阴除湿汤能有效改善CIA大鼠关节炎症状,其机制可能与调节炎症细胞因子及其转录因子水平有关。

胶原诱导的关节炎和佐剂诱导的关节炎大鼠模型的制备

目的制备实用性的胶原诱导的关节炎(CIA)和佐剂诱导的关节炎(AA)动物模型。方法采用牛Ⅱ型胶原蛋白溶于0.5mol/L醋酸中,加入等量弗氏不完全佐剂混匀乳化配成牛Ⅱ型胶原蛋白乳剂和灭活卡介苗溶于弗氏不完全佐剂中配成弗氏完全佐剂分别足跖皮内免疫Wistar大鼠,第21天加强免疫,利用YLS-7B足趾容积测量仪测量大鼠足部体积,利用PLANMECA TNTRAX线摄片机对大鼠足部拍摄,然后进行大鼠后足的近端趾间和跖趾关节病理观察。结果CIA加强组和AA高剂量组大鼠免疫足出现明显的红肿,且肿胀足体积与正常对照组比较差异具有统计学意义(P<0.01);X线和病理HE染色结果亦显示,关节组织呈现关节间隙狭窄、滑膜纤维组织增生、软骨及骨的破坏等病变。结论经改进的CIA和AA大鼠模型呈现典型的关节病变的特征,可为进一步研究人类类风湿性关节炎的发病机制和新药研发提供良好实用性动物模型。

大鼠Ⅱ型胶原蛋白的提取及关节炎动物模型的诱导

目的拟建立一种简单易行且经济的大鼠软骨Ⅱ型胶原(collagen typeⅡ,CⅡ)提取方法,并以此构建CⅡ诱导的关节炎动物模型(collagenⅡ-induced arthritis,CIA)。方法将大鼠软骨通过机械法破碎,再结合盐酸胍除去蛋白多糖,胃蛋白酶消化,0.9 mol/L氯化钠盐析,透析冻干等步骤,最终获得纯化CⅡ。经SDS-PAGE电泳鉴定后,诱导大鼠CIA模型。结果SDS-PAGE结果显示可见约130 ku明显条带,无杂带。使用该CⅡ可成功诱导DA大鼠CIA模型,造模成功率100%,在CIA大鼠血浆中可检测到显著升高的抗CⅡ抗体。结论使用本方法可获得纯度较高的CⅡ,可用于CIA模型构建,为类风湿性关节炎的研究提供研究工具。

DBA/1J小鼠胶原诱导关节炎模型的建立与鉴定

目的建立DBA/1J小鼠胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型,从形态学、病理学及免疫学等多方面对该模型进行鉴定。方法将牛Ⅱ型胶原(typeⅡcollagen,CⅡ)与佐剂混合并充分乳化,于DBA/1J小鼠尾根部皮下注射进行初次免疫,21 d后同样的方法进行再次免疫。观察小鼠体重变化、关节肿胀程度等形态学指标,进行踝关节病理检查,并用CBA法检测血清中细胞因子的水平。结果造模组小鼠体重于首免后35 d开始下降并持续低于对照组。于28 d,造模组小鼠出现足爪红肿,35 d足爪肿胀厚度显著高于对照组(P<0.05),至62 d发病率高达90%。病理学检测显示,造模组小鼠关节腔变窄,滑膜组织增生,炎症细胞浸润,软骨结构不同程度破坏。相比于对照组,造模组小鼠血清中炎性因子IL-6、IFN-γ、MCP-1显著升高(P<0.05),而抗炎因子IL-10轻微下降(P>0.05)。结论 DBA/1J小鼠尾根部皮下注射牛Ⅱ型胶原可成功诱导CIA模型。

雷公藤多甙对大鼠胶原免疫性关节炎及佐剂性关节炎黏膜免疫功能影响的对比研究

目的观察雷公藤多甙对大鼠胶原免疫性关节炎(collagen-Ⅱinducedarthritis,CIA)及佐剂性关节炎(adjuvantarthritis,AA)黏膜免疫功能的影响。方法分别以Ⅱ型胶原加完全弗氏佐剂和完全弗氏佐剂单独致炎免疫大鼠造成CIA和AA模型,以雷公藤多甙治疗,观察大鼠黏膜、全身免疫指标(外周血T细胞亚群)以及关节局部炎症因子(IL-6、TNF-α、COX-2和NF-κB等)的变化。结果CIA模型组派伊尔结(Peyer’spatch,PP)CD4+、血中CD4+、CD8+均升高;AA模型组PPCD4+降低,CD8+升高,血中的CD4+,CD8+均升高。雷公藤对两模型组的PP和血中T细胞亚群存在不同影响。两种模型大鼠关节可见高水平IL-6、TNF-α、COX-2和NF-κB表达,雷公藤多甙可以抑制这些炎症介质的表达。结论两种关节炎模型在黏膜免疫反应方面及雷公藤多甙对这两种模型的影响存在异同。

川芎嗪干预早期膝骨关节炎大鼠软骨Ⅱ型胶原纤维α1基因与血管内皮生长因子mRNA及miR20b的表达

背景:课题组前期研究发现川芎嗪能明显降低骨关节炎关节液中NO、前列腺素E2水平,对减轻骨性关节炎的炎症有一定作用,但具体机制还不清楚。目的:观察川芎嗪治疗膝骨关节炎模型关节软骨中Ⅱ型胶原纤维α1基因、血管内皮生长因子mRNA及miR20b表达水平,并探讨川芎嗪治疗早期膝骨关节炎大鼠的作用机制。方法:健康雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、川芎嗪高剂量组、川芎嗪低剂量组、阳性对照组,后4组通过木瓜蛋白酶关节腔注射制作早期膝骨关节炎大鼠模型。造模后川芎嗪高、低剂量组分别灌胃川芎嗪100 mg/kg和50 mg/kg,阳性对照组灌服塞来昔布24 mg/kg;正常组、模型组灌服等量生理盐水。干预6周后取材,分别行鼠软骨大体组织学评分、qR T-PCR检测软骨Ⅱ型胶原纤维α1基因、血管内皮生长因子mRNA及miR20b的表达水平。结果与结论:(1)软骨Mankin评分:川芎嗪高、低剂量组和阳性对照组均较正常组高(P<0.05),较模型组低(P<0.05),且川芎嗪高剂量组<阳性对照组<川芎嗪低剂量组;(2)川芎嗪各剂量组和阳性对照组的Ⅱ型胶原纤维α1基因、血管内皮生长因子mRNA表达较正常组上调(P<0.05),较模型组下调(P<0.05),且川芎嗪高剂量组<阳性对照组<川芎嗪低剂量组;(3)川芎嗪各剂量组、阳性对照组及正常组的miR20b表达均较模型组上调(P<0.05),其中川芎嗪低剂量组<阳性对照组<川芎嗪高剂量组;(4)提示:川芎嗪对早期膝骨关节炎大鼠治疗具有积极作用,可能通过上调软骨中miR20b从而抑制血管内皮生长因子mRNA的表达,促进软骨的修复。

胶原性关节炎大鼠血清中炎性细胞因子的表达

目的观察白细胞介素-1(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)和白细胞介素-10(IL-10)在Ⅱ型胶原诱导性关节炎大鼠血清中的表达。方法健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组和模型组,模型组以牛Ⅱ型胶原皮下注射诱导建立胶原性关节炎模型。采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定上述细胞因子的含量。结果与正常对照组比较,免疫后7周关节炎大鼠血清IL-1β、TNF-α含量明显升高(P<0.01),IL-10含量明显降低(P<0.01),IL-4含量虽低于正常对照组,但没有统计学差异(P>0.05)。结论细胞因子网络失衡与胶原性关节炎大鼠的发病相关。

Wistar大鼠胶原诱导的关节炎造模因素的分析

目的通过比较不同的造模方法,分析影响胶原诱导关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠模型建立的因素。方法选用Wistar大鼠造模,通过改变性别、剂量、年龄、注射部位及免疫方式,来比较造模成功率。结果不同性别、剂量、年龄及免疫方式造模成功率不同。结论4～5周龄Wistar雌性大鼠,初次免疫注射乳剂4点共0.20 mL,加强免疫在14 d之后3点共0.15 mL的造模成功率最高。

益气清络方对大鼠胶原性关节炎作用的拆方研究

目的: 探讨益气清络方及其拆方对大鼠胶原性关节炎作用的影响。方法: 运用Ⅱ型胶原免疫SD大鼠制成胶原性关节炎动物模型。观察益气清络方及其拆方对模型大鼠足肿胀、体重、血清 IL - 1β、TNF -α水平的影响。结果: 益气清络方在用药第8天即能减轻模型大鼠的足肿胀, 30 天时, 减轻足肿胀的作用仍然存在, 且能够降低大鼠血清 IL - 1β、TNF-α水平。益气清络方的拆方——益气部分在用药30天时, 大鼠足肿胀程度明显减轻,且可降低大鼠血清 TNF-α水平。益气清络方的拆方——清络部分单独治疗胶原性关节炎模型大鼠无明显效果。结论: 益气清络方能够改善大鼠胶原性关节炎, 作用优于其拆方。

黑龙骨茎叶抗类风湿性关节炎作用研究

目的:研究苗药黑龙骨茎叶对胶原诱导性关节炎(Collagen-induced Arthritis,CIA)模型大鼠类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)作用,探究黑龙骨茎叶抗RA作用的潜在开发利用度。方法:SD大鼠随机选取8只作为正常组,其余大鼠建立CIA模型。造模成功后随机分为模型组,黑龙骨茎叶高剂量组(100 mg·kg^(-1))、低剂量组(25 mg·kg^(-1)),雷公藤多苷(TG)组(10 mg·kg^(-1)),每组8只。在试验因素干预后,对各组大鼠AI评分、足趾厚度及病理形态变化进行分析比较。结果:给药前后,正常组与模型组比较有极显著差异(P<0.01),说明造模成功。给药后,大鼠左、右足趾厚度测量值显示,模型组与黑龙骨茎叶高、低剂量组相比均有显著性差异(P<0.05);AI评分显示,黑龙骨茎叶高、低剂量组与模型组相比,存在显著差异,组内比较中,黑龙骨茎叶低剂量组的消肿效果优于高剂量组(P<0.05)。病理切片结果显示,与正常组相比,模型组大鼠滑膜组织内见大量、弥漫性炎性细胞浸润;与模型组相比,黑龙骨茎叶低剂量组大鼠滑膜组织内炎性细胞浸润减少。结论:黑龙骨茎叶表现出了良好的抗RA效果,具有潜在的抗RA开发利用价值。

类风湿关节炎模型大鼠滑膜组织中证实有髓样细胞诱发受体2的表达

背景:髓样细胞诱发受体2在类风湿关节炎活动期患者滑膜组织呈高表达,但其在类风湿关节炎发病机制中发挥的作用,目前并不清楚。目的:观察髓样细胞诱发受体2在牛源性Ⅱ型胶原诱导的关节炎大鼠模型滑膜组织中的表达。方法:制备胶原诱导关节炎模型大鼠,动态观察大鼠各项关节炎的活动指标和滑膜组织的病理学改变,RT-PCR法检测滑膜组织中髓样细胞诱发受体2、肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素10 mR NA的表达,Western blot及免疫组织化学法分别检测关节滑膜组织中髓样细胞诱发受体2的蛋白表达及定位。结果与结论:模型组大鼠免疫13 d后出现足爪红肿,关节炎指数评分逐渐升高(P<0.01),炎症高峰期在19-25 d,苏木精-伊红染色可见诱导性关节炎大鼠滑膜组织增生及炎性细胞浸润、软骨骨质破坏。与对照组相比,模型组大鼠关节滑膜髓样细胞诱发受体2的mR NA和蛋白的表达、肿瘤坏死因子α、白细胞介素1βmR NA表达均明显升高(P<0.05或P<0.01),白细胞介素10 mR NA表达显著降低(P<0.05)。结果证实,髓样细胞诱发受体2可能是类风湿关节炎模型大鼠发病过程中一个重要的炎症调节递质,其反应性升高在类风湿关节炎模型大鼠发病中发挥着重要作用。