慢性肝炎患者肝组织胶原半定量测定方法的研究

目的:探讨慢性肝炎患者肝组织胶原半定量测定方法对肝纤维化量化诊断的临床价值。方法:对40例慢性肝炎和6例正常对照组的肝脏穿刺组织标本,常规组织切片,HE、Masson三色和苦味酸天狼红染色,苦味酸天狼红染色与洗脱液进行比色测定,并观察胶原定量与炎症活动度(G)、炎症半定量计分(SSG)和纤维化分期(S)、纤维化半定量计分(SSS)的相关性。结果:急性肝炎组、慢性肝炎轻度、中度、重度组的G、SSG的计分均值和S、SSS的计分均值呈上升趋势;肝组织切片胶原半定量检测结果,正常对照组为(42.15±1.87)μg/mg、急性肝炎组为(49.04±11.89)μg/mg、慢性肝炎轻度组为(56.24±9.16)μg/mg、慢性肝炎中度组为(87.09±21.81)μg/mg、慢性肝炎重度组为(121.69±10.03)μg/mg,从正常对照组到慢性肝炎重度组胶原半定量也呈上升趋势;且切片胶原含量与其他指标存在较好的相关性,与G、SSG、S、SSS的r分别是0.91、0.89、0.97、0.89,其P均<0.01。结论:肝脏组织切片胶原测定方法可客观反映肝脏纤维化的程度,而且是一个简单而且敏感的量化诊断指标。

幼鼠非酒精性脂肪性肝炎模型的建立及其肝纤维化特征的研究

目的建立幼鼠的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)模型,并探讨幼鼠建模中肝纤维化相关的胶原参数动态变化特点,为研究儿童NASH肝纤维化的进展提供新思路。方法3周龄、4周龄、5周龄和6周龄小鼠喂养蛋氨酸胆碱缺乏饲料(MCD),并设立相应的对照组喂养普通饲料,共喂养8周。在喂养的0、4、6和8周时采集小鼠肝组织,行HE和天狼猩红染色,观察肝组织病理特征并评分。同时对肝组织进行二次谐波(SHG)/双光子激发荧光(TPEF)显微成像,定量分析100个胶原参数,以造模后不同时间点和不同纤维化分期为标准,分析不同周龄小鼠的胶原特征。结果与对照组相比,随着MCD造模时间的延长,不同周龄的小鼠体质量逐渐下降,幼鼠死亡数量增加,丙氨酸氨基转氨酶(ALT)和天冬氨酸氨基转氨酶(AST)升高。MCD诱导4周后,各组小鼠的肝脏出现不同程度的脂肪变和炎症,诱导8周后,胶原含量明显增加。3、4、5周龄小鼠的汇管区胶原含量高于6周龄小鼠,中央静脉区和窦周区胶原含量均低于6周龄小鼠。各组16个胶原总特征的指标无显著差异。结论3、4、5周龄幼鼠的NASH模型以汇管区胶原变化为主,病理改变更符合儿童NASH病理特征,适合建立儿童脂肪肝模型。

藏药郎庆阿塔对肝纤维化大鼠胶原代谢的影响

目的:观察藏药郎庆阿塔对肝纤维化大鼠胶原代谢的影响。方法:采用复合因素(皮下注射40%CCl4/橄榄油溶液+高脂低蛋白复合饲料喂养+给予5%乙醇饮水)构建大鼠肝纤维化模型,造模6周后,于第7周开始分组给药,设置正常对照组、模型组、阳性药组[复方鳖甲软肝片(0.55 g.kg-1]、郎庆阿塔高、中、低剂量组(按生药量计为11.4,5.7,2.85 g.kg-1),分别ig给药7周。实验末期,取肝组织,HE染色观察肝脏组织的病理学变化,Masson染色观察肝组织内纤维化程度,免疫组化法检测肝组织中金属蛋白酶组织抑制因子I(TIMP-I)的表达水平,荧光定量PCR(RTFQ PCR)法测定药物对肝纤维化大鼠肝组织中I型胶原蛋白(CoL-I)mRNA表达的影响。结果:郎庆阿塔高、中剂量对肝纤维化大鼠肝纤维组织增生、肝组织炎症活动度均有显著的改善作用(P<0.05),免疫组化结果表明,郎庆阿塔能明显降低肝纤维化大鼠肝组织中TIMP-I的表达水平(P<0.01),高剂量组阳性率(4.80±0.92)与模型组(8.60±1.52)相比显著下降;此外,郎庆阿塔还能剂量依赖性地降低CoL-I mRNA表达水平,其中高剂量组与模型组相比较有显著性差异(P<0.01)。结论:郎庆阿塔能明显改善肝纤维组织增生,降低肝组织中TIMP-I和CoL-I mRNA的表达,发挥其抗肝纤维化作用。