纤维蛋白胶和医用OB胶联合几丁聚糖-胶原导管修复面神经损伤

背景:纤维蛋白胶和医用OB胶均能用于周围神经损伤的修复,但两种胶体的结构组成和作用原理完全不同。目的:对比分析纤维蛋白胶或医用OB胶联合几丁聚糖-胶原导管修复兔面神经损伤的效果。方法:制作中国大耳白兔右侧面神经下颊支损伤模型,随机数字表法分成3组:显微外科吻合组,将神经断端对位,作外膜原位吻合;纤维蛋白胶导管粘合组与医用OB胶导管粘合组分别采用纤维蛋白胶或医用OB胶粘合与显微外科技术吻合进行修复。术后16周进行大体观察、神经电生理检测、组织学观察、图像分析,评价神经再生恢复情况。结果与结论:几丁聚糖-胶原导管吸收明显,能抑制吻合口周围纤维结缔组织形成。3组神经肌肉功能恢复良好,口轮匝肌动作电位潜伏期和复合神经肌肉动作电位振幅(M波)检测结果差异无显著性意义(P>0.05),再生轴突恢复比相似(P>0.05),但轴突再生率不同,纤维蛋白胶导管粘合组、医用OB胶导管粘合组均高于显微外科吻合组(P<0.05或0.01),其中医用OB胶导管粘合组最高。说明胶原导管生物相容性良好,与纤维蛋白胶或医用OB胶联合应用修复损伤神经效果肯定,但纤维蛋白胶更适于神经损伤的手术操作。

纤维蛋白胶联合几丁聚糖-胶原导管修复兔面神经损伤的效果

目的:探讨纤维蛋白胶联合几丁聚糖-胶原导管修复兔面神经损伤的效果。方法:30只健康中国大耳白兔随机分成3组,分别为显微外科吻合组(Ⅰ组)、纤维蛋白胶粘合组(Ⅱ组)、纤维蛋白胶联合几丁聚糖-胶原导管粘合组(Ⅲ组)。手术制作兔右侧面神经下颊支损伤模型,分别采用显微外科吻合、纤维蛋白胶粘合以及在几丁聚糖-胶原导管内用纤维蛋白胶粘合技术进行修复。术后16周进行大体观察、神经电生理检测、组织学观察、图像分析,采用SPSS 17.0统计软件对各组数据进行方差分析(one way ANOVA),以评价神经再生恢复情况。结果:16周时肉眼观察3组吻合口处均见神经再生。几丁聚糖-胶原导管吸收明显,能抑制吻合口周围纤维结缔组织形成。Ⅰ组再生神经周围软组织粘连较Ⅱ组和Ⅲ组严重;3个组神经肌肉功能恢复良好,口轮匝肌动作电位潜伏期和复合神经肌肉动作电位振幅(M波)检测结果经统计学分析无统计学意义(P>0.05);组织学观察3组均可见不同程度纤维结缔组织和新生毛细血管增生及炎性细胞浸润,无论是HE低倍镜还是Gomori银染高倍镜观察,纤维蛋白胶和几丁聚糖-胶原导管作用明显;图像分析结果提示3组轴突再生率不同(P<0.05),Ⅱ组、Ⅲ组均高于Ⅰ组,其中Ⅱ组明显高于Ⅰ组且差异有统计学意义(P<0.01);3个组再生轴突恢复比相似(P>0.05)。结论:几丁聚糖-胶原导管生物相容性良好,与纤维蛋白胶联合应用修复兔面神经损伤操作简便、效果肯定。

医用OB胶联合几丁聚糖—胶原导管修复兔面神经损伤的实验研究

目的:探讨医用OB胶联合几丁聚糖—胶原导管修复兔面神经损伤的效果。方法:30只健康中国大耳白兔随机分为3组,分别为显微外科吻合组(Ⅰ组)、医用OB胶黏合组(Ⅱ组)和医用OB胶几丁聚糖—胶原导管黏合组(Ⅲ组)。手术制作兔右侧面神经下颊支损伤模型,分别采用显微外科吻合、医用OB胶黏合以及在几丁聚糖—胶原导管内OB胶黏合技术进行修复。术后16周进行大体观察、神经电生理检测、组织学观察、图像分析,采用SPSS 17.0软件包对各组数据进行方差分析,评价神经再生恢复情况。结果:16周时,肉眼观察3组吻合口处均见神经再生,可抵抗一定拉力,几丁聚糖—胶原导管吸收明显,能抑制吻合口周围纤维结缔组织形成,Ⅰ组和Ⅱ组再生神经周围软组织黏连较Ⅲ组严重;3组神经肌肉功能恢复良好,口轮匝肌动作电位潜伏期无显著差异(P>0.05),但Ⅲ组的复合神经肌肉动作电位振幅(M波)显著高于Ⅱ组(P<0.05),其余两两比较均无显著差异(P>0.05);组织学观察,3组均可见不同程度纤维结缔组织、新生毛细血管增生及炎性细胞浸润,无论是光学低倍镜还是Gomori银染色高倍镜观察,Ⅲ组的几丁聚糖—胶原导管作用明显;图像分析结果提示,3组轴突再生率不同(P<0.05),Ⅱ组、Ⅲ组均高于Ⅰ组,其中Ⅱ组显著高于Ⅰ组且差异显著(P<0.01);再生轴突恢复比不同(P<0.05),Ⅰ组显著高于Ⅱ组(P<0.05),其余两两比较无显著差异(P>0.05)。结论:几丁聚糖—胶原导管生物相容性良好,与医用OB胶联合应用修复兔面神经损伤操作简便、效果肯定。

肝细胞生长因子交联于胶原导管构建神经导管用于面神经损伤修复

目的将肝细胞生长因子(HGF)交联于胶原导管内构建神经导管,用于大鼠面神经损伤模型,观察其治疗效果。方法购买12只雄性大鼠,将其随机分为HGF组和磷酸缓冲液(PBS)组。分离大鼠面神经颊支,剪去神经干,造成10 mm长神经缺损。术后第8周,对两组大鼠进行功能学分析和形态学观察。结果HGF组大鼠触须运动功能显著改善,而PBS组大鼠触须运动功能没有明显变化。HGF组大鼠神经传导速度明显大于PBS组的大鼠,差别有统计学意义(P<0.01)。同时,髓鞘厚度和再生神经纤维在HGF组大鼠新生神经中显著大于PBS组(P<0.01)。结论将HGF交联于胶原导管内构建的神经导管能有效促进面神经横断伤后功能恢复。

NT-3修饰的施万细胞联合胶原—壳聚糖神经导管对大鼠坐骨神经损伤的修复作用研究

目的观察神经营养素3(NT-3)修饰的施万细胞(SCs)联合胶原—壳聚糖神经导管对大鼠坐骨神经损伤的修复作用。方法将75只SD大鼠随机分为对照组(A组,n=12),模型组(B组,n=10),神经导管单独移植组(C组,n=11),未修饰施万细胞+神经导管移植组(D组,n=20),NT-3修饰施万细胞+神经导管移植组(E组,n=22)。各组大鼠麻醉后,暴露左侧坐骨神经,切除8 mm神经干制备坐骨神经损伤模型,然后分别给予自身坐骨神经翻转吻合后缝合、切除坐骨神经后缝合、神经导管桥接缝合缺损神经、未修饰的施万细胞复合神经导管桥接缝合缺损神经和NT-3修饰的施万细胞复合神经导管桥接缝合缺损神经。S100/Sox10双荧光染色法鉴定从新生SD大鼠提取的施万细胞纯度,RFP标记腺病毒载体(AdvNT-3)确定最佳MOI值,Live/Dead染色法检测术后5 d、11 d移植处施万细胞存活状态,坐骨神经功能指数(SFI)法和电生理检测评估术后大鼠神经功能恢复情况,TUNEL测定神经元细胞凋亡情况,采用透射电镜观察坐骨神经髓鞘再生情况。结果从新生SD大鼠提取的施万细胞纯度为95%以上,NT-3胰腺病毒感染的最佳MOI值为100,且移植后施万细胞在胶原—壳聚糖神经导管中存活状态良好。术后1周,与A组比较,其余各组SFI均明显降低(P<0.05),但其余各组间比较差异无统计学意义(P>0.05);术后4周,与A组比较,其余各组SFI均显著降低(P<0.05),其余各组中E组最高(P<0.05),而B组、C组、D组间无统计学差异(P>0.05);术后7周、10周和13周,与B组和C组相比,D组和E组SFI均显著较高(P<0.05),且E组高于D组(P<0.05),B组和C组比较无统计学差异(P>0.05)。术后13周,与A组相比,其余各组动作电位传导速度显著较低(P<0.05),除E组外其余各组峰峰值均较低(P<0.05);与B组相比,C组、D组和E组动作电位传导速度和峰峰值依次升高(P<0.05)。术后13周,与其他组相比,B组神经元细胞凋亡数量明显较多,神经纤维数量明显较少,且有严重的脱髓鞘变化及轴浆萎缩等异常现象。结论NT-3修饰的施万细胞联合胶原—壳聚糖神经导管有助于神经纤维功能恢复和神经髓鞘再生,对大鼠坐骨神经损伤具有良好的修复作用。

构建Ⅰ型胶原蛋白神经导管及其在前臂正中神经损伤重建中的作用机制

背景:Ⅰ型胶原蛋白是一种高分子材料,生物相容性、细胞亲和力强,能在特定的条件下发生降解。同时,经过交联处理、干预后能获得良好的机械性能,但是在前臂正中神经损伤中的重建效果缺乏研究。目的:探讨Ⅰ型胶原蛋白神经导管制备方法及在前臂正中神经损伤重建中的作用机制。方法:选择由贵州医科大学附属医院医学动物实验中心提供的SD大鼠40只,随机取10只大鼠设为假手术组,剩余30只SD大鼠采用激光诱导光化学反应建立大鼠前臂正中神经损伤动物模型,建模成功后随机分为阳性对照组10只、Ⅰ型胶原蛋白组10只和自体神经组10只。假手术组常规喂养,不参与建模;阳性对照组建模成功后不采取特殊处理,自行修复;Ⅰ型胶原蛋白组采用Ⅰ型胶原蛋白神经导管进行桥接,自体神经组采用自体神经进行桥接,比较各组修复效果。结果与结论:(1)倒置显微镜下可见交联前Ⅰ型胶原蛋白排列松散,呈蜂窝状不规则的孔隙及孔径,孔径大小为10-100μm,孔隙20-200μm,孔隙间质相对较薄,交联后Ⅰ型胶原蛋白排列致密,胶原纤维之间能形成相对规则的孔径、孔隙,大小为50-100μm,孔隙为20-200μm,孔隙间质增厚,空间结构发生明显的变化;(2)Ⅰ型胶原蛋白组与自体神经组修复后4,8,12周翻转及放置明尼苏达手灵巧度评定方法评分,均低于阳性对照组(P <0.05),高于假手术组(P <0.05);(3)Ⅰ型胶原蛋白组、自体神经组修复后12周波幅、潜伏期差异无显著性意义(P> 0.05),但均高于阳性对照组(P <0.05);(4)修复12周后,阳性对照组可见神经损伤部位明显,周围可见坏死组织;自体神经组未见损伤部位,周围坏死面积减少,恢复良好;Ⅰ型胶原蛋白组甲苯胺蓝染色下未见损伤部位,恢复良好;(5)结果提示,通过自制模具能成功制备Ⅰ型胶原蛋白神经导管,将其用于大鼠前臂正中神经损伤重建中能获得良好的修复效果,有助于促进神经损伤修复。

生物材料构建神经导管修复周围神经损伤的临床应用

背景:显微外科技术及周围神经损伤修复技术的发展与神经导管材料密切相关。神经导管的构建特别是生物材料构建神经导管材料还有待进一步开发研究。目的:探讨生物材料构建的神经导管在周围神经损伤修复中的应用及数据分析。方法:SCI数据库中2001/2010检索有关神经导管在周围神经损伤修复中的应用的文献,检索词为"神经导管(nerve conduit);生物材料(biomaterials);周围神经损伤(peripheral nerve injury);神经再生(nerve regeneration);壳聚糖神经导管(chitosan/chitin nerve conduit);高分子神经导管(polymer/macromolecule nerve conduit);胶原神经导管(collagen nerve conduit)",共检索文献183篇。结果与结论:神经导管修复法是在神经断端之间留有一段间隙,利用神经导管在神经的远端和近端之间桥接,并创造相对密闭的环境,以充分发挥远端神经的趋化作用,同时阻隔外部的影响,减少瘢痕的产生。目前,已被用于制备神经导管材料分为非神经组织、非生物降解材料、可生物降解材料。随着分子生物学及其他相关技术的发展,探索寻找理想的材料构建神经导管来治疗周围神经损伤研究始终在进行中。

多孔胶原神经导管联合向类雪旺细胞诱导的脂肪间充质干细胞修复大鼠坐骨神经缺损

目的探讨应用多孔胶原神经导管联合向类雪旺细胞诱导的脂肪间充质干细胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）修复大鼠坐骨神经缺损的效果。方法分离培养大鼠ADSCs，并诱导分化为类雪旺细胞，同时建立鼠坐骨神经缺损模型，取清洁级雄性sD大鼠60只，随机分成3组：自体神经修复组（A组），多孔胶原神经导管修复组（B组），多孔胶原神经导管联合向类雪旺细胞诱导的ADSCs修复组（C组）。术后20周行再生神经电生理学测定、大体观察及组织学观察，分析评价神经再生效果。结果术后20周，C组在神经导管内神经再生明显并长入神经缺损远端，与周围组织粘连较轻；B组可见少量再生神经通过神经缺损断端；A组移植神经与周围组织粘连较重。结论应用多孔胶原神经导管联合向类雪旺细胞诱导的ADSCs具有促进大鼠神经轴突再生的作用，有望成为修复周围神经缺损的一种新方法。

胶原/丝素导管介导雪旺细胞联合神经干细胞修复坐骨神经缺损

目的 观察胶原/丝素导管介导雪旺细胞联合神经干细胞所构建的组织工程化神经修复大鼠10 mm坐骨神经缺损的效果.方法 体外分离培养乳鼠坐骨神经雪旺细胞（SCs）,并做S-100蛋白免疫荧光鉴定;从孕14 - 15 d的SD大鼠体内取出子鼠,分离纯化获得原代神经干细胞（NSCs）进行体外培养.实验分为4组,每组10只：自体神经移植组（A组）、胶原/丝素导管介导雪旺细胞联合神经干细胞移植组（B组）、胶原/丝素导管移植组（C组）、单纯损伤组（D组）.SCs-NSCs与胶原/丝素导管联合培养14 d后,行扫描电镜观察.分别将3种不同移植物桥接于大鼠坐骨神经10 cm缺损处,并在12周后进行大体观察、电生理学检测、形态学观察及计量学分析.结果 术后12周,桥接组都不同程度地实现了坐骨神经缺损再通,且实验动物未出现明显排斥及炎性反应.神经电生理学检测坐骨神经复合肌动作电位（CMAPs）波幅分别为：未手术正常侧（21.00±1.83） mV,A组（15.00±1.12） mV,B组（13.00±1.06） mV,C组（6.00±0.58） mV,透射电子显微镜再生神经纤维髓鞘厚度分别为：A组（0.80±0.15） μm,B组（0.70±0.11） μm,C组（0.30±0.07） μm,D组（0.25±0.06） μm.统计结果表明：A组与B组之间差异无统计学意义（P＞0.05）,但两者相对C组及D组差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 SCs和NSCs能够在胶原/丝素导管上共同生长分化,生物相容性良好.胶原/丝素导管介导雪旺细胞联合神经干细胞所构建的组织工程化神经对坐骨神经缺损的修复具有良好的桥接和促神经生长作用.

借助人工神经修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究

目的研究人工神经 壳聚糖复合胶原导管修复大鼠坐骨神经 15mm缺损的可行性。方法借助人工神经修复 10只大鼠坐骨神经缺损 15mm ,神经缺损 7只为对照组 ,术后 2个月、4个月行免疫组化、Osmium染色、Bodian染色、运动终板的特异染色、WGA HRP神经示踪及大体观察。结果术后 2个月再生神经修复了坐骨神经的缺损 ,实验动物未出现排斥反应及明显的炎症反应。结论人工神经导管对缺损的坐骨神经修复具有良好的桥梁作用和促神经生长的作用。

翻转静脉双桥接兔面神经缺损的实验研究

目的:探讨利用双桥接技术和翻转静脉再生室修复兔面神经缺损的可行性。方法:将实验用30只健康中国大耳白兔随机分成3组,分别为显微外科吻合组(Ⅰ组)、导管双桥接组(Ⅱ组)、翻转静脉双桥接组(Ⅲ组)。手术制作兔右侧面神经下颊支损伤模型,分别采用双桥接技术和原位神经吻合进行修复。术后16周进行大体观察、神经电生理检测、组织学观察、图象分析,以评价神经再生恢复情况。结果:16周时几丁聚糖—胶原再生室吸收明显且无异物反应,IOVG基本完全吸收形成类神经外膜样结构。3个组的神经传导速度(NCV)和复合神经肌肉动作电位振幅(M波)检测结果经统计学分析无显著性差异。图象分析结果提示3个组轴突再生率相同,再生轴突成熟度Ⅰ组与Ⅲ组均高于Ⅱ组而且差异有统计学意义(P<0.05)。结论:利用翻转静脉和双桥接技术联合修复周围神经缺损方法简单、效果肯定。