新型胶原样凝集素的研究进展

胶原样凝集素作为脊椎动物C-型凝集素超家族内的成员,以含有胶原样结构域及糖识别结构域为其显著特征。胶原样凝集素除了"经典"成员甘露聚糖结合凝集素(MBL)、表面活性蛋白A(SP-A)和SP-D外,还发现肝胶原样凝集素1(CL-L1)、肾胶原样凝集素1(CL-K1)和胎盘胶原样凝集素1(CL-P1)。在机体固有免疫系统中,这些"新"型胶原样凝集素除了同"经典"胶原样凝集素一样发挥着十分重要的作用外,它们还具有其独特的生理功能。本文综述了这些新发现的胶原样凝集素的分子结构、组织分布以及生物学功能等方面的研究进展。

胎盘胶原样凝集素1研究进展

胎盘胶原样凝集素1(collectin placenta-1)即C型凝集素样清道夫受体,是一种Ⅱ型膜蛋白,其蛋白结构域融合胶原样凝集素和A型清道夫受体的结构特征,包括螺旋卷曲区、胶原样区、糖识别区(C型凝集素糖识别区)、颈区、胞浆区和跨膜区。胎盘胶原样凝集素1不仅能通过糖识别区和胶原样区的负电荷位点与病原微生物的糖类抗原结合直接发挥宿主防御功能,还能激活旁路补体途径间接参与机体固有免疫。此外,胎盘胶原样凝集素1通过摄取ox-LDL和清除β-淀粉样蛋白分别参与动脉粥样硬化和阿尔茨海默病的病理过程。

重组人肝脏胶原样凝集素1在中国仓鼠卵巢细胞内定位

目的:使用已构建的真核表达载体pEGFP-CLL1转染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,探讨CL-L1在CHO细胞内的定位。方法:使用免疫荧光标记技术和Western blot检测EGFP-CLL1融合蛋白在细胞内的表达部位。结果:融合蛋白主要存在于细胞质基质中,不存在于内质网、高尔基体和细胞核等部位。结论:CL-L1为已发现惟一存在于细胞质基质中的胶原样凝集素成员。

人肝脏胶原样凝集素1在肝癌细胞株HepG2内的定位及其功能探讨

目的观察人肝脏胶原样凝集素l(CL-L1)在肝癌细胞株HepG2内的定位及其功能。方法利用pcDNA3.1/myc-his和pEGFP-N1载体将CL-L1基因转染HepG2细胞,通过免疫荧光标记技术及激光共聚焦显微镜观察CL-L1在HepG2细胞内的定位及HepG2细胞的克隆形成能力。结果 CL-L1主要定位于HepG2细胞的细胞质基质中,高尔基体、内质网和细胞核中不存在CL-L1。CL-L1基因过表达可引起HepG2细胞克隆形成能力的明显下降。结论 CL-L1定位于HepG2细胞的细胞质基质,可能是肝癌相关抑癌基因。

人CL-L1基因片段的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备

目的获取重组人CL-L1颈区-糖识别区纯化蛋白,制备多克隆抗体。方法采用PCR方法扩增人CL-L1颈区-糖识别区目的基因片段,构建原核表达载体,进行原核表达与蛋白纯化,然后免疫家兔,制备多克隆抗体。采用ELISA检测抗体效价,免疫印迹法检测蛋白纯度和抗体的特异性。结果成功构建了人CL-L1颈区-糖识别区原核表达载体pRSET-C/NECK-CRD△K,在E.coliBL21中表达,镍亲和层析柱纯化,得到相对分子质量19 200的融合蛋白,免疫家兔后收获抗血清,ELISA显示抗体效价为1/20 000,具有高度特异性,免疫印迹结果显示制备的多抗可以与重组人CL-L1颈区-糖识别区蛋白特异性结合。结论本研究获得了人CL-L1颈区-糖识别区纯化蛋白,制备了人CL-L1颈区-糖识别区多克隆抗体,为CL-L1的结构、组织表达谱和功能的研究奠定了基础。