扶正化瘀方影响肝脏胶原生成的拆方配伍研究

将扶正化瘀方拆分为扶正组、化瘀组、虫草组、丹参组及丹参加虫草组。制备各组合药血清,分离培养大鼠肝星状细胞,观察含药血清对培养星状细胞增殖活化、Ⅰ型胶原蛋白及其mRNA表达的影响。复制二甲基亚硝胺大鼠肝纤维化模型,以全方及拆方组治疗,观察模型大鼠肝脏羟脯氨酸(Hyp)含量与胶原沉积的变化。结果各组含药血清均可抑制星状细胞的增殖和活化,其中化瘀药效果最明显;各组含药血清均可抑制星状细胞Ⅰ型胶原mRNA及其蛋白的生成,以扶正组效果最佳。对DMN模型肝纤维化的治疗中,以全方组降低肝组织Hyp含量与胶原沉积最为明显,化瘀药与扶正药配伍后减轻胶原生成作用增强,全方具有较好的综合效果。说明扶正化瘀方有较好的抑制星状细胞增殖与胶原基因表达作用,是该方抗肝纤维化作用的重要机理,其中扶正药重在抑制胶原生成,化瘀药长于抑制星状细胞增殖,而全方具有综合效果。

扶正化瘀方对原代培养肝细胞增殖及胶原生成率影响的血清药理学研究

肝纤维化是各种慢性肝病发展的渐进过程,目前对肝纤维化的防治尚无疗效确切的药物。既往的研究表明,扶正化瘀方(由桃仁、丹参、虫草等组成)能抑制胶原合成,促进胶原降解,恢复肝脏结构及功能,有良好的抗肝纤维化作用。为进一步探讨其抗肝纤维化的作用及机理,本研究采用正常大鼠灌胃给药,分离血清作用于培养细胞的血清药理学方法,探讨该方对原代培养大鼠肝细胞增殖及胶原生成率的影响。1

白细胞介素-2和α-干扰素抑制胶原生成的实验研究

目的:应用电子显微镜观察白细胞介素-2、α-干扰素对体外培养成纤维细胞超微结构的影响,阐述白细胞介素-2、α-干扰素治疗瘢痕作用机制。方法:成纤维细胞培养后加入白细胞介素-2和α-干扰素,继续培养两三天,并做空白对照比较,通过扫描和透射电镜观察成纤维细胞微结构。结果:扫描电镜观察结果成纤维细胞表面纤维状物质和泡状突起明显减少。透射电镜观察结果成纤维细胞胞质内粗面内质网明显减少,所见内质网显著扩张,腔中内容物稀少,有的甚至雾泡化,粗面内质网上的核蛋白体有不同程度的脱颗粒和解聚现象,线粒体肿胀或空泡化。结论:白细胞介素-2、α-干扰素对成纤维细胞合成胶原有抑制作用。白细胞介素-2、α-干扰素抑制胶原生成可能是治疗瘢痕作用机制的一个方面。

骨折愈合中胶原生成及其调控的研究进展

胶原蛋白是骨中的重要成分,决定了骨的强度。目前共发现19种不同基因编码的胶原蛋白,在骨修复中起直接作用的有Ⅰ～Ⅲ、Ⅴ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ、ⅩⅣ型胶原等,它们在骨折愈合过程中的基因表达和生成都具有时间、空间上的规律性,并且各型胶原蛋白之间相互影响,受骨折类型、机械因素、细胞因子及糖尿病等病理状态的调节。探讨骨折愈合中胶原生成及其调控规律,对于阐明骨折愈合分子机制,寻找促进骨折愈合的措施,具有重要意义。

BMP诱导成骨过程中胶原生成及TGF-β1的促进作用

目的：通过探讨骨形态发生蛋白（BMP）诱导成骨过程中骨胶原氨基酸的变化规律及转化生长因子β1（TGF－β1）对骨胶原生成的促进作用，进一步阐明BMP的诱导成骨机理和TGF-β1的骨损伤调节作用。方法：实验采用日本土耳白兔左尺骨中段12mm骨缺损实验模型，分为BMP组、实验组及对照组，缺损内分别植入BMP／载体、BMP／TGF-β1／载体及单纯载体，植入后第1、2、3、4、5周检测三组缺损内胶原羟脯氨酸（HydroxyprolineHP）及羟赖氨酸（HydroxylysineHL）县的变化，并作胶原VG染色图像分析及电镜观察。结果：实验组胶原HP形成明显高于同期BMP组及对照组，软骨期缩短，Ⅰ期胶原形成时间提前、生成量增加，胶原总量也明显高于同期BMP组及对照组。结论：TGF－β1可使骨胶原在BMP诱导成骨过程中生成增加，改变BMP的软骨内成骨方式，从而增强BMP的诱导成骨作用。TGF－β1主要通过促进成骨细胞生成使Ⅰ型胶原生成增加，BMP、TGF－β1两者在骨损伤修复中具有协同作用。

注射透明质酸可刺激胶原生成，改善皮肤结构

美国密西根州医学院Wang博士等报告，注射含有透明质酸的皮肤填充剂可以刺激胶原（皮肤的一种初级蛋白质）产生，并且能局部修复晒伤皮肤的结构[Arch Dermatol 2007，143（2）：155]。

实验性纤维化肝内胶原生成细胞的研究

目的探讨大鼠肝纤维化胶原生成细胞的来源。方法利用免疫组织化学及原位分子杂交技术，对不同阶段（２０周）ＣＣｌ４诱导ＳＤ大鼠纤维化肝内胶原生成细胞Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型前胶原ｍＲＮＡ及其相应胶原蛋白的表达状况进行观察。结果实验早期（２～６周），于中央静脉周围坏死区或其附近聚集的结蛋白（ｄｅｓｍｉｎ，Ｄｍ）和α－平滑肌肌动蛋白（α－ｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅａｃｔｉｎ，α－ＳＭＡ）阳性的Ｉｔｏ细胞及肌成纤维细胞（ｍｙｏｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ，ＭＦ）表达α１（Ⅰ）、α１（Ⅲ）及α１（Ⅳ）前胶原ｍＲＮＡ，其定位与同期该区域内免疫组化显示的相应胶原的分布相对应。实验中期（８～１２周），前胶原ｍＲＮＡ杂交信号见于间隔内的ＭＦ、成纤维细胞（Ｆｂ）及间隔旁少量Ｉｔｏ细胞。实验后期（１６～２０周），除新生的“子间隔”外，三种前胶原ｍＲＮＡ杂交信号主要局限于间隔内的Ｆｂ。另外，在肝纤维化的不同阶段肝窦内皮细胞均可见较强ａ１（Ⅳ）前胶原ｍＲＮＡ杂交信号。肝细胞、胆管细胞及卵圆细胞等未显示胶原生成的任何迹象。结论Ｉｔｏ细胞是肝纤维化时肝内Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原生成的先驱细胞，纤维化后期肝内胶原主要来源于间隔内的Ｆｂ及ＭＦ。肝窦内皮细胞作为肝内Ⅳ型胶?

丹参酸乙对大鼠肝细胞增殖及胶原生成的影响

观察丹参酸乙对肝细胞增殖及胶原生成率的影响，探讨其抗肝纤维化作用机制。方法灌流法分离肝细胞进行体外原代培养，［３Ｈ］－ＴｄＲ掺入检测细胞增殖率，［３Ｈ］－脯氨醉掺入、胶原酶消化法检测胶原生成率，凝胶法测定胶原酶活性。结果丹参酸乙可显著促进肝细胞增殖，提高细胞内总蛋白生成量，降低胶原蛋白生成，抑制胶原生成率；提高细胞分泌的间质型脐原酶活性，抑制细胞外的胶原生成率，均以１０－６ｍｏｌ／Ｌ浓度最好（与对照组比较，Ｐ值＜０．０５）。结论丹参酸乙可促进肝细胞增殖，抑制细胞的胶原生成。在抗肝纤维化治疗中具有特殊的意义。

柔肝冲剂抗肝纤维化的动物实验

为研究柔肝冲剂(主药:黄芪、丹参、郁金)抗肝纤维化的作用,以Wistar雄性大鼠腹腔注射二甲基硝胺制作肝纤维化模型。观察柔肝冲剂对模型鼠纤维化相关指标的影响。结果:柔肝冲剂能抑制模型鼠肝脏胶原蛋白的合成;病理切片显示,柔肝冲剂有减轻肝脏炎症反应,保护肝细胞作用;NOrthem印迹分子杂交结果显示,柔肝冲剂能降低模型鼠纤维肝α_1(Ⅰ)、α_1(Ⅲ)和α_1(Ⅳ)前胶原mRNA的表达。提示:柔肝冲剂能同时影响肝脏间质细胞和实质细胞胶原基因的表达,减少胶原的生成,从而抑制肝纤维化的发展。

核心蛋白聚糖在肌腱愈合中的作用研究进展

核心蛋白聚糖是一种小分子蛋白聚糖,不但能调节胶原生成,而且能负性调节转化生长因子-β。核心蛋白聚糖在肌腱愈合中的抗纤维化作用能提高肌腱愈合质量。

PGA无纺网与PDLCs的3D共培养物在裸鼠体内的生长观察

目的:通过研究人牙周韧带细胞(PDLCs)与聚羟基乙酸(PGA)无纺网共培养物在裸鼠体内的生长,探讨PGA无纺网作为支架应用于牙周组织工程的可能性。方法:将共培养7d的人PDLCs与PGA无纺网复合物接种于BALB/C裸小鼠一侧背部皮下,另一侧植入空白PGA为对照。分别于1、2、3、4周取材进行大体及HE和Masson's染色及I型胶原免疫组织化学观察,并进行新生毛细血管记数。结果:随着PGA无纺网在体内的逐渐降解,PDLCs同步增殖,分泌胞外基质。体内2周时即可见实验侧植入物血管化良好并有胶原束的形成,Ⅰ型胶原表达阳性。结论:PGA无纺网具有良好的生物相容性和生物安全性,并易于新生血管的形成,作为牙周组织工程的细胞支架有良好的应用前景。