牛肌腱胶原纤维凝胶的特性表征

采用酸-酶结合法制备牛肌腱胶原纤维凝胶。研究了浓度、温度及pH值对胶原纤维凝胶黏度与吸水率的影响，用激光粒度仪测定胶原纤维凝胶的等电点，通过扫描电镜考察了胶原纤维凝胶海绵的断面、表面及胶原纤维束的形貌。结果表明：胶原纤维凝胶的等电点为4．22±0．04；胶原纤维凝胶经冷冻干燥后形成孔隙均匀的三维网状结构，孔径约为90-250μm，胶原纤维直径约为0．1～1.0μm。DSC分析测得胶原纤维凝胶海绵的热变性温度为66．8℃。在试验研究范围内，胶原纤维凝胶的黏度随其浓度的增高而增大，随温度的升高呈下降趋势，随剪切速率增大而降低。随pH值的升高，胶原纤维凝胶的黏度先降低后升高，胶原纤维的吸水倍率呈现升高后降低的趋势。当其pH值为3．5时，其吸水倍率达到289．8g／g，黏度降至最低值。

利用牛胶原构建人工真皮

目的制备成纤维细胞胶原凝胶(即真皮替代物),以研究细胞的生长、分化、增生及真表皮间的相互作用,为研制大面积创面覆盖物-复合皮奠定基础。方法(1)酶消化法培养胎儿成纤维细胞;(2)制备细胞胶原凝胶,分为Ca-gel和Cf-gel组,接种后于不同时间观察两组细胞的形态变化和胶原凝胶的收缩情况;(3)细胞计数;(4)SEM观测胶原凝胶的表面是否有成纤维细胞附着;(5)HE染色。结果(1)成纤维细胞形态及增殖情况:成纤维细胞胶原凝胶形成后呈半透明状,可出现较明显的细胞增殖,并可见凝胶收缩现象,但Ca-gel组较小;人工真皮质地与颜色近似真皮组织,有一定的弹性和抗拉性,不易脆。(2)细胞计数法所得两组生长曲线基本相似。Ca-gel和Cf-gel组细胞均具有典型的细胞增殖现象,Cf-gel组细胞在后期的增殖略快于Ca-gel组。(3)扫描显微镜下可见到凝胶表面有梭形的成纤维细胞出现,且成纤维细胞紧密贴附于凝胶上。(4)HE染色可见胶原呈较均一的淡红色网状分布,成纤维细胞分布于胶原凝胶内部和表面。结论(1)培养好的细胞凝胶称之为真皮替代物,是进行皮肤器官型培养和制作复合皮的关键与基础,并可与培养的人工表皮膜片混合移植,起到促进表皮细胞的生长粘附和加速创面愈合的作用。(2)成纤维细胞在胶原凝胶中有着活跃的生物学特性。

氟对小鼠成纤维细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的观察氟在单层细胞培养系统即二维（2D）培养体系和成纤维细胞（FB）胶原凝胶系统即三维（3D）培养体系中对小鼠FB血管内皮生长因子（VEGF）mRNA及蛋白表达的影响，探讨VEGF表达改变对FB成骨功能的作用。方法在2D、3D培养体系中，FB按染氟剂量不同分为0（对照）、0．0001、0．0010、0．1000、1．0000、10．0000、20．0000mg／L组，染氟培养48h后，应用RT—PCR法、酶联免疫吸附法（ELISA）和免疫组化方法（IHC）检测VEGF mRNA和蛋白的表达。结果3D培养体系中，0．1000mg／L组VEGF mRNA表达（1．08±0．09）高于对照组（0．93±0．02，P〈0．05）。2D培养体系中，0．1000、1．0000、10．0000mg／L组VEGF蛋白表达（0．19±0．02、0．26±0．01、0．32±0．01）高于对照组（0．14±0．01，P均〈0．05）；3D培养体系中，0．1000、1．0000ms／L组VEGF蛋白表达（0．59±0．06、0．52±0．03）高于对照组（0．37±0．05，P均〈0．01）。2D培养体系中，0．0010mg／L组VEGF蛋白阳性表达细胞数（0．45±0．05）高于对照组（0．36±0．03，P〈0．05）；3D培养体系中，0．0010、0．1000、1．0000mg／L组VEGF蛋白阳性表达细胞数（0．62±0．04、0．70±0．06、0．65±0．07）高于对照组（0．44±0．04，P〈0．05或〈0．01）。结论2D和3D培养体系中FBVEGF mRNA和蛋白，提示VEGF在氟化物刺激FB成骨功能增强方面具有重要作用。