胶原包被条件对血管性血友病因子胶原结合法测定FⅧ制品中血管性血友病因子的影响

目的通过考察不同胶原包被条件对血管性血友病因子(von willebrand factor,vWF)与胶原结合的影响,建立vWF胶原结合法(vWF collagen binding assay,vWF:CBA)检测FⅧ制品中vWF活性。方法将胶原Ⅲ分别按以下4组条件包被ELISA板:不同pH(2.8、4.0、5.2、6.4、7.4、8.8、9.8)的缓冲液,不同盐浓度(0、0.05、0.1、0.15、0.2、0.3、0.4、0.6 mol/L NaCl)的缓冲液,不同胶原Ⅲ浓度(5、2.5、1、0.5、0.25、0.125μg/ml),不同包被温度(4、25、37℃)。以5个不同稀释度的vWF标准品为样品,进行vWF:CBA法测定,每种包被条件下绘制1条标准曲线,同时检测每种包被条件下方法的重复性。将标准曲线线性和方法重复性较好的几组条件做为最佳包被条件,验证该包被条件下vWF:CBA法的特异性、重复性,获得标准曲线范围。结果当胶原Ⅲ溶解于含0.15 mol/L NaCl,pH 6.4的磷酸缓冲液中,在4℃条件下以2.5μg/ml包被时,vWF与胶原的结合效率较高。将该包被条件下的vWF:CBA法用于测定冷沉淀上清及FⅧ制品中vWF活性,具有较好的特异性和重复性。结论不同的包被条件对胶原结合法测定vWF活性具有较大的影响,因此,在采用胶原结合法测定FⅧ制品中vWF活性时,应对包被条件进行优化。

两种检测ADAMTS13活性的方法在临床应用中的比较

目的比较残余胶原结合法(collagen binding assay,CBA)和以VWF73为底物的荧光共振能量转换法(fluorescence resonance energy transfer assay,FRET assay)在鉴别血栓性血小板减少性紫癜(thrombotic thrombocytopenic purpura,TTP)和非TTP患者中的价值。方法收集疑诊TTP患者的血浆标本,分别采用CBA和FRET-VWF73检测方法进行ADAMTS13活性的检测,并收集患者的临床资料,根据最后诊断进行分析。统计分析采用SPSS 13.0软件进行。结果111例疑诊TTP的患者接受了119次检测,临床确诊为TTP的患者47名,TTP治疗后恢复期15例患者,临床诊断为非TTP患者49例,异基因造血干细胞移植术后微血管病变患者8例。CBA法对TTP患者的阳性预测值为78.7%(37/47),假阴性率21.3%(10/47);FRET-VWF73法对TTP患者的阳性预测值为93.6%(44/47),假阴性率6.4%(3/47)。临床诊断为非TTP患者49例,CBA法阴性预测值为79.6%(39/49),假阳性率为20.4%(10/49);FRET-VWF73方法阴性预测值为100%(48/48)明显高于CBA法(P<0.05),其假阳性率为0%(0/49)。TTP治疗后恢复期15例患者,CBA法阴性预测值85.7%(12/14);FRET法阴性预测值100%。结论 FRET法更为敏感、准确,且操作简便,能较快得到结果,在TTP的诊断中更有应用价值。