Notch信号通路相关微小RNA在胶原蛋白诱导的关节炎小鼠免疫细胞中的表达

目的研究胶原蛋白诱发关节炎(CIA)小鼠T细胞中Notch信号通路相关微小RNA(miRNA)的表达情况。方法用牛Ⅱ型胶原蛋白和佐剂免疫DBA/1J小鼠建立CIA小鼠模型,分离外周血单个核细胞(PBMC),采用流式细胞术分选CIA小鼠和正常对照小鼠外周血、脾脏、淋巴结CD4^+T细胞和CD8^+T细胞。实时荧光定量PCR检测PBMC及T细胞中Notch信号通路相关miRNA分子的表达水平。结果与正常对照相比,CIA小鼠PBMC中miR-200b-3p、miR-30c-5p、miR-30b-5p及miR-23b-3p的表达水平均明显降低,miR-200b-3p、miR-30c-5p及miR-30b-5p在CIA小鼠外周血、脾脏、淋巴结CD4^+T细胞和CD8^+T细胞中的表达与正常对照相比未见明显差异,而CIA小鼠外周血、脾脏CD4^+T细胞中miR-23b-3p的表达水平显著低于正常对照小鼠,外周血CD4^+T细胞中的miR-23b-3p来源于脾脏。结论 miR-23b-3p可能参与Notch信号对CIA小鼠T细胞的免疫调控。

基于Hepcidin和JAK2/STAT3信号通路探讨通痹颗粒 对胶原诱导性关节炎大鼠的影响

目的研究通痹颗粒对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠铁调素(hepcidin,Hepc)、Janus激酶(janus kinase,JAK)2/信号转导子和转录激活子(signal transduction and activator of transcription,STAT)3信号通路的影响。方法选取36只雌性SD大鼠随机分成空白组、模型组、阳性对照组和通痹颗粒低、中、高剂量组,每组6只。空白组不予处理,其余组用牛Ⅱ型胶原建立CIA模型。造模完成后,空白组、模型组予生理盐水灌胃,其余各组分别以巴瑞替尼片和低、中、高剂量通痹颗粒灌胃。每天1次,连续4周。HE染色行滑膜组织病理学观察;酶联免疫吸附法测定血清Hepc、白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)水平;逆转录-聚合酶链反应法测定滑膜中JAK2、STAT3、细胞信号因子传导抑制体(suppressor of cytokine signaling,SOCS)1、SOCS3的mRNA相对表达量;Western blot法检测滑膜中JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、SOCS1、SOCS3的蛋白表达量。结果模型组见滑膜上皮结构缺损,滑膜重度增生,排列紊乱,并有大量炎症细胞浸润和多个血管翳形成;各给药组滑膜炎症均有所减轻,阳性对照组优于通痹颗粒高剂量组,通痹颗粒中、高剂量组优于低剂量组。与模型组相比,各给药组关节炎指数评分、血清Hepc和IL-6水平均显著降低(P<0.01);与阳性对照组相比,通痹颗粒中、低剂量组关节炎指数评分、血清Hepc和IL-6水平均升高(P<0.05)。与模型组比较,阳性对照组和通痹颗粒低、中、高剂量组JAK2、STAT3 mRNA和蛋白以及p-JAK2、p-STAT3的蛋白表达量均降低(P<0.05),而通路抑制因子SOCS1、SOCS3 mRNA和蛋白的表达均升高(P<0.05);与阳性对照组比较,通痹颗粒各剂量组JAK2、STAT3 mRNA和蛋白以及p-JAK2、p-STAT3的蛋白表达量均升高(P<0.05),而SOCS1、SOCS3 mRNA和蛋白的表达均降低(P<0.05)。结论通痹颗粒能够改善CIA大鼠滑膜炎症,其机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路而减少Hepc的表达有关。

成纤维细胞生长因子受体1 抑制剂对胶原诱导关节炎模型大鼠骨破坏的影响

背景:课题组前期的研究表明靶向成纤维细胞生长因子受体1(fibroblast growth factor receptor 1,FGFR1)可能是治疗类风湿性关节炎的有效靶点。目的:探讨FGFR1抑制剂(PD173074)对胶原诱导关节炎模型大鼠骨破坏的影响。方法:将25只雌性SD大鼠随机分为5组,正常对照组、模型组、甲氨蝶呤组、PD173074低剂量组、PD173074高剂量组。除正常对照组外,其余各组大鼠建立Ⅱ型胶原诱导关节炎模型。造模成功后正常组及模型组大鼠腹腔注射无菌PBS,甲氨蝶呤组药物注射剂量为1.04 mg/kg,PD173074低剂量组和高剂量组药物注射剂量分别为5,20 mg/kg,1次/周。给药4周后取材,观察大鼠临床症状以及关节肿胀情况,踝关节Micro-CT三维重建及分析,观察踝关节病理变化,检测关节周围血管生成情况及核因子κB受体活化因子配体的表达,检测关节滑膜中p-FGFR1、血管内皮生长因子A、抗酒石酸酸性磷酸酶的表达,观察肝、脾、肾病理变化并计算肝、脾、肾指数。结果与结论:①PD173074能够减轻模型大鼠踝关节临床症状及关节肿胀,延缓骨质丢失,改善骨结构,减轻关节滑膜侵袭以及软骨骨侵蚀,降低关节周围破骨细胞数量,抑制关节滑膜组织中的血管生成,降低核因子κB受体活化因子配体的表达,抑制FGFR1磷酸化蛋白、抗酒石酸酸性磷酸酶和血管内皮生长因子A的蛋白表达。②大鼠肝、脾、肾病理观察表明经过PD173074治疗后无明显的毒副作用。③研究证明了FGFR1抑制剂能够延缓Ⅱ型胶原诱导关节炎模型大鼠关节炎症及骨破坏的进展,并抑制血管的生成。初步验证了PD173074在Ⅱ型胶原诱导关节炎模型中的治疗作用,其可能是通过抑制FGFR1磷酸化发挥作用,为寻找类风湿性关节炎新的治疗靶点提供了方向。

性别差异对牛Ⅱ型胶原诱导的类风湿关节炎模型的影响

目的构建雌性及雄性牛Ⅱ胶原诱导的关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型,比较性别差异对CIA模型关节及关节外表现的影响。方法选用雌性及雄性SD大鼠并注射牛Ⅱ型胶原和弗氏完全佐剂诱导CIA模型,评估各组大鼠的一般情况、关节炎指数、足肿胀度、血清炎症因子及纤溶酶原激活物抑制剂水平、脾指数、膝关节及踝关节病理、右后足爪骨破坏情况、肺间质病变情况。结果雌性CIA大鼠的关节炎指数在初次免疫后第21天较雄性CIA大鼠显著升高(P<0.05),但两组足肿胀度在观察的任一时间点均无显著差异(P>0.05);雌性CIA大鼠血清肿瘤坏死因子α、白介素1β和脾指数均较雄性CIA大鼠显著升高(P<0.05,P<0.001),纤溶酶原激活物抑制剂水平无显著差异(P>0.05);雌性CIA大鼠膝关节和踝关节病理的炎症细胞浸润及滑膜增生评分较雄性CIA大鼠显著升高(P<0.05),雌性CIA大鼠膝关节软骨损伤及右后足爪骨破坏程度均较雄性显著升高(P<0.05);雌性和雄性CIA大鼠均出现了肺间质炎症细胞浸润及轻度纤维化,但雌性比雄性的肺间质病变更重。结论使用SD大鼠构建的雌性及雄性CIA模型均能兼具关节炎及肺间质病变,但雌性CIA大鼠的病变程度更重,在使用CIA模型进行RA相关研究时应关注性别差异带来的影响。

穿山龙薯蓣皂苷通过调控自噬治疗胶原诱导性关节炎小鼠模型的机制

目的探讨穿山龙薯蓣皂苷通过自噬治疗胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型小鼠的作用机制。方法通过鸡Ⅱ型胶原乳剂建立CIA模型小鼠,初次免疫DBA1小鼠(0.1 mL),第21天后再次给予相同剂量刺激。加强免疫后将胶原免疫的50只小鼠随机分组为CIA模型组、雷公藤组和穿山龙薯蓣皂苷低、中、高剂量组,另有10只小鼠注射等量生理盐水作为对照组。在对小鼠进行连续14天灌胃治疗并观察各组小鼠足爪的炎症程度,取下各组小鼠脾、腹股沟淋巴结和踝关节、膝关节,对踝关节、膝关节进行HE染色,检测各组淋巴结、脾组织中mRNA和蛋白质水平的相关自噬指标。结果与CIA模型组相比,穿山龙薯蓣皂苷高剂量组关节炎指数(AI)评分降低(P<0.05);雷公藤组及穿山龙薯蓣皂苷组足爪厚度差值减小(P<0.01)。与对照组相比,CIA模型组体质量明显下降(P<0.01);小鼠膝关节滑膜和足爪踝关节HE染色结果显示CIA模型组对比对照组出现免疫细胞浸润、骨质侵蚀、软骨破坏和滑膜增生的症状;雷公藤组与穿山龙薯蓣皂苷中、高剂量组对CIA模型有不同程度的治疗作用,可以减轻和预防症状。与CIA模型组相比,雷公藤组和穿山龙薯蓣皂苷治疗组中LC3、Beclin-1的mRNA水平和蛋白水平的表达升高,p62的mRNA水平和蛋白水平的表达降低。结论穿山龙薯蓣皂苷可能通过抑制自噬对CIA模型小鼠起到治疗作用。

基于IL-6/STAT3通路研究苗药方剂“四大血”对胶原诱导性关节炎小鼠的保护作用

目的基于白细胞介素-6(IL-6)/STAT3通路研究苗药方剂“四大血”(SX)对胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠的保护作用机制。方法取40只C57BL/6雄性小鼠随机均分为4组[正常组、模型组、SX组和甲氨蝶呤(MTX)组],采用鸡Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂混合乳化剂诱导类风湿性关节炎(RA)小鼠模型。造模成功后按照实验分组(每组6只)进行灌胃给药。分别检测各组小鼠的足肿胀程度、关节病理改变、关节炎指数(AI)评分、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-6水平、关节滑膜组织中p-STAT3蛋白表达情况。结果SX对RA疾病相关指标有显著改善作用,可以降低小鼠足肿胀程度、关节炎滑膜炎症、AI评分、TNF-α和IL-6水平,抑制p-STAT3蛋白的表达。结论SX可以发挥明显的抗RA作用,其可通过抑制IL-6/STAT3信号通路蛋白(p-STAT3)表达发挥对CIA小鼠的保护作用。

程氏蠲痹汤通过抑制PI3K/AKT/mTOR通路激活减轻胶原蛋白诱导关节炎(CIA)大鼠炎症

目的探索程氏蠲痹汤(JBT)对胶原蛋白诱导关节炎(CIA)大鼠治疗的可能机制。方法将雌性SD大鼠分为正常组、CIA模型组、甲氨蝶呤(MTX)组、不同剂量JBT组、LY294002(PI3K阻断剂)组。评估JBT对实验大鼠治疗前后足趾肿胀度、关节炎指数测定的影响,HE染色检测滑膜组织病变情况,ELISA检测大鼠滑膜组织匀浆中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。实时定量PCR检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、beclin-1、P62的mRNA表达水平,Western blot法检测AKT、磷酸化的AKT(p-AKT)、mTOR、磷酸化的mTOR(p-mTOR)、PI3K、磷酸化的PI3K(p-PI3K)、P62、beclin-1、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)蛋白表达。结果与正常组相比,给药前1 h,其余各组大鼠足趾明显肿胀。与给药前1 h相比,高剂量JBT组、MTX组、LY294002组给药30 d后,采血前2 h足趾肿胀明显缓解。JBT能显著减轻大鼠足趾肿胀度、关节炎指数评分、滑膜组织的破坏。高剂量JBT组大鼠滑膜样本IL-1β、TNF-α水平以及PI3K、AKT、mTOR、P62的mRNA表达水平降低,p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、P62蛋白水平明显降低,beclin-1 mRNA和蛋白表达、LC3B蛋白水平明显升高。结论JBT可能通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路的激活减轻关节炎症,高剂量JBT的治疗效果与MTX、LY294002的治疗效果相当。

大黄素对胶原诱导性关节炎大鼠的骨保护作用:基于抑制铁死亡和降解基质金属蛋白酶

目的探讨大黄素对类风湿关节炎(RA)铁死亡相关信号通路介导的骨保护作用机制。方法除正常组外,使用200μL不完全弗氏佐剂乳化的牛二型胶原构建胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的类风湿关节炎模型。21 d后分为正常组(Normal)、模型组(Model)、甲氨蝶呤组(MTX,0.2 mg/kg,3次/周)、大黄素(Emo)高(80 mg·kg^(-1)·d^(-1))、低(40 mg·kg^(-1)·d^(-1))剂量组,10只/组。记录大鼠造模之后的关节炎评分和足趾体积;使用丙二醛(MDA)试剂盒检测组织MDA含量;用番红固绿染色法、苏木精-伊红染色法对踝关节石蜡切片进行染色,光镜下观察大鼠踝关节组织形态学改变;用免疫组织化学法对踝关节切片的基质金属蛋白酶(MMP)3、13进行染色,光镜下观察大鼠踝关节MMPs的表达;Western blot法检测大鼠踝关节组织中长链酯酰辅酶A合成酶4(ACSL4)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、铁蛋白重链1(FTH1)的蛋白质含量。结果与正常组相比,模型组大鼠的关节炎评分指数、足趾肿胀度增高(P<0.05);软骨表面粗糙,软骨细胞丢失、排列杂乱稀疏;MDA含量和ACSL4的蛋白质含量升高,SLC7A11、GPX4、FTH1的含量降低(P<0.05);踝关节MMP3和MMP13的表达量升高;与模型组相比,MTX组和大黄素(40 mg/kg、80 mg/kg)组的关节炎评分指数、足趾肿胀度降低(P<0.05),软骨表面相对光滑平整,软骨细胞排列整齐,MDA含量升高(P<0.05);MTX组和大黄素高剂量组ACSL4的蛋白质含量降低,SLC7A11、GPX4、FTH1的含量升高(P<0.05)。结论大黄素能有效控制CIA大鼠关节炎症、改善关节骨侵蚀。调节铁死亡相关信号通路ACSL4、SLC7A11、GPX4、FTH1的含量,降低MMP3和MMP13的表达,可能是其抑制RA骨破坏的重要机制和途径之一。

亲水胶体调控肌原纤维蛋白热诱导凝胶形成机制的研究进展

肌原纤维蛋白(myofibrillar protein,MP)是肌肉中非常重要的蛋白质,其在热诱导过程中能够形成三维凝胶网络结构,从而最终影响肉制品的品质特性。在肉类工业中,添加不同来源的亲水胶体能够显著增强MP凝胶强度、持水性及相关的功能特性,从而获得具有最佳品质的终产品。然而,在MP热诱导凝胶的形成过程中,有很多因素直接影响亲水胶体与MP之间的相互作用,最终对MP凝胶特性产生显著影响。本文系统综述了MP的凝胶机理,探讨了不同亲水胶体与MP之间的互作机制,梳理了亲水胶体调控MP热诱导凝胶形成的关键因素及其对最终MP凝胶特性的影响,为亲水胶体调控肉制品品质关键技术体系奠定理论基础,并为下一步实际应用提供技术指导。

石斛多糖对胶原诱导关节炎小鼠免疫活性的影响

目的探究石斛多糖(DSP)对胶原蛋白诱导关节炎(CIA)小鼠体内辅助T(Th17)/调节性T(Treg)细胞比例平衡及免疫炎症的影响。方法构建CIA小鼠,通过关节HE染色和后肢右爪形态观察进行模型鉴定。分别给予CIA小鼠100、200和300 mg/kg DSP灌胃处理将小鼠分为对照组,模型组,低、中、高浓度DSP组。观察小鼠足爪病变情况,HE染色观察小鼠右肢滑膜组织病理改变,流式细胞术检测小鼠脾脏中Th17细胞,Treg细胞比例和CD4^(+)CD28^(-)PD-1^(low)OX40^(+)T细胞比例的变化,免疫组化法观察小鼠右肢膝关节中IL-7的表达水平,ELISA检测不同时间点(0、14、28、42 d)小鼠血清IL-6、IL-10及小鼠右肢膝关节IL-6和IL-10表达水平。结果与对照组小鼠相比,模型组小鼠足爪病变加重,滑膜组织病理变化明显,Th17细胞比例上升,Treg细胞和CD4^(+)CD28^(-)PD-1^(low)OX40^(+)T细胞比例下降,IL-7阳性表达增加,Foxp3阳性表达下降,血清和膝关节中IL-6水平增加,IL-10水平下降(均P<0.0.5)。与模型组相比,低、中、高浓度DSP组小鼠足爪病变减轻,滑膜组织病理变化改善,Th17细胞比例下降,Treg细胞和CD4^(+)CD28^(-)PD-1^(low)OX40^(+)T细胞比例上升,IL-7阳性表达减少,Foxp3阳性表达增多,血清和膝关节中IL-6水平下降,IL-10水平增加(均P<0.0.5),且高浓度DSP作用效果最好。结论DSP对CIA小鼠体内Th17/Treg细胞比例平衡具有调节作用,能抑制炎症反应,减轻病理改变。

C-末端Ⅱ型胶原和骨桥蛋白与绝经后女性退变性膝骨关节炎疼痛的相关性

目的 探究C-末端Ⅱ型胶原(CTX-Ⅱ)和骨桥蛋白(OPN)与绝经后女性退变性膝骨关节炎疼痛的相关性。方法 以2019年2月-2021年7月北京市朝阳区中医医院骨伤科收治的96例绝经后女性退变性膝骨关节炎患者为研究对象根据Kellgren-Lawrence分级将患者分为轻度组、中度组与重度组。收集3组患者血清,采用酶联免疫吸附法试剂盒检测血清CTX-Ⅱ、OPN水平。采用视觉模拟评分法(Visual analogue scale, VAS)与西部安大略和麦克马斯特大学骨关节炎指数评分(Western Ontario and McMaster University Osteoarthritis Index, WOMAC)评估3组患者疼痛程度。采用单因素方差分析法分析3组患者临床指标差异,采用Pearson法分析CTX-Ⅱ、OPN水平与其他临床指标的相关性,多元逐步回归模型分析影响VAS、WOMAC评分的临床因素。结果 3组患者随着患者症状加重,血清CTX-Ⅱ、OPN水平与VAS、WOMAC评分均升高,差异有统计学意义(P<0.05),病程、年龄、绝经年龄、BMI差异无统计学意义(P>0.05)。血清CTX-Ⅱ、OPN水平与VAS评分、WOMAC评分均呈显著正相关(P<0.05),CTX-Ⅱ、OPN水平是影响VAS与WOMAC评分的临床指标。结论 CTX-Ⅱ、OPN水平升高与绝经后女性退变性膝骨关节炎患者疼痛呈显著正相关。

髓源树突状细胞对Ⅱ型胶原诱导关节炎小鼠CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞的影响

目的研究髓源树突状细胞(BMDCs)对Ⅱ型胶原诱导关节炎(CIA)小鼠CD4+CD25+调节性T细胞(Treg细胞)的影响及作用机制。方法从40只雄性BALB/c小鼠中,随机选择10只颈椎脱臼法处死,收集来自骨髓的单核细胞,用白细胞介素(IL)-4、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及脂多糖(LPS)分别诱导使其成为未成熟树突状细胞(imDC)及成熟树突状细胞(mDC),同时应用流式细胞术对细胞表型进行分析,采用免疫印迹法(Western blotting)检测共刺激分子CD80、CD86和主要组织相容性复合体(MHCⅡ)蛋白表达。另取上述小鼠30只,采用Ⅱ型胶原免疫,建立类风湿关节炎(RA)小鼠模型。在免疫之后第6天,按照随机数字表法把小鼠分为空白对照组(10只)、imDC组(10只)和mDC组(10只),分别沿小鼠尾静脉注射磷酸盐缓冲液(PBS)、imDC和mDC;于免疫之后第7天对3组小鼠进行免疫强化操作,于免疫强化之后第21天检测3组小鼠的关节变形情况,并测定关节炎指数(AI)评分;酶联免疫吸附试验(ELISA)及Western blotting测定小鼠血清转化生长因子(TGF)-β和IL-10的表达,流式细胞术检测小鼠脾脏组织Treg细胞比例。结果髓源单核细胞经IL-4+GM-CSF诱导后,其共刺激分子CD80、CD86、MHC-Ⅱ表达率分别为36.80%±5.86%、32.80%±6.42%、56.80%±5.36%,即为imDC;经IL-4+GM-CSF+LPS诱导后,其共刺激分子CD80、CD86、MHC-Ⅱ表达率分别为90.03%±7.38%、89.87%±7.10%、93.03%±7.76%,即为mDC;结果表明,树突状细胞(DC)成功诱导分化为imDC和mDC。强化免疫后第21天,imDC组AI评分[(7.28±1.45)分]显著高于mDC组[(13.78±2.14)分]和空白对照组AI评分[(12.31±1.83)分],差异有统计学意义(P<0.05);imDC组血清IL-10和TGF-β[(11.32±2.17)pg/mL和(27.15±4.71)pg/mL]显著高于mDC组[(5.47±1.83)pg/mL和(11.64±2.67)pg/mL]及空白对照组[(4.96±1.79)pg/mL和(12.06±2.25)pg/mL],差异均有统计学意义(P<0.05);imDC组脾脏Treg细胞比例(4.62%±1.03%)显著高于mDC组(3.05%±0.87%)和空白对照组(3.03%±0.91%),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论髓源imDC可缓解CIA小鼠的病情,促进抗炎细胞因子IL-10和TGF-β表达,加快Treg细胞增殖,从而导致免疫耐受。

甘草附子汤对胶原诱导性关节炎小鼠Th17和Treg细胞的影响

目的探讨甘草附子汤(Gancaofuzi decoction,GCFZ)对胶原诱导型关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠辅助性T细胞17(T helper cell 17,Th17)和调节性T细胞(Regulatory T cell,Treg)失衡的调节作用。方法该研究包括4组小鼠:正常对照组(Control组),模型对照组(CIA组),GCFZ 2.4 g·kg^(-1)组和GCFZ 4.8 g·kg^(-1)组。检测各组小鼠足肿胀度、关节炎指数;苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)观察小鼠踝关节组织病理学变化;流式细胞仪检测脾脏Th17和Treg细胞比例;酶联免疫吸附试验检测血清白介素17(interleukin-17,IL-17)、白介素6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)和白介素10(interleukin-10,IL-10)水平。结果与正常组比较,CIA组小鼠关节肿胀明显,关节炎评分显著上升(P<0.05);滑膜侵袭严重,关节软骨和骨破坏显著;Th17细胞百分比上调(P<0.05),Treg细胞百分比下调(P<0.05);血清IL-17、IL-6和TNF-α水平显著升高(P<0.05),而IL-10水平无明显差异(P>0.05);与CIA组比较,GCFZ各剂量组小鼠关节肿胀明显缓解,关节炎评分显著降低(P<0.05或P<0.01);滑膜的侵袭以及关节软骨破坏明显减轻。Th17细胞百分比下调(P<0.05),Treg细胞百分比上调(P<0.05);血清IL-17、IL-6和TNF-α水平显著降低,而IL-10水平明显升高(P<0.05)。结论GCFZ对CIA小鼠具有治疗作用,并调节血清中相关的细胞因子水平。潜在机制可能是通过恢复CD_(4)^(+)T淋巴细胞亚群Th17/Treg的失衡来介导的。

激光针灸对2型胶原蛋白诱导关节炎(CIA)模型大鼠滑膜组织病理改变的影响机制

目的:探讨激光针灸对2型胶原蛋白诱导的关节炎(CIA)模型大鼠滑膜组织病理改变的作用机制。方法:将40只大鼠进行编号分为空白对照组、模型组、药物治疗组和激光针灸治疗组。激光治疗组采用足三里和肾俞穴位进行针灸15次,观察各组大鼠足肿胀程度并对各组大鼠的关节进行评分。提取大鼠的踝关节滑膜组织行HE染色,光镜下观察滑膜组织增生、炎性细胞浸润、巨噬细胞增生及纤维组织增生的情况。结果:模型组的4种病理学组织评分和总评分均高于空白对照组和药物、激光针灸治疗组,差异有统计学意义;模型组足肿胀程度及关节评分高于空白对照组,差异有统计学意义。药物治疗组和激光治疗组各指标之间比较差异无统计学意义。结论:激光针灸治疗CIA大鼠能有效地抑制CIA大鼠踝关节滑膜组织的增生,其疗效与药物治疗相当。

松萝提取物对胶原诱导性关节炎大鼠高迁移率族蛋白B1介导的细胞自噬及炎症因子的影响

目的:研究松萝提取物对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠滑膜细胞中凋亡相关因子的影响,进一步探讨松萝提取物对CIA大鼠关节炎症及高迁移率族蛋白B1(HMGB1)介导的细胞自噬的影响。方法:将54只Wistar雌性大鼠随机分为空白对照组,模型对照组,羟氯喹组,松萝提取物低、中、高剂量组,每组9只。松萝提取物低、中、高剂量组给药剂量分别为2 mg·kg^(-1)、6 mg·kg^(-1)、54 mg·kg^(-1),羟氯喹组给药剂量为36 mg·kg^(-1)。建立CIA大鼠模型后,连续灌胃给药28 d。ELISA法检测血清中HMGB1、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度,RT-PCR检测HMGB1、Beclin1、PI3K C3 m RNA的表达,Western Blot法检测HMGB1、Beclin1、PI3K C3蛋白表达。结果:与空白对照组比较,各模型组HMGB1、TNF-α、IL-1β含量均增高,HMGB1、PI3K C3蛋白表达上升,Beclin1蛋白表达下降,差异有统计学意义(P<0.05);与模型对照组比较,松萝提取物中、高剂量组和羟氯喹组HMGB1、TNF-α、IL-1β含量均降低,且HMGB1、PI3K C3蛋白表达下降,Beclin1蛋白表达上升,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:松萝提取物通过上调Beclin1蛋白,下调HMGB1、PI3K C3相关蛋白的表达,调节细胞自噬,降低CIA大鼠血清中HMGB1、IL-1β、TNF-α浓度,减轻关节炎症。

青藤碱配伍芍药苷协同增效抗胶原诱导性关节炎作用机制研究

目的探讨青藤碱配伍芍药苷抗胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)药效作用及其机制。方法将60只雌性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、甲氨蝶呤组(1 mg/kg)、青藤碱组(50 mg/kg)、芍药苷组(120 mg/kg)和青藤碱(50 mg/kg)配伍芍药苷(120 mg/kg)组(青芍配伍组),每组10只。除正常组外,其余大鼠尾根部皮内多点注射牛Ⅱ型胶原/非完全弗氏佐剂乳剂建立CIA模型。正常组和模型组大鼠灌胃等体积蒸馏水,用药组灌胃相应药物,连续30 d。造模后,每3天检测大鼠后足肿胀容积、关节炎指数评分及体质量;治疗结束后,CT检测大鼠关节骨破坏情况;HE染色观察踝关节病理变化;ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)含量;Western blot法检测关节骨组织基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)和基质金属蛋白酶抑制因子-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)的表达水平。结果与正常组相比,模型组大鼠足肿胀容积、关节炎指数评分明显增加(P<0.01),体质量降低(P<0.01),足趾各关节骨侵蚀严重,关节腔隙狭窄甚至消失,血清TNF-α、IL-1β及关节骨组织MMP-2、MMP-9、TIMP-1蛋白表达均增高(P<0.01)。与模型组比较,甲氨蝶呤组、青藤碱组、芍药苷组和青芍配伍组大鼠足肿胀容积及关节炎指数评分均降低(P<0.01),体质量增加(P<0.01),骨破坏程度均明显减轻,血清TNF-α、IL-1β水平及关节骨组织MMP-2、MMP-9、TIMP-1蛋白表达均降低(P<0.01)。与青藤碱组或芍药苷组比较,青芍配伍组大鼠足肿胀容积及关节炎指数评分降低(P<0.01),体质量增加(P<0.01),骨破坏程度减轻,TNF-α、IL-1β水平及关节骨组织MMP-2、MMP-9、TIMP-1蛋白表达降低(P<0.01)。结论青藤碱配伍芍药苷对CIA具有较强的治疗作用,在一定程度上比单用青藤碱或芍药苷的抗关节炎效果明显。其机制可能与抑制TNF-α、IL-1β表达,降低关节骨组织MMP-2、MMP-9表达,同时促进TIMP-1表达有关。

胶原结合域-骨形态发生蛋白2-胶原软骨支架制备及其成软骨诱导

背景:天然骨形态发生蛋白2在体内弥散和降解速度较快,降低了局部浓度和治疗效果,单纯将骨形态发生蛋白2与组织工程支架复合后不能在体内长期停留,无法达到良好的缓控释效果。目的:制备并检测胶原结合域-骨形态发生蛋白2-胶原软骨支架的生物性能及成软骨诱导效果。方法:提取SD大鼠鼠尾胶原,采用真空冷冻干燥及化学交联法制备胶原软骨支架。通过快速克隆C112-同源重组法构建表达胶原结合域-骨形态发生蛋白2质粒,通过基因工程构建并导入大肠杆菌,分离纯化胶原结合域-骨形态发生蛋白2。将天然骨形态发生蛋白2与胶原结合域-骨形态发生蛋白2分别与胶原软骨支架结合,检测支架中骨形态发生蛋白2释放水平,采用CCK-8法及F-Actin染色法检测胶原结合域-骨形态发生蛋白2-胶原软骨支架的生物相容性;将骨髓间充质干细胞分别种植在两种胶原软骨支架上进行成软骨诱导,检测其成软骨诱导活性。结果与结论:①胶原结合域-骨形态发生蛋白2与胶原软骨支架的结合率高于天然骨形态发生蛋白2(P<0.05);体外浸泡于PBS中7 d,胶原结合域-骨形态发生蛋白2-胶原软骨支架中骨形态发生蛋白2的释放量小于天然骨形态发生蛋白2-胶原软骨支架(P<0.05);CCK-8实验及F-Actin染色结果显示,胶原结合域-骨形态发生蛋白2-胶原软骨支架无明显细胞毒性,具有良好的生物相容性;②成软骨诱导14 d后的ELISA检测显示,胶原结合域-骨形态发生蛋白2-胶原软骨支架组聚集蛋白聚糖、Ⅱ型胶原蛋白A1的表达均高于天然骨形态发生蛋白2-胶原软骨支架组(P<0.05);扫描电镜下可见,两组支架孔隙内壁上均可见较多骨髓间充质干细胞贴附生长,细胞形态及大小一致,排列紧密,未出现细胞碎裂或形态异常;③结果表明,胶原结构域-骨形态发生蛋白2-胶原软骨支架具有良好的生物性能及成软骨诱导活性。

益肾蠲痹丸对胶原诱导性关节炎小鼠血清炎症因子及肠道菌群的影响

目的研究益肾蠲痹丸对胶原诱导性关节炎小鼠(CIA)血清炎症因子和肠道菌群的影响,从肠道微生态角度探讨其治疗类风湿关节炎的作用机制。方法根据随机数字表法将18只BALB/c小鼠分为空白组、模型组、益肾蠲痹组,每组6只。模型组和益肾蠲痹组小鼠采用尾部注射鸡Ⅱ型胶原和弗氏完全佐剂混合液方法构建CIA模型,第28天造模成功后,益肾蠲痹组开始给予益肾蠲痹丸浓缩剂灌胃,空白组和模型组给予等体积的生理盐水灌胃,均连续灌胃4周。记录3组小鼠造模第28天和灌胃2周、4周后的体重及关节炎指数评分;灌胃4周后,ELISA法检测血清白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-17A(IL-17A)水平,HE染色观察关节组织病理学形态,16SrDNA法进行肠道菌群分析。结果灌胃2周和4周后,模型组小鼠体重均明显低于空白组(P均<0.05),而益肾蠲痹丸组小鼠体重均明显高于同期模型组(P均<0.05)。灌胃2周后,模型组和益肾蠲痹组小鼠关节炎指数评分比较差异无统计学意义(P>0.05);灌胃4周后,益肾蠲痹组小鼠关节炎指数评分明显低于模型组(P<0.05)。灌胃4周后,模型组小鼠血清IL-10水平明显低于空白组(P<0.05),血清IL-17A水平明显高于空白组(P<0.05),关节腔内见滑膜细胞增生和血管翳生成,肠道菌群丰度和多样性显著下降,菌群结构也发生明显变化;与模型组比较,益肾蠲痹组小鼠血清IL-10水平明显升高(P<0.05),IL-17A水平明显降低(P<0.05),关节腔内无滑膜细胞增生和血管翳,肠道菌群丰度和均匀度均明显增加,且物种差异明显。结论益肾蠲痹丸对CIA小鼠具有显著抗炎和调节肠道内菌群的丰富度和多样性作用,推测其调节肠道内微生态的作用机制可能与调节Th17/Treg的平衡相关。

胶原三螺旋重复蛋白-1与类风湿关节炎疾病活动度的相关性分析

目的:探究类风湿关节炎(RA)患者血清胶原三螺旋重复蛋白-1(CTHRC1)水平与疾病活动度的关系。方法:ELISA检测122例RA患者和61例健康体检者的血清CTHRC1水平。应用DAS28-ESR将RA患者分为非活动性RA组和活动性RA组,Spearman相关系数和二元Logistic回归分析CTHRC1浓度与RA疾病活动度的相关性。结果:①活动性RA组CTHRC1浓度明显高于非活动性RA组(P<0.001),且与复合疾病活动度评分及大多数指标呈正相关;②血清CTHRC1水平诊断活动性RA组和非活动性RA组的曲线下面积(AUC)为0.843;③二元Logistic回归分析显示CTHRC1是与RA病情严重程度相关的独立危险因素,OR(95%CI)为1.010(1.001~1.012)。结论:RA患者CTHRC1水平显著升高并与疾病活动度相关。因此,CTHRC1可能成为评估RA疾病活动性的一种新型生物标志物。

乌梢蛇Ⅱ型胶原蛋白调控胶原诱导性关节炎小鼠肠系膜淋巴结Treg/Th17平衡

目的探讨乌梢蛇Ⅱ型胶原蛋白(Zaocys typeⅡcollagen,ZCⅡ)对胶原诱导性关节炎(Collagen-induced arthritis,CIA)小鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞(mesenteric lymph node lymphocytes,MLNLs)Treg/Th17细胞及其细胞因子的影响。方法鸡Ⅱ型胶原蛋白小鼠尾根部皮下注射,诱导CIA模型;胃蛋白酶消化法提取ZCⅡ,口服高、中、低剂量ZCⅡ干预。视觉评分法评价关节肿胀,HE染色评价膝关节组织病理学;分离小鼠MLNLs,流式细胞术(FCM)检测Treg和Th17细胞的比率;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测MLNLs培养上清中TGF-β和IL-17的活性。结果与正常组比较,CIA小鼠关节炎及组织病理学评分升高(P<0.05),MLNLs中Treg和Th17的比率及其分泌TGF-β和IL-17水平上升(P<0.05)。与CIA模型组比较,不同剂量ZCⅡ干预组关节炎及组织病理学评分降低(P<0.05),MLNLs中Treg细胞的比率上升,Th17细胞的比率下降(P<0.05),MLNLs分泌TGF-β水平上升,分泌IL-17水平下降(P<0.05)。结论口服ZCⅡ能够改善CIA小鼠关节炎及组织病理学评分;ZCⅡ可能通过调节MLNLs中Treg/Th17比率及其细胞因子的水平,重新诱导CIA小鼠的免疫平衡,缓解关节炎症。