miRNA-424-5p靶向VEGFA对胎衣不下奶牛胎盘胶原蛋白降解的影响

【目的】通过探究miRNA-424-5p对奶牛母体胎盘组织胶原蛋白降解的影响,进而明确miRNA-424-5p对奶牛胎衣不下(retained fetal membranes,RFM)发生的调控作用及机制。【方法】检测胎衣正常排出与胎衣不下奶牛母体胎盘组织miRNA-424-5p表达水平,采用qRT-PCR和Western blot方法进行胎衣正常排出与胎衣不下奶牛的母体胎盘组织VEGFA、MMP-2、MMP-9、COL-IV的表达水平检测。应用生物信息学分析对miRNA-424-5p进行靶基因预测,并通过双荧光素酶试验验证miRNA-424-5p与VEGFA的靶向关系。在奶牛子宫内膜上皮细胞中转染miRNA-424-5p mimics和miRNA-424-5p inhibitor进行过表达和沉默miRNA-424-5p。采用免疫荧光技术观察VEGFA在奶牛子宫内膜上皮细胞的表达变化,qRT-PCR和Western blot检测VEGFA、MMP-2、MMP-9、COL-IV的mRNA与蛋白表达水平的变化。【结果】与健康组相比,RFM组母体胎盘组织中的miRNA-424-5p mRNA表达水平显著升高(P<0.01),VEGFA、MMP-2、MMP-9 mRNA与蛋白表达水平极显著降低(P<0.01),COL-IV mRNA与蛋白表达水平极显著升高(P<0.01)。miRNA-424-5p的潜在靶基因共有152个,并经双荧光素酶试验结果证实VEGFA是miRNA-424-5p的靶基因。过表达和沉默miRNA-424-5p后,免疫荧光结果显示,与对照组相比miRNA-424-5p mimics组VEGFA的表达较低,而miRNA-424-5p inhibitor组VEGFA表达较高;qRT-PCR和Western blot结果显示,过表达miRNA-424-5p,靶基因VEGFA mRNA与蛋白表达水平极显著降低,基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9 mRNA与蛋白表达水平极显著降低(P<0.01),胶原蛋白COL-IV mRNA与蛋白表达水平极显著升高(P<0.01),而沉默miRNA-424-5p时VEGFA、MMP-2、MMP-9 mRNA与蛋白表达显著升高(P<0.01),COL-IV mRNA与蛋白表达水平极显著降低。【结论】miRNA-424-5p可靶向VEGFA调控MMPs表达、胶原蛋白的分解从而引起细胞外胶原降解障碍,是引起胎衣不下发生的重要因素。

铬革屑中胶原蛋白降解物的提取与纯化

碱法从含铬革屑提取的胶原蛋白降解物中铬含量较高,限制了其循环利用价值。因此,有必要对废铬屑提取的胶原蛋白做进一步纯化。通过对胶原蛋白降解物进行脱钙、透析等处理,分析蛋白粉灰分以及铬、钙含量。结果表明:脱钙处理并不能使蛋白粉中的铬含量降低,透析使蛋白粉中的铬含量降低了76.7%,说明铬及其化合物主要存在于低分子质量胶原蛋白降解物中。

理性设计降低碱性蛋白酶的胶原降解活力

以克劳氏芽胞杆菌来源的碱性蛋白酶(PRO)为研究对象,运用HotSpotWizard3.0设计了PRO在Gly97-Gly102loop区的突变库,筛选得到了胶原蛋白降解活力显著降低的G97E突变体.G97E突变体的碱性蛋白酶活力和胶原蛋白降解活力分别为野生型PRO的91.97%和65.84%;最适温度和最适pH分别为60℃和pH10.0;其稳定性相比于野生型PRO无显著差异.综上所述,本研究利用理性设计技术,获得了在碱性蛋白酶活力基本保持不变的情况下,胶原蛋白降解活力显著降低的G97E突变体,这个新酶品种的开发和工业化生产对于扩大PRO在皮革工业中的应用具有重要意义.

铬革屑降解制备木材胶粘剂研究

以铬革屑碱法降解制得的铬革屑降解物为原料,环氧氯丙烷为交联剂,制备交联型蛋白基木材胶粘剂,通过正交试验研究环氧氯丙烷用量、反应温度、反应时间和pH值对胶粘剂性能的影响结果表明:体系的pH值对胶粘剂的性能影响最大,当环氧氯丙烷(ECH)用量为4%,反应温度70℃,反应时间2h,体系pH值为9时,制得的木材胶粘剂性能较好,耐水性显著提高,且制得的胶合板符合国家标准GB/T9846-2015.

骨代谢标志物在多发性骨髓瘤中的临床应用

目的探讨多发性骨髓瘤(MM)患者血清Ⅰ型胶原蛋白羧基端β降解产物(β-CTX)、Ⅰ型前胶原氨基端延长肽(PINP)、N-端骨钙素(N-MID)水平及其临床意义。方法采用电化学发光法测定100例MM患者和40例对照组的血清β-CTX、PINP、N-MID水平,对比分析不同临床分期β-CTX、PINP、N-MID水平的变化。结果 MM组血清β-CTX、PINP、N-MID水平与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。MM患者不同临床分期结果表明,分期越晚PINP、N-MID越低,β-CTX越高。结论检测血清β-CTX、PINP、N-MID水平可用于评价MM患者骨损害程度,骨代谢标志物可作为MM的预后评价指标。

β-CTX、T-PINP检测在评估骨髓瘤骨病的临床价值

目的探讨血清骨代谢物检测在多发性骨髓瘤骨病(MBD)的诊断和病情监测中的意义和价值。方法按治疗方案将MBD患者分为含硼替佐米新药治疗组(试验组)和传统化疗组如VAD方案(对照组),采用电化学发光法检测两组治疗前及治疗后6个月骨代谢标志物β-胶原特殊序列(β-CTX)、总Ⅰ型前胶原氨基端延长肽(PINP)、骨钙素(N-MID)和谷氨酰氨基转移酶(ALP)水平的变化。结果试验组治疗后β-CTX的浓度值明显比治疗前和对照组低(P<0.05),T-PINP、N-MID的浓度值明显比治疗前和对照组治疗后的高(P<0.05)。对照组骨代谢相关指标比较以及试验组治疗后ALP、钙离子比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论血清骨代谢物水平的变化可作为MDB疗效监测和预后判断的辅助指标,BD方案治疗能够提高MBD的疗效。

骨代谢标志物在多发性骨髓瘤中的临床应用

目的:探讨多发性骨髓瘤(MM)病人血清中Ⅰ型前胶原氨基端延长肽(PINP)和Ⅰ型胶原蛋白羧基端β降解产物(β-CTX)水平及其临床意义。方法:利用电化学发光法来测定62例MM病人(MM组)和50名健康体检者(对照组)的血清PINP及β-CTX水平,比较不同临床分期的MM病人血清PINP和β-CTX水平的变化。结果:MM组病人血清PINP水平低于对照组(P <0. 01),β-CTX水平高于对照组(P <0. 01)。MM病人Ⅲ期β-CTX水平较Ⅰ期升高(P <0. 05),Ⅱ期与Ⅰ期、Ⅲ期差异均无统计学意义(P> 0. 05),PINP水平在三期之间差异均无统计学意义(P> 0. 05)。结论:血清PINP和β-CTX水平可用于评价MM病人的骨破坏程度,β-CTX水平较PINP对MM病人的预后评价更为敏感。

地榆治疗皮肤光老化机制的网络药理学分析及验证

目的 运用网络药理学、分子对接技术及动物实验研究地榆抗皮肤光老化的活性成分及作用机制。方法 通过TCMSP数据库筛选地榆的活性成分及靶点;检索Drugbank、GeneCards、OMIM等数据库获取光老化疾病的靶点;采用STRING分析及Cytoscape软件构建蛋白相互作用(PPI)网络;对交集靶点进行GO功能注释和KEGG富集分析;选取核心靶点与对应的活性成分进行分子对接验证;最后,通过动物实验验证关键靶点。结果 筛选得到的地榆活性成分中,与光老化对应的潜在靶点158个,核心靶点11个,其中,包括MAPK、FOS靶点,GO、KEGG富集分析主要涉及PI3K/Akt通路、NF-κB通路,分子对接结果显示:槲皮素与MAKP1的结合最为稳定。动物实验表明:地榆提取物能显著改善小鼠皮肤光老化,并显著降低p-ERK1/2、p-p38、p-JNK、p-c-fos蛋白表达的水平。结论 地榆在治疗皮肤光老化方面具有多靶点和多通路的作用特点。