金属钴、铬离子对成骨细胞增殖及Ⅰ型胶原蛋白表达功能的影响

目的观察钴、铬离子对小鼠成骨细胞(MC3T3-E1)的细胞毒性及Ⅰ型胶原蛋白合成的影响,探讨钴、铬离子对骨代谢功能的影响机制。方法钴、铬离子分别与小鼠成骨样MC3T3-E1细胞体外培养,噻唑蓝(MTT)法测定细胞活力。ELISA法检测培养上清液中Ⅰ型胶原蛋白含量、RT-PCR检测成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白m RNA的表达。结果 MTT结果显示,与对照组相比,钴、铬离子能明显抑制成骨细胞的细胞活力;成骨细胞暴露在钴铬离子下,与对照组相比,24h、48h后:Ⅰ型胶原蛋白的分泌分别下降45.3%、49.2%(P<0.05);Ⅰ型胶原蛋白m RNA表达分别下降26.8%、32.6%(P<0.05)。结论钴、铬离子可抑制成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白的分泌及其m RNA的表达,提示其对MC3T3-El细胞可能存在细胞毒性。

艾拉莫德联合甲氨蝶呤治疗难治性强直性脊柱炎疗效及对患者血清SOD、CTX-Ⅰ水平影响

目的:观察艾拉莫德联合甲氨蝶呤治疗难治性强直性脊柱炎的疗效及对患者血清超氧化物歧化酶(SOD)、Ⅰ-型胶原蛋白C末端肽(CTX-Ⅰ)的影响。方法:难治性强直性脊柱炎患者80例随机分为观察组(n=41)和对照组(n=39)。对照组给予甲氨蝶呤治疗,观察组给予艾拉莫德联合甲氨蝶呤治疗。两组疗程均为3个月。比较治疗前后两组患者的总有效率、晨僵时间、关节疼痛评分、胸廓扩张度,以及血清C反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)、SOD、CTX-Ⅰ水平变化,以及两组药品不良反应发生情况。结果:治疗后,观察组总有效率显著高于对照组(P<0.05)。治疗后两组晨僵时间、关节疼痛评分、胸廓扩张度,以及血清CRP、ESR、SOD、CTX-Ⅰ水平均较治疗前显著改善(P<0.05),且观察组各项指标均明显优于对照组(P<0.05)。两组药品不良反应发生率的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:艾拉莫德联合甲氨蝶呤治疗难治性强直性脊柱炎的疗效显著,安全性好,可缓解病情进展,改善临床症状和生活质量,清除氧自由基,改善骨代谢。

督灸联合补肾祛寒化湿方治疗强直性脊柱炎的临床疗效及对患者血清CTX-I、DKK1水平的影响

目的:观察督灸联合补肾祛寒化湿方对强直性脊柱炎(AS)的临床疗效及对患者血清Ⅰ-型胶原蛋白C末端肽(CTX-Ⅰ)、Dickkopf1蛋白(DKK1)水平的影响。方法:选取160例AS患者,按信封抽签法分为A组、B组、C组及D组,每组40例。A组给予常规西药对症治疗,B组在A组基础上联合督灸治疗,C组在A组基础上联合补肾祛寒化湿方治疗,D组在A组基础上给予督灸联合补肾祛寒化湿方治疗,疗程均为3个月。比较4组中医证候积分、治疗前后症状改善情况及血沉(ESR)、C-反应蛋白(CRP)、CTX-Ⅰ、DKK1水平。结果:治疗后,4组中医证候积分均较治疗前降低(P<0.05),中医证候积分从低至高依次为D组、C组、B组、A组,D组中医证候积分明显低于A组、B组及C组(P<0.05)。治疗后,4组胸廓活动度均较治疗前增大(P<0.05),胸廓活动度从大到小依次为D组、C组、B组、A组;4组枕墙距、指地距均较治疗前缩小(P<0.05),巴氏强直性脊柱炎活动指数(BASDAI)及巴氏强直性脊柱炎功能指数(BASFI)均较治疗前降低(P<0.05),D组枕墙距、指地距、BASDAI及BASFI均低于A组、B组及C组(P<0.05),B组及C组枕墙距、指地距、BASDAI及BASFI均低于A组(P<0.05)。治疗后,4组ESR、CRP、CTX-Ⅰ、DKK1水平均较治疗前降低(P<0.05),D组ESR、CRP、CTX-Ⅰ、DKK1水平均低于A组、B组及C组(P<0.05),B组及C组ESR、CRP、CTX-Ⅰ、DKK1水平均低于A组(P<0.05)。结论:督灸联合补肾祛寒化湿方可减轻AS患者的炎症反应,调节CTX-Ⅰ、DKK1表达,改善机体活动功能。

姜黄素对单侧输尿管梗阻大鼠细胞外基质表达影响的实验研究

目的观察姜黄素对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织细胞外基质成分胶原蛋白-Ⅰ(Collagen-Ⅰ,Col-Ⅰ)、胶原蛋白-Ⅲ(Collagen-Ⅲ,Col-Ⅲ)和纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)表达的影响,分析其抗纤维化的机制。方法采用大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型。将32只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,姜黄素1组和姜黄素2组。对模型组和治疗组大鼠行左侧输尿管结扎建立单侧输尿管梗阻的动物模型。姜黄素1治疗组于术后第2天给予姜黄素100mg.kg-1.d-1灌胃,姜黄素2治疗组于术后第10天给予姜黄素100 mg.kg-1.d-1灌胃。术后28 d处死大鼠,取梗阻侧肾组织行HE和Masson染色以观察各组大鼠肾组织病理改变。用免疫组化染色方法观察Col-Ⅰ,Col-Ⅲ和FN的表达分布。结果模型组肾小管间质损伤程度、胶原的表达均高于假手术组。姜黄素能明显改善大鼠肾脏病理改变,减少细胞外基质沉积。结论姜黄素可通过下调Col-Ⅰ,Col-Ⅲ和FN在肾组织的表达,从而减少细胞外基质的过度聚集,抑制或减缓肾小管间质纤维化的发生发展。

慢性氟中毒大鼠肝组织Col-Ⅰ、Col-Ⅲ及α-SMA的表达

目的观察慢性氟中毒大鼠肝组织胶原蛋白-Ⅰ型(Col-Ⅰ)、胶原蛋白-Ⅲ型(Col-Ⅲ)及α-平滑肌动蛋白(α-SMA)表达情况,探讨慢性氟中毒是否有导致大鼠肝纤维化的作用。方法将48只SD大鼠按体重(90~100 g)采用随机数字表法分为对照组(饮用水氟离子浓度<0.5 mg/L),低、中、高浓度氟组(饮用水氟离子浓度分别为5.0、50.0、100.0 mg/L),每组12只(雌、雄各半),饲养6个月。采用氟离子选择电极法检测骨氟、尿氟含量;苏木精-伊红(HE)染色及马松染色法光镜下观察肝组织病理形态学改变及胶原纤维沉积情况;实时荧光定量PCR及免疫组织化学染色法观察肝组织Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、α-SMA mRNA及蛋白表达情况。结果4组大鼠骨氟、尿氟[骨氟:(92.52±5.64)、(112.21±11.86)、(142.99±7.87)、(235.63±11.55)mg/kg,尿氟:(5.47±0.88)、(17.78±1.48)、(54.16±5.96)、(121.11±6.32)mg/L]比较,差异均有统计学意义(P均<0.001)。光镜下,随着染氟浓度增加,肝细胞水肿程度加重,中央静脉周围及汇管区胶原纤维沉积显著增多。低、中、高浓度氟组大鼠Col-ⅠmRNA表达水平(1.20±0.09、1.80±0.08、1.58±0.06)均高于对照组(1.00±0.00,P均<0.05);中、高浓度氟组大鼠Col-Ⅲ、α-SMA mRNA表达水平(Col-Ⅲ:1.15±0.14、1.64±0.24,α-SMA:1.69±0.02、2.34±0.06)均高于低浓度氟组(Col-Ⅲ:0.59±0.17,α-SMA:0.80±0.13,P均<0.05)。随着染氟浓度增加,大鼠肝组织Col-Ⅰ(0.00±0.00、0.03±0.01、0.08±0.01、0.13±0.02)、Col-Ⅲ(17803.05±3221.16、47523.15±3490.10、127786.35±13008.86、237233.03±47614.63)、α-SMA(516.83±181.18、2885.03±864.92、11186.94±2394.08、37182.43±12390.59)蛋白表达水平均增加(P均<0.05)。结论长期摄入过量氟可能引起大鼠肝脏中央静脉周围及汇管区胶原纤维产生增多,进而引起肝纤维化形成。

补骨脂酚对TGF-β诱导人肝星状细胞损伤的保护作用

目的：探讨补骨脂酚对转化生长因子-β（TGF-β）诱导人肝星状细胞损伤的保护作用及其机制。方法：通过噻唑蓝（MTT）比色法检测各组人肝星状细胞活性,筛选出补骨脂酚安全有效浓度;本实验分为空白组、模型组、补骨脂酚组（1×10^-5mol·L^-1）及雌二醇组（1×10^-6mol·L^-1）,同样检测各组细胞的活性,除空白组外,其余各组均加入10μg·L-1TGF-β诱导人肝星状细胞损伤;分别采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组细胞中超氧化物歧化酶（SOD）,谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）,丙二醛（MDA）的水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测细胞中基质金属蛋白酶-1（MMP-1）,胶原蛋白-Ⅰ（Col-Ⅰ）mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞中MMP-1,Col-Ⅰ蛋白的表达水平。结果：与模型组比较,1×10^-5mol·L^-1补骨脂酚显著提高TGF-β诱导人肝星状细胞及细胞中SOD,GSH-Px活性,显著降低细胞中MDA含量及Col-Ⅰ,MMP-1 mRNA和蛋白的表达（P〈0.01）。结论：补骨脂酚对TGF-α诱导人肝星状细胞损伤的保护作用,主要是通过提高细胞中抗氧化酶的活性、降低细胞中MMP-1,Col-ⅠmRNA和蛋白的含量。